 |
Фиксация цитологических мазков
|
|
|
|
Сухие мазки • Приготовление мазка • Высушивание мазка при комнатной температуре (1 час) • Фиксация в ацетоне (10 мин.)
Влажные мазки • Приготовление мазка • Фиксация в этаноле (10-15 мин.) Высушивание на воздухе
Химическая фиксация
• Метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры
• Достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов)
• Количество фиксатора следует брать в 20-30 раз больше объема кусочка фиксируемого материала
• Простые фиксаторы: 10-20% раствор формалина, 96 º спирт, 100 (абсолютный) спирт, 1-2% раствор осмиевой кислоты и др.
• Сложные фиксаторы: спирт – формол (спирт 70º — 100 мл. и формалин 2-5 мл.) жидкость Ценкера (сулема – 5 г, сернокислый натрий — 1 г., двухромовокиолый калий – 2,5 г, дистиллированная вода – 100 мл., ледяная уксусная кислота 5 мл.) и др.
• Продолжительность фиксации – от нескольких часов до 1 суток и более в зависимости от свойств фиксатора и характера исследуемого материала.
Общие правила фиксации материала
• Материал фиксируется непосредственно и немедленно после взятия.
• Для фиксации материала употребляется стеклянная или глиняная посуда (избегать металлической).
• Объем фиксирующей жидкости должен в 20-30 раз превышать объем фиксируемого материала.
• Фиксирующая жидкость меняется до тех пор, пока она не станет прозрачной (необходимо избавиться от примесей крови).
• Материал оформляется этикеткой из плотной бумаги с надписью графитным карандашом или тушью.
• Фиксирование производится без доступа света.
• Повышенная температура ускоряет фиксацию. Оптимальная температура фиксации 37°С.
• Самым распространенным стандартным методом фиксации является формалин. Формалином называется 40%-водный раствор газа формальдегида (НСОН).
|
|
|
Фиксация в формалине
1. Диффузия формалина в образец (примерно 1 мм/час)
2. Химическая фиксация Химический компонент фиксации в формалине 
Метод экстренной фиксации:
• кусочек материала толщиной менее 0,5см помещается в пробирку с 20%-водным формалином
• нагревается в течение 3–5мин, до появления пузырьков (не кипятить)
Формалиновая фиксация не достигает цели при исследовании:
• тонких цитологических структур • веществ, растворимых в воде (гликоген, мочевая кислота) • Достоинства формалиновой фиксации • Простота и дешевизна. • Хорошая сохранность структур.
• Недостатки фиксации в формалине • Невозможность выявления веществ, растворимых в воде (гликоген, мочевая кислота). • Плохое выявление цитологических структур (хондриосом, аппарата Гольджи и др.).
• Для выявления веществ, растворимых в воде, пользуются безводными фиксаторами (абсолютный спирт, 96% спирт).
Правила взятия образцов из фиксированных органов и тканей: Из фиксированного объекта (ткань, орган или фрагмент органа) аккуратно вырезать фрагмент из нужного места толщиной примерно 3 мм, площадью примерно 0,5–2,5 см2
Селезенка -Вырезать фрагмент толщиной примерно 3 мм из средней части во фронтальной плоскости
Кишечник -Из каждого отдела кишечника вырезать фрагменты толщиной примерно 3 мм во фронтальной плоскости
Почка -Из одной почки вырезать фрагмент толщиной примерно 3 мм через весь орган из средней части в сагиттальной плоскости Из второй почки вырезать фрагмент толщиной 2 мм из средней части, включающий ворота почки во фронтальной плоскости.
Печень - Вырезать фрагменты толщиной 3 мм из средней части каудальной, левой латеральной, правой латеральной долей во фронтальной плоскости
Сердце - Вырезать фрагмент толщиной 2-3 мм из средней части органа, включая дугу аорты во фронтальной плоскости.
|
|
|
Легкие - Вырезать фрагменты толщиной примерно 3 мм из средней части право краниальной и каудальной долей и из средней части левой доли.
19. Обезвоживание.
• Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка.
Заливка в парафин
• Фиксация в забуференном формалине (ок. 24 ч.)
• Промывка в проточной водопроводной воде (3ч.)
• 50% этанол (1 ч.) • 70% этанол (2 ч.) • 80% этанол (1 ч.) • 96% этанол (две смены по 30 мин.) • 96% этанол (оставляем на ночь)
• Абсолютный спирт (2 смены по 30 мин.) • Абсолютный этанол:ксилол (1:1; 20 мин.)
• Ксилол (три смены по 20 мин.)- 3 смена при t= 56 ⁰С • Смесь ксилол:парафин 1:1(20-25 мин. при температуре 56 ⁰С)
• Парафин 1 при температуре 56 ⁰С (1 ч.) • Парафин 2 при температуре 56 ⁰С (1 ч.) • Парафин 3 охладить
Заливочные станции • Модульные станции заливки • Станции для проводки и заливки
|
|
|
