Пример вычисления фагоцитарного числа

Фагоцитарное число равно

б) Для определения опсоно-фагоцитарного числа под микроскопом ведут подсчет бактерий, поглощенных лейкоцитами. Подсчитывают общее количество бактерии, поглощенных 25 лейкоцитами. Частное от де­ления числа фагоцитированных микробов на 25 является фагоцитарным числом для испытуемой иммунной сыворотки. Таким же образом определяется фагоцитарное число нормальной (неиммунной сыворотки). Отно­шение фагоцитарного числа иммунной сыворотки к фагоцитарному числу нормальной сыворотки называется опсоническим индексом.

 

Фагоцитарное число в вашем исследовании равно_______________________

 

в)Методика определения завершенности фагоцитоза. 18-20-часовая агаровая культура бактерий (1 мл около I млрд. клеток) добавляется к исследуемой крови и смесь выдерживается в течение 30- 45 минут в термостате при 37⁰.

После этого готовят мазки для определения фагоцитарной актив­ности (ОФР).

Оставшуюся смесь (несколько капель) наносят на поверхность слабощелочного агара в чашке Петри, равномерно распределяют по площади 5x5 см и чашку помещают на 2 часа в термостат для подращи­вания бактерий.

Через 2 часа готовят препараты-отпечатки. Для этого вырезают из части агара, на которую наносили смесь лейкоциты-микробы, пла­стинку размером 2x4,5 см и помещают ее на предметное стекло той поверхностью, где нанесена смесь. После приготовления отпечатка с помощью пинцета пластинку сбрасывают, но так, чтобы не допустить ее скольжения по стеклу.

Препарат-мазок и препарат-отпечаток фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 25-30 минут (краску разводят перед употреблением из расчета 3 капли краски на I мл воды).

Для определения завершенности фагоцитоза в препарате-отпечатке подсчитывают 50 нейтрофилов и определяют процентное соотношение дезинтегрированных (разрушенных) и жизнеспособных клеток среди фагоцитированных микробов в лейкоците.

Погибшие бактерии при этом окрашены в розовый цвет или синий и находятся в разной стадии разрушения. Жизнеспособные клетки-более крупные и окрашены в интенсивно синий цвет.

§5. а)Прямой иммунофлуоресцентный метод.

Приготовить на предметном стекле из исследуемой культуры бактерий тонкий мазок (в густом мазке не удается отметить свечение отдельных клеток). Границы мазка отметить с тыльной стороны восковым карандашом. Подсушить препарат на воздухе и погрузить его в стакан­чик с 96° этиловым спиртом для фиксирования на 15 минут, а затем вновь подсушить на воздухе. После этого нанести на мазок каплю люминесцирующей сыворотки в рабочем разведении. (Рабочее разведение сухих люминесцирующих сывороток указано на этикетке ампулы). Препарат обрабатывается сывороткой в течение 15-20 минут при комнатной температуре. По окончании окраски каплю сыворотки стряхивают, а препарат промывают в течение 10 минут проточной водопроводной во­дой, затем подсушивают на воздухе и наносят на него каплю разведенного глицерина (9 частей глицерина +1 часть физиологического раст­вора). Накрывают препарат покровным стеклом, избыток жидкости уда­ляют фильтровальной бумагой.

микроскопию производят в люминесцентном микроскопе. При этом используют специальное нефлуоресцирующее иммерсионное масло.

При наличии в исследуемом материале бактерий, по отношению к которым люминесцирующая сыворотка содержит антитела, на темном фоне препарата обнаруживается специфическое яркое желто-зеленое свечение по периферии бактериальных клеток. Посторонние бактерии не светятся.

Для оценки интенсивности специфического свечения используют четырехкрестовую систему:

++++ сверкающая флуоресценция желтовато-зеленого цвета с четко выраженной формой клеток;

+++ яркая флуоресценция желто-зеленого цвета;

++ и + заметная, но слабо выраженная флуоресценция.

Положительным результатом считается флуоресценция, оценивае­мая

на ++++ и +++.

Иммунофлуоресцентный метод является методом ускоренной ориентировочной диагностики и должен сопровождаться полным бактериологическим исследованием.

б)Непрямой иммунофлуоресцентный метод предусматривает использование единой флуоресцирующей сыворотки - антиглобулиновой, содержащей антитела против кроличьих глобулинов. Как правило, диагностические специфические сыворотки являются кроличьими, поэтому флуоресцирующая антиглобулиновая сыворотка реагирует с любыми специфическими антителами (кроличьими глобулинами), которые при этом играют роль антигенов. Кроличьи глобулины (специфические антитела) связываются с гомологичными антигенами. На образовавшихся комплексах фиксируются флуоресцирующие антиглобулиновые антитела и вызывают их свечение в люминесцентном микроскопе.

 

Контрольные вопросы

В чем состоит принцип пассивной гемагтлютинации?

Какие преимущества имеет РПГА?

Какие компоненты участвуют в РПГА?

Что такое сенсибилизированные эритроциты?

Как определяют результаты РПГА?

Какова методика постановки реакции пассивной гемагглютинации?

Что такое комплемент?

Какую роль играет комплемент в реакциях иммунной сыворотки?

Как получают гемолитическую сыворотку?

Какова методика постановки реакции гемолиза?

Будет ли инактивированная (при 56° в течение 30 минут) гемоли­тическая сыворотка лизировать эритроциты?

Что такое гемолитическая (индикаторная) система?

Если конечным результатом РСК является гемолиз - реакция положительная или отрицательная?

Какие компоненты участвуют в РСК?

Для чего необходимо определение рабочих доз антигена и компле­мента?

Как определяют рабочую дозу комплемента?

Почему испытуемая сыворотка должна быть инактивирована?

Как ставят основной опыт РСК?

Если в сыворотке больного отсутствуют антитела к антигену, ка­ким будет результат РСК?

Что называется титром гемолитической сыворотки?

В каком разведении берется в основной опыт гемолитическая сы­воротка?

Какие контроли используются в РСК?

Что такое бактериотропины и опсонины?

Что такое фагоцитарное число?

Что такое опсонический индекс?

Как определяют фагоцитарное число и опсонический индекс?

Каковы преимущества и недостатки иммунофлуоресцентного метода?

Почему препараты-мазки при этом методе исследования не должны быть слишком густые?

В чем состоит сущность иммунофлуоресцентного метода исследования?

Каково различие между прямым и непрямым методами иммунофлуоресцентного исследования?

Какова классификация форм приобретенного иммунитета?

Каковы различия между искусственным активно и искусственным пассивно приобретенным иммунитетом?

Какой иммунитет создается при введении гамма-глобулина?

Какие сведения должны быть на этикетках иммунопрепаратов?

Какие условия хранения иммунопрепаратов?

Как получают химические вакцины?

Какое преимущество имеют сорбированные вакцины и анатоксины перед нативными?

Как готовят анатоксины?

Как получают лечебно-профилактические сыворотки?

Как производят очистку лечебно-профилактических сывороток?

Какие преимущества имеет гамма-глобулин перед сыворотками?

В каких единицах дозируются антитоксические сыворотки?

В каких единицах дозируются анатоксины?

Каковы методы введения аллергенов?

Какие осложнения могут возникнуть при введении лечебно-профи­лактических сывороток?

Как предупреждают возможность развития анафилактического шока при введении сывороток?

Как определяют пригодность для использования иммунопрепарата?

Каковы способы введения вакцин?

Как готовят аутовакцины, каково их назначение?

 

Приложение к занятию 12

⇐ Предыдущая78910111213141516Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: