 |
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
|
|
|
|
Метод дисков
Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри, Посевы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задержки роста бактерий.
По диаметру зон задержки роста ориентировочно судят о степени чувствительности бактерий к антибиотикам. Зона задержки роста до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм - на среднюю и свыше 25 мм - на высокую чувствительность. Более точные результаты получают при использовании метода серийных разведений.
Метод серийных разведений
Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.
МПБ разливают по 2 мл в серию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, для чего берут навеску антибиотика и растворяют в дистиллированной воде из расчета 1 мг антибиотика на мл растворителя.
Левомицетин предварительно растворяют в 96° этиловом спирте из расчета 0,25 мл спирта на 1 мг антибиотика; после полного растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содержал в 1 мл 1 мг антибиотика.
Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном растворе соляной кислоты из расчета 1 мл на 1 мг антибиотика.
Эритромицин сначала растворяют в чистом метиловом спирте из расчета 1 мл на 10 мг эритромицина. После растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы получить раствор, содержащий в 1 мл 1 мг антибиотика.
Исходный раствор антибиотика в количестве 2 мл вносят в первую пробирку с МПБ, перемешивают и получают определенную его концентрацию.
|
|
|
Из первой пробирки 2 мл разведенного антибиотика переносят во вторую пробирку и после перемешивания переносят 2 мл в третью пробирку и т.д. до предпоследней, откуда 2 мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельствует о пригодности среды для роста культуры.
После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1 мл испытуемой бульонной культуры. Для этого используют 3-4-часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз.
Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предварительные результаты можно учитывать через 6-8 часов.
По истечении необходимого срока инкубации определяют максимальное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК).
Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препарата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме.
ЗАНЯТИЕ 3
Дата__________________
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ
(окончание).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЩЙ (бруцеллез).
План занятия
А. Микробиологический диагноз кокковых инфекций (окончание).
I. Регистрация результатов определения чувствительности стафилококков к антибиотикам..
Б. Микробиологический диагноз особо опасных инфекций (бруцеллез).
1.Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл.
2.Бактериологическая диагностика бруцеллеза. Выделение гемокультуры (разбор).
3.Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта.
4.Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза -реакция Хеддлъсона и др.
5.Опсоно-фагоцитарная реакция.
6.Аллергическая диагностика бруцеллеза.Постановка пробы Бюрне.
|
|
|
7.Демонстрация препаратов, применяемых для диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза (диагностикум, бруцеллин, профилактическая и лечебная вакцины).
Методические указания
А. Микробиологический диагноз кокковых инфекций (окончание):
§ 1. Измерить и записать в таблицу диаметр зоны задержки роста стафилококка каждым антибиотиком. Сформулировать и записать вывод о степени чувствительности выделенной культуры к различным антибиотикам.
Б. Микробиологический диагноз особо опасных инфекций (бруцеллез).
§ 1. Приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать препарат из убитой культуры бруцелл. Обратить внимание на размеры микроорганизмов.
§ 3. Поставить реакцию Райта с сывороткой больного бруцеллезом по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 10-е). Диагностический титр реакции Райта - 1:200.
§ 4. На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл,в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипеткой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.
Оценке реакции: агглютинация только в первой капле - реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях - реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях - реакция резко положительная.
Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить реакцию Райта и аллергическую пробу Бюрне.
Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.
§ 6. Реакция Бюрне. Техника постановки реакции:
а) стерильным тампоном, смоченным спиртом, тщательно дезинфицируют кожу на границе верхней и средней трети передней поверхности предпдечъя;
б) в шприц с делениями по 0,1 мл и о тонкой иглой набирают бруцеллин (обратить внимание на внешний вид, данные этикетки и срок годности препарата!);
|
|
|
в) держа шприц по возможности параллельно поверхности кожи, вводят иглу внутрикожно. Для этого необходимо держать иглу срезом вверх и толчкообразными движениями насаживать на нее кожу. Когда срез иглы скроется в коже, иглу поворачивают срезом вниз и, осторожно нажимая на поршень, вводят содержимое шприца в кожу (0,1 мл бруцеллина). На месте инъекции должен образоваться небольшой белый волдырь, указывающий на правильное введение препарата;
г) реакцию учитывают дважды: через 24 и 48 часов. В случае положительной реакции (наличие отека и гиперемии) миллиметровой линейкой измеряют размер отека (длина и ширина).
Регистрация чувствительности к антибиотикам выделенной культуры стафилококка.
| Антибиотик | Пенициллин | Стрептомицин | Левомицетин | Тетрациклин |
| Диаметр зоны задержки роста (в миллиметрах) |
Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Рис.1 Бруцеллы Окраска по Граму.
Реакция Хеддльсона
| Номер капли | ||||
| Доза сыворотки | ||||
| Результат |
Заключение________________________________________________________________________________________________________________________________________
Контрольные вопросы
Какие виды бруцелл вызывают бруцеллез у человека?
Каковы основные хозяева бруцелл соответствующих видов?
Каковы морфология и культуральные свойства различных видов бруцелл?
Какие свойства бруцелл используются для классификации их на вида и биотипы?
Какой из видов бруцелл наиболее патогенен для человека?
Каковы пути заражения бруцеллезом?
Какие микробиологические методы применяются для диагностики бруцеллеза?
Какой берется от больного материал для выделения возбудителя бруцеллеза? Как осуществляется выделение возбудителя из разного материала?
Какими методами осуществляется серологическая диагностика бруцеллеза? Какова техника постановки серологических реакций?
Каково диагностическое значение реакции Хеддльсона?
|
|
|
Как производится оценка реакции Райта? Какова ее диагностическая ценность?
Как производится опсоно-фагоцитарная реакция?
Как ставится аллергическая проба Бюрне? Через сколько времени и как производится ее оценка?
С какого дня заболевания рекомендуется ставить реакцию Райта и пробу Бюрне?
Что такое бруцеллин и как его получают?
Как производится специфическая профилактика бруцеллеза? Как производится отбор лиц, подлежащих специфической вакцинации?
Какие категории работников подвергаются специфической профилактике в первую очередь?
В чем заключается принцип вакцинотерапии бруцеллеза?
Какова методика постановки реакции Кумбса? (см. Часть I, занятие 12).
Методы микробиологической диагностики бруцеллеза.
А. Бактериологический
Рис.2 СХЕМА
Б. Биологический
Рис.3 СХЕМА
В. Серологический
Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:
|
|
|
