 |
Работа 4. Определение числа и диаметра жировых шариков
|
|
|
|
В плоских счетных камерах (2 часа)
Цель занятия – освоить методику подсчета количества и определения диаметра жировых шариков в молоке.
Содержание работы: подготовить пробу молока и препарат, провести микрокопирование препарата, подсчитать число жировых шариков и определить их диаметр.
Подготовка к занятию: знать дисперсные системы молока, характеристику эмульсии молочного жира, строение жирового шарика.
Приборы, реактивы, посуда: микроскоп, счетная камера Горяева, окулярный и объективный микрометры, покровные стекла, вата, спирт, салфетка, колба мерная на 250 мл, пипетка на 2 мл, платиновая петля или стеклянная палочка.
Вопросы для самоконтроля
1. Приведите размеры и количество жировых шариков.
2. Назовите факторы, определяющие размер и количество жировых шариков в молоке, приведите примеры.
3. Изобразите строение и укажите состав оболочки жирового шарика.
Ход работы
1. Определение числа жировых шариков в счетной камере Горяева
Для подсчета жировых шариков используют счетные камеры Тома, Тюрка, Горяева. Счетная камера Горяева представляет собой стеклянную пластинку, на поверхности которой, в центральной части (на средней выступ) нанесена сетка, состоящая из 16 квадратов, каждый из которых разделен еще на 16 квадратиков. Площадь квадратика равна 1/400 мм (рис.1).
b
 |  | ||
h a
 |
Рис. 1.Камера Горяева:
а - вид сверху; б - вид сбоку; в - сетка при малом увеличении
Глубина камеры Горяева (0,1 мм) обусловлена разной толщиной средней и боковых частей стеклянной пластинки. Высота среднего выступа (с сеткой) ниже боковых на 0,1 мм (рис.1).
Исследуемое молоко разводят водой в 125 раз и, не давая жировым шарикам отстаиваться, наносят каплю разводки стеклянной палочкой или платиновой петлей на поверхность среднего выступа счетной камеры (на сетку) и накрывают покровным стеклом. Края покровного стекла притирают к поверхности боковых выступов камеры до появления спектральных колец на границе их соприкосновения.
|
|
|
Через 1,0 -1,5 мин. после приготовления препарат помещают на предметный столик микроскопа. Объективом 8 при окуляре 15х находят четкое изображение сетки и жировых шариков. Подсчитывают жировые шарики над пятью маленькими квадратиками, расположенными в различных участках сетки. Затем вычисляют среднее число жировых шариков над одним квадратиком. Определяют число жировых шариков в 1 мл молока:
,
где С - число шариков в 1 мл молока
а - число шариков (среднее) в квадрате сетке
h - глубина счетной камеры, мм
S - площадь маленького квадратика сетки, мм
125 - степень разведения молока.
Последовательность операций при микроскопировании. Готовят микроскоп к работе так: протирают салфеткой поверхности зеркала, фронтальных линз объективов, окуляра, конденсора. Ставят объектив 8 в рабочее положение. Смотря в окуляр, зеркалом направляют свет в микроскоп (белое поле зрения); снижая конденсор и прикрывая ирисовую диафрагму, уменьшают освещенность до серовато-белого поля зрения.
Кладут на предметный столик счетную камеру препаратом вверх. Вращая винт грубой наводки, опускают объектив 8 почти до препарата; затем, глядя в окуляр, медленно поднимают тубус до появления в поле зрения жировых шариков и квадратиков сетки, вращением микровинта добиваются их четкого изображения и, продолжая вращать микровинт, производят подсчет жировых шариков.
2. Определение величины жировых шариков
с помощью окулярной линейки
Окулярная линейка (окуляр-микрометр) представляет собой круглую стеклянную пластинку с выгравированной в центре линейкой. Микрометр кладут в окуляр микроскопа на диафрагму между верхней и нижней линзами. Находят четкое изображение жировых шариков объективом 8. Переводят в рабочее положение объектив 40 и, вращая микровинт, снова устанавливают четкое изображение жировых шариков. Подсчитывают их число в найденном поле зрения (площади круга). Затем, вращая окуляр, в этом же поле зрения определяют с помощью окулярной линейки диаметр жировых шариков разной величины и подсчитывают их количество, сначала - мелких, диаметром меньше 1 мкм (а 
n ), затем средних и крупных с диаметром от 1 до 3 мкм (а 
n ), от 3 до 6 мкм (а 
n ) и более 6 мкм (а 
n ). Вычисляют процент каждой группы шариков от их общего числа в данном поле зрения (n) и средний диаметр жирового шарика:
|
|
|
,
где а - диаметр жировых шариков,
n - число жировых шариков.
В условиях нашего опыта при объективе 40 и окуляре 15x одно деление окулярной линейки равно 3 мкм (0,003 мм).
Таблица 5
|
|
|
