 |
изучение морфологических свойств выделенной культуры бактерий
|
|
|
|
Выполняем посев исследуемого материала по методу Дригальского на МПА в чашках Петри. Для этого на поверхность МПА наносим каплю смеси с помощью предварительно профламбированной бактериологической петли или стерильной пипетки. Затем каплю распределяем по поверхности шпателем. Затем этим шпателем, не обжигая его, проводят по поверхности среды во второй чашке Петри, в третьей и т.д.Посевы инкубируют при t = 370C в термостате в течение 2 - 3 дней. В результате на поверхности МПА образуются колонии - потомство одной клетки, образующие видимые невооруженным глазом скопление м/о на питательной среде. 
Изучение культуральных свойств выделенной культуры бактерий
Колония (от лат. Поселение) - это потомство одной клетки, образующее видимые невооруженным глазом скопление микробных клеток на плотной питательной среде. Выросшие колонии сначала рассматривают невооруженным глазом, а затем с помощью бинокулярной лупы.
При описании колоний отмечают следующие культуральные признаки:
Изучение биохимических свойств выделенной культуры бактерий
Сахаролитическую способность определяют по ферментативному расщеплению углеводов (сахаров, многоатомных спиртов) на кислоты, альдегиды и газообразные продукты (СО2, Н2,СН4). Чаще всего с этой целью используют полужидкие среды Гисса (основа- пептонная вода, к которой добавлен моноуглевод: глюкоза, лактоза, сахароза и др, 0,4 % агар-агар и индикатор (фуксин или водно - голубой краситель), которые обесцвечены щелочью или кислотой. Среды Гисса называют «пёстрым рядом».
Если углевод расщепляется под действием ферментов бактерий, то образуется органическая кислота, которая нейтрализует щелочь или розоловую кислоту. В результате цвет индикатора восстанавливается и среда окрашивается в розовый (индикатор фуксин) или голубой цвет (индикатор водно - голубой с розоловой кислотой).
|
|
|
Если углевод расщепляется до конечных продуктов (газов и воды), то наличие газа обнаруживают в толще полужидкой среды в виду пузырьков.
Протеолитические свойства. Протеазы расщепляют белки до пептонов, полипептидов, аминокислот. Некоторые способны расщеплять аминокислоты до индола, сероводорода, аммиака.
Определение желатиназы. Наблюдается разжижение столбика желатина.
Определение казеиназы. При наличии фермента казеиназы микроорганизмы вызывают пептонизацию молока. Пептонизация сопровождается растворением сгустка казеина, выпадением осадка и появление молочной сыворотки.
Тест на индол. Образование индола определяют по способности микроогранизмов расщеплять триптофан с помощью фермента триптофаназы. Индол обнаруживают с помощью реактивов Эрлиха или Ковача, которые добавляют в бульонную культуру. При наличии индола на границе наслоенных жидкостей появляется малиновое кольцо.
Тест на сероводород. Для обнаружения образования сероводорода используют индикаторные бумажки, пропитанные раствором ацетата свинца, которые в положительном случае окрашиваются в черный цвет вследствие образования сульфита свинца.
Тест на аммиак. Для определения аммиака под пробку с бульонной культурой помещают розовую лакмусовую индикаторную бумажку, инкубируют в течение 1-5 суток. В положительном случае лакмусовая бумажка приобретает синюю окраску.
Определение вида бактерий
Все данные по изучению биологических свойств записывают в таблицу. После заполнения таблицы приступают к определению вида м/о.
Идентификацию вида проводят с помощью «Определителя бактерий Берджи», который предназначен для идентификации бактерий по фенотипическим признакам. В этом определителе все прокариотические м/о объединены в царство Procaryotae (прокариоты), которое подразделяется на отделы, классы, порядки, семейства, роды, виды.
|
|
|
|
|
|
