Серологические реакции, используемые с диагностической целью

1. Классическая реакция агглютинации с бактериальными антигенами (развернутая и на стекле).

2.Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее варианты (рНАг, рНАт).

3.Реакция Кумбса (для выявления неполных антител).

4.Реакция коагглютинации.

5.Реакция латекс-агглютинации.

6.Реакция агрегат-гемагглютинации.

7.Реакция иммунофлуоресцентного метода (прямого и непрямого).

8.Реакция связывания комплемента (РСК).

9.Реакция преципитации (в жидкой среде и в геле).
10. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР).

11. Реакции иммуноферментного метода (ИФМ).

12. Реакции радиоиммунного метода (РИМ).

 

При некоторых заболеваниях используются различные модификации этих методов.

С помощью этих реакций можно определять как наличие в исследуемом материале антигенов, так и антител к ним.

Реакция лизиса эритроцитов (гемолиза) осуществляется в определенной последовательности:

1) эритроциты (Э)+антитело (А) - образуется комплекс ЭА;

2)к комплексу ЭА присоединяются компоненты комплемента С1С4
в присутствии ионов Са⁺⁺ и температуре ниже 37⁰, образуется комплекс ЭА С1С4;

3) к комплексу ЭАС1С4 присоединяется компонент С2 в присутствии ионов Mg при 37⁰, образуется комплекс ЭА С1С4С2;

4)к комплексу ЭА С1С4С2 присоединяется компонент C3 при 37⁰
образуется комплекс ЭА С1С4С2СЗ;

5) к комплексу ЭА С1С4С2СЗ присоединяются компоненты С5, С6. а затем С7, С8, С9. После присоединения компонента С9 происходит гемолиз.

 

Схематически формула этой реакции такова:

1. Э+А ЭА

Ca⁺⁺

2. ЭА+С1С4 ЭА С1С4;

Mg⁺⁺ 37⁰

3. ЭА С1С4+С2 ЭА С1С4С2;

 

4. ЭА С1С4С2+С3 ЭА С1С4С2С3

 

5. ЭА С1С4С2С3+С5С6 ЭА С1С4С2С3С5С6

 

6. ЭА С1С4С2С3С5С6+С7С8С9

ЭА С1С4С2С3С5С6С7С8С9 гемолиз.

 

Система комплемента и ее основные функции

Комплемент - большая группа взаимодействующих между собой белков и гликопротеинов крови, имеющихся у всех позвоночных (белки С1-С9, различные факторы и инактиваторы, всего около 20 компонентов).

Существует три пути активации системы комплемента:

а)Классический, инициируемый комплексом антиген-антитело;

б)Альтернативный, инициируемый бактериальными эндотоксинами, пропердином и различными другими агентами, но протекающий без учас­тия компонентов С1, С4 и С2;

в)Механизм С1 -шунта, реализуется при дефиците С4-комлонента, требует активации С1-компонента.

 

Основные функции системы комплемента:

1.Лизис чужеродных клеток, включая бактерий.

2.Опсонизация чужеродных клеток, включая бактерий. Они становятся более доступными для макрофагов, благодаря феномену иммунного прилипания (он обусловлен прилипанием к клеткам СЗв и в меньшей степени С4в, С5в, С3вi; С2 компонентов и их фрагментов).

3.Стимуляция хемотаксиса (С5а, в меньшей степени СЗа, фрагмент Ва, комплекс С5в67).

4.Стимуляция фагоцитоза (благодаря присоединению к иммунному комплексу С1q или СЗв).

5.Повышение сосудистой проницаемости и усиление лейкоцитоза (С5а, СЗе).

6.Стимуляция внутриклеточных процессов анафилотоксинами С5а,
СЗа, в результате которой из мастоцитов выбрасываются биологически
активные соединения (гистамин, брадикинин, серотонин, лейкотриены
и т.п.), обусловливающие развитие воспаления.

Компоненты и регуляторы комплемента могут быть синтезированы самими иммунекомпетентными клетками.

Макрофаги синтезируют белки С1q, С2, СЗ, С4, С5, факторы В,Д, Р, ингибиторы - фактор 1, Н, С1 -инактиватор (гены С2, С4 и фактора В связаны с системой MHC).

 

Реакция Кумбса

При помощи реакций прямой и пассивной агглютинации определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами, так как, соединяясь с анти­геном, блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигена в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют специальную реакцию Кумбса. В реакции участвуют: а) сыворотка больного, в которой определяют неполные антитела; б) антиген-диагностикум; в) антиглобулиновая сыворотка - антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в два этапа: 1) взаимодействие антигена с не­полными антителами; 2) взаимодействие антиглобулиновой сыворотки (антиглобулиновых антител) с антителами, адсобрированными на анти­гене. В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают два одновалентных антитела, адсорбированных соответствен­но на двух антигенах, что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Перечень обязательных сведений, которые должны быть на этикет­ках лечебно-профилактических препаратов:

а)полное наименование препарата;

б)номер государственного контроля;

в)номер серии препарата;

г)срок годности;

д)дозировка.

Рис.5 Антиглобулиновая проба Кумбса для выявления неполных (моновалентных) антител.

Первый этап (1) – соединение моновалентных антител с антигенами (без агглютинации).

Второй этап (2) – добавление антиглобулиновой сыворотки приводит к агглютинации антигенов, покрытых моновалентным антителами.

Рис.6 Схема прямого (1) и непрямого (2) иммунофлуоресцентного метода.

Вакцины по состоянию входящих в них антигенов делят на:

1) живые (БЦЖ, туляремийная, бруцеллезная, сыпнотифозная, сибиреязвенная, гриппозная, коревая, полиомиелитная и т.д.);

2) убитые (против кишечных инфекций, лептоспирозов, коклюша и т. д.);

3) химические, в состав которых входят полные антигены (хими­ческая сорбированная брюшнотифозная).

По количеству входящих в них антигенов вакцины делят на: моновакцины, дивакцины, тривакцины, поливакцины.

Ассоциированные (комбинированные) вакцины представляют собой комплексные препараты из различных вакцин (и анатоксинов).

Анатоксины получают, добавляя к нативному экзотоксину 0,5% формалина. Смесь выдерживают в течение 3-4 недель при 38-40°. Анатоксин применяют для создания активного антитоксического иммуните­та. Концентрация анатоксина выражается в иммуногенных единицах (ИЕ) или в единицах связывания (ЕС). Одна ИЕ или ЕС- это то коли­чество анатоксина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей (АЕ) сыворотки дает инициальную флокуляцию.

Иммунные сыворотки делят на лечебно-профилактические и диагностические.

Для получения лечебно-профилактических сывороток иммунизируют крупных животных - лошадей, баранов, мулов, волов.

Для получения диагностических сывороток используют кроликов.

Лечебно-профилактические сыворотки делят на:

а) антибактериальные и

6) антитоксические

Антибактериальные сыворотки дозируются в миллилитрах (мл).

Антитоксические сыворотки дозируются в международных антитоксических единицах - МБ. Одна МЕ - количество сыврротки, нейтрализующее определенное количество доз токсина для животных определенного вида и веса. Количество МЕ сыворотки в I мл является ее титром. Титрование антитоксических сывороток проводят на животных и ин витро в реакции флокуляции.

Лечебно-профилактические сыворотки подвергаются очистке от балластных белков методом ферментативного гидролиза и последующего диализа (сыворотки-"Диаферм"). Эти сыворотки используют также для получения чистого концентрированного иммунного гаммаглобулина.

 

⇐ Предыдущая891011121314151617Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: