Тонкослойная и бумажная хроматография

Состав подвижной фазы: количество растворителя, содержание которого в смеси наименьшее, может изменяться в пределах ± 30 % (относительное содержание) или ± 2 % (абсолютное содержание) в зависимости от того, какая из величин будет больше. Абсолютное содержание других веществ не может быть изменено более чем на 10 %.

Пример 1: для вещества, содержание которого составляет 10 % подвижной фазы, изменение относительного содержания на 30 % приведет к изменению его абсолютного содержания до 7–13 %, тогда как изменение на 2 % по абсолютному содержанию приведет к изменению абсолютного содержания до 8–12 %. Допустимое изменение по относительному содержанию больше, чем допустимое изменение по абсолютному содержанию. Таким образом, допускается изменение содержания 7–13%.

Пример 2: для вещества, содержание которого 5 % подвижной фазы, изменение относительного содержания на 30 % приведет к изменению его абсолютного содержания до 3,5–6,5 %, тогда как изменение на 2 % по абсолютному содержанию приведет к изменению его абсолютного содержания в подвижной фазе до 3–7 %. В этом примере допустимое изменение по абсолютному содержанию больше, чем допустимое изменение по относительному содержанию, и допустимым диапазоном содержания является 3–7 %.

pH среды водного компонента подвижной фазы: ± 0,2 pH, если иное не указано в нормативном документе, или ± 1,0 pH в случаях испытания неионизируемых веществ.

Концентрация солей в буферном веществе подвижной фазы: ± 10 %.

Наносимый объём: при использовании пластинок с малым размером частиц сорбента (2-10 мкм) наносимый объём может быть изменен на 10–20 % от заявленного объёма.

Жидкостная хроматография: изократическое элюирование

Состав подвижной фазы: количество растворителя, содержание которого в смеси наименьшее, может изменяться в пределах ± 30 % (относительное содержа­ние) или ± 2 % (абсолютное содержание) в зависимости от того, какая из величин будет больше. Абсолютное содержа­ние других веществ не может быть изменено более чем на 10 %.

pH среды водного компонента подвижной фазы: ± 0,2 pH, если иное не указано в нормативном документе, или ± 1,0 pH в случаях испытания неионизируемых веществ.

Концентрация солей в буферном веществе подвижной фазы: ±10 %.

Скорость потока подвижной фазы: ± 50 %, большая степень изменений допустима при одновременном изменении размеров колонки. При необходимости одновременного изменения размеров колонки и скорости потока сначала рассчитывается номинальная скорость потока для колонки, размеры которой отличаются от приведенной в нормативном документе, а затем допускается корректировка полученного значения скорости потока на ± 50 %.

Параметры колонки:

Неподвижная фаза:

- Замена типа неподвижной фазы недопустима (например, недопустима замена фазы С18 на фазу С8);

- размер частиц: максимальное уменьшение размера частиц 50 %, увеличение не допускается.

Размеры колонки:

длина колонки: ± 70 %,

внутренний диаметр колонки: ± 25 %.

При изменении размеров колонки скорость потока пересчитывают, используя следующее уравнение:

F ₁ скорость потока, указанная в нормативном документе (мл/мин),

F₂ скорректированная скорость потока, (мл/мин),

l₁ длина колонки, указанная в нормативном документе (мм),

l₂ длина используемой колонки (мм),

d₁ внутренний диаметр колонки, указанный в нормативном документе (мм),

d₂ внутренний диаметр используемой колонки (мм).

Температура: ± 10 % от указанной рабочей температуры, если не указано иначе.

Длина волны детектора: изменения не допускаются.

Вводимый объём пробы: может быть уменьшен при условии, что чувствительность фактически применяемой хроматографической системы (минимально определяемая концентрация) и прецизионность системы в условиях повторяемости для определяемых соединений остаются удовлетворительными.

Жидкостная хроматография: градиентное элюирование

Изменение хроматографических условий для систем с градиентом требует большей осторожности, чем для изократических.

Состав подвижной фазы/профиль градиентного элюирования: незначи­тельные изменения состава подвижной фазы и системы градиента являются приемлемыми при условии, что:

- выполнены требования пригодности системы;

- основной пик элюируется в пределах ± 15 % от обозначенного времени удерживания;

- элюирующая способность конечного состава подвижной фазы не менее предписанного состава.

Если при использовании градиентного элюирования не может быть достигнуто соответствие требованиям пригодности системы, рекомендуется оценить объем задержки градиента или сменить используемую колонку.

Объем задержки градиента. Конфигурация используемого оборудования может значительно изменить разрешение, указанные абсолютные и относительные времена удерживания. Это может произойти из-за отличия объема задержки градиента используемой системы от объема задержки градиента системы, с помощью которой проводилась валидация методики. В нормативном документе часто перед началом программы градиента включена изократическая стадия, чтобы можно было адаптировать систему к временным точкам градиента с учетом разницы объема задержки у системы, использованной для разработки методики, и у фактически использующейся системы. Решение о необходимости адаптации длительности изократической стадии для данного аналитического оборудования принимается пользователем. Если объем задержки, использованный при разработке методики, приведен в нормативном документе, то интервалы времени (t), указанные в таблице градиента, можно заменить адаптированными интер­валами времени (t_c), рассчитанными с помощью следующего уравнения:

,

где:

D – объем задержки (мл),

D ₀ – объем задержки, использованный при разработке методики (мл),

F – скорость потока (мл/мин).

Изократическая стадия, введенная с этой целью, может быть исключена, если имеются данные валидации по применению методики без этой стадии.

pH среды водного компонента подвижной фазы: изменения не допускаются.

Концентрация солей в буферном веществе подвижной фазы: изменения не допускаются.

Скорость потока: изменения допустимы при изменении размеров колонки.

Параметры колонки

Неподвижная фаза:

- замена типа неподвижной фазы недопустима (например, недопустима замена С18 на С8);

-размер частиц: изменения не допускаются

Размеры колонки:

-длина колонки: ± 70 %,

-внутренний диаметр колонки: ± 25 %,

При изменении размеров колонки скорость потока пересчитывают, используя следующее уравнение:

,

где:

F ₁ скорость потока, указанная в нормативном документе (мл/мин),

F₂ скорректированная скорость потока, (мл/мин),

l₁ длина колонки, указанная в нормативном документе (мм),

l₂ длина используемой колонки (мм),

d₁ внутренний диаметр колонки, указанный в нормативном документе (мм),

d₂ внутренний диаметр используемой колонки (мм).

Температура: ± 5 % от указанной рабочей температуры, если не указано иначе.

Длина волны детектора: изменения не допускаются.

Вводимый объём пробы: может быть уменьшен, при условии, что детектирование (предел количественного определения) и сходимость отклика (RSD площадей или высот) для пика (пиков) определяемых соединений остаются удовлетворительными.

Газовая хроматография

Параметры колонки

Неподвижная фаза: размер частиц: максимальное уменьшение на 50 %, увеличение не допускается (набивные колонки), толщина плёнки: от минус 50 % до плюс 100 % (капиллярные колонки).

Размеры колонки:

- длина колонки: ± 70 %,

- внутренний диаметр колонки: ± 50 %,

Скорость потока: ± 50 %.

Температура: ± 10%.

Вводимый объём пробы: может быть уменьшен при условии, что чувствительность фактически применяемой хроматографической системы и прецизионность системы в условиях повторяемости для определяемых соединений остаются удовлетворительными.

⇐ Предыдущая123

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: