Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!
МегаЛекции

Гибридизация позволяет выявить родство различных ДНК. Чем ближе родство, тем выше степень гибридизации.




Этапы гибридизации

-плавление ДНК

-перенос на нитроцеллюлозной фильтр

-фильтр помещают в раствор анализируемой ДНК

-отмывка не связавшейся ДНК

-анализ результатов гибридизации

6,

Длина молекулы ДНК эукариот многократно превышает размеры клетки, в связи с этим существуют несколько уровней ее организации

Голая ДНК - Такая ДНК обладает сверхчувствительностью к ДНКазам

Бусинка на ниточке - ДНК (около 160 п.н.) делает два витка вокруг нуклеосомы (кора). Нуклеосома содержит по две молекулы каждого из гистонов Н2А, Н2В, Н3 и Н4, т.е. состоит из восьми молекул. Размер ДНК между нуклеосомами (линкерная ДНК) составляет около 60 п.н.

30 нм – хроматиновая фибрилла - формируется в результате взаимодействия гистона Н1 с линкерной ДНК

Серия петельных доменов

Метафазная хромасома


7,

Эмбриональные клетки могут делиться до 80 раз. Клетка 70-летнего человека может делиться только 20-30 раз. Ограниченное деление клеток носит названия лимита Хейфлика. При иммортализации клеток происходит преодоление лимита Хейфлика. За 50 делений масса потомков одной клетки может составить 20 000 000 т. Ограничение числа делений клеток определяется организацией теломер на концах хромосом. Теломеры – структуры расположенные на концах хромосом. Состоят из повторяющихся коротких последовательностей ДНК. Теломеры у многих видов представлены высококонсервативными повторами ТТАГГГ. ДНК теломер не кодирует белки. У человека размер теломер может составлять от 2000 до 20 000 т.п.н. В процессе развития организма размер теломер уменьшается. Клетки, имеющие меньший размер теломер, имеют меньший потенциал делений. За наращивание теломер ответственен фермент – теломераза.


Природные РНК можно разделить на 2 группы: одноцепочечные и двухцепочечные РНК.

Двухцепочечные РНК состоят из двух нитей РНК, комплементарных друг другу. По своей организации двухцепочные РНК сходны с ДНК:

Они закручены в двойную правую спираль

Цепи РНК в них антипаралельны

Между комплементарными основаниями образованы водородные связи

Углеводнофосфатный скелет расположен снаружи спирали

Большинство природных РНК являются одноцепочечными.

Однако они в своей структуре могут иметь фрагменты двойной спирали, чередующиеся с линейными одноцепочечными участками. Фрагменты двойной спирали образованы комплементарными участками РНК. В некоторых случаях доля двухспиральных участков в РНК достигает 75-90 %.

 


9 вопрос БЕЛКИ И ФЕРМЕНТЫ, УЧАСТВУЮЩИЕ В РЕПЛИКАЦИИ ДНК В репликации ДНК принимают участие многочисленные белки и ферменты. Рассмотрим их основных представителей. ДНК-полимеразы ДНК-полимеразы осуществляют синтез ДНК. Субстратом для этих ферментов являются дНТФ: дАТФ, дГТФ, дЦТФ и дТТФ. Урав- нение реакции, катализируемой ДНК-полимеразами, в общем виде выглядит так: (дНМФ)n + дНТФ (дНМФ)n+1 + 2Фн

ДНК-полимеразы последовательно добавляют нуклеотиды к 3’ - концу полинуклеотидной цепи

Синтез новой цепи происходит в направлении от 5’-конца к 3’-концу. ДНК-полимераза может только наращивать цепь ДНК, начать же синтез ДНК с нуля она не в состоянии, для начала ее работы тре- буется затравка. В качестве затравки может выступать фрагмент ДНК или РНК. ДНК-полимераза способна удлинять цепь также только в присутствии цепи, играющей роль матрицы. Нуклеотиды присоединяются к затравке в соответствии с принципом комплементарности, напротив аденина всегда будет встраивается тимин, а напротив гуанина – цитозин.

ДНК-полимеразы способны копировать любую цепь ДНК, т.е. они не специфичны к последовательности нуклеотидов матрицы. Скорость ДНК-полимеразной реакции колеблется в пределах от 50 нуклеотидов в секунду у эукариот до 500 нуклеотидов в секунду у прокариот.

Главной задачей ДНК-полимераз является снятие точной копии с матрицы, в связи с этим они проверяют комплементарность каждо- го нуклеотида дважды: перед включением его в состав растущей це- пи и перед тем как включить следующий нуклеотид. Очередная фос- фодиэфирная связь образуется, если последний нуклеотид компле- ментарен матрице. Если включен некомплементарный нуклеотид, то он удаляется за счет 3 ® 5’-экзонуклеазной активности ДНК- полимеразы, и только после удаления некомплементарного нуклео- тида ДНК-полимераза продолжит наращивать цепь ДНК

Праймаза Праймаза катализирует матричный синтез короткой РНК- затравки (праймера) в направлении 5’→ 3’. Праймер использует ДНК-полимераза для инициации синтеза ДНК

Поделиться:





Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...