Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)

В  Г  Д

 

Рис. 6. Удобный метод по­сева штрихом в чашки для получения отдельных коло­ний. А. Для маркировки на обратной стороне чашки Петри карандашом наносят букву Т, разделяющую дно на 3 сектора. Б. Петлей с культурой зигзагом наносят штрихи на поверхности ага­ра в секторе 1, как показано на рисунке. Для этого крыш­ку чашки сначала приподни­мают, а после нанесения штриха сразу закрывают. Петлю стерилизуют в пламе­ни и дают ей остыть (15 с). В. Проводят петлей по по­верхности среды в секторе 1, как показано на рисунке, и затем немедленно наносят ею зигзагом штрихи на по­верхности среды в секторе 2. Прогревают петлю в пла­мени и дают ей остыть. Г. Проводят петлей по поверх­ности среды в секторе 2, как показано, и затем наносят ею зигзагом штрихи на по­верхности среды в секторе 3. Д. Инкубируют опрокинутые вверх дном чашки, как по­казано на рисунке, для того, чтобы конденсирующаяся во­да с крышки не попала на поверхность агара. В секто­ре 1 вырастает большое чис­ло колоний, тогда как в сек­торах 2 и 3 появляются от­дельные хорошо изолирован­ные колонии.

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)

Три пробирки, содержащие по 15 мл мясо-пептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43—45°С. В пробирку вносят одну бактериальную петлю иссле­дуемого материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями. После этого прокаленной и остуженной петлей содержимое 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения мик­робов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам про­бирок.

После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения мате­риала.

Выделение чистой культуры по способу Дригальского

Расплавленную питательную среду разливают в три чашки Петри. Застывшую среду обязательно подсушивают, так как влажная поверхность ее способствует образованию сливаю­щегося роста. В первую чашку вносят одну каплю исследуе­мого материала и стерильным шпателем втирают его в по­верхность питательной среды. Далее, не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во вто­рую и третью чашки, втирая в поверхность питательных сред оставшийся на нем материал.

Метод рассева по поверхности, предложенный Дригальским, является наиболее употребительным для получения чи­стой культуры микробов. Вместо шпателя можно пользовать­ся петлей. Материал на питательной среде распределяют па­раллельными штрихами по всей чашке в одном направлении. Затем, повернув чашку на 180°, проводят штрихи в направле­нии, перпендикулярном первым штрихам. При таком способе посева материал, находящийся на петле, расходуется посте­пенно, и по линиям сетки, нанесенным в конце посева, вы­растают изолированные колонии микробов.

Анаэростат для культивирования анаэробов

Анаэростат — прибор для выращивания микробов в анаэробных услови­ях. Представляет собой толстостенный металлический цилиндр с герметически привинчивающейся крышкой, на ко­торой имеются вакуумметр и два крана для присоединения к вакуум-насосу.

Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов

Культуральные признаки микробов определяются харак­тером роста их на питательных средах. Будучи постоянными для каждого вида микроба, они являются важным диагно­стическим признаком.

Рост микробов на плотной питательной среде

 Для изуче­ния свойств колоний микробы культивируют на плотных пи­тательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний. Чашки с посевом просматривают сначала невооруженным глазом или через лупу, затем помещают их на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете с объ­ективом малого увеличения и с суженной диафрагмой.

Колонии характеризуют по величине, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции.

Величина колонии определяется ее диаметром. В за­висимости от диаметра различают колонии точечные (диа­метр меньше 1 мм), мелкие (диаметр 1—2 мм), средние (диаметр 2—4 мм) и крупные (диаметр 4—6 мм и более).

Форма колонии бывает правильная — круглая, непра­вильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев.

Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной ли­нии и неровные. Последние делят на:

1. фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округ­лых или уплощенных зубцов правильной формы;

2. волнистый край, который несколько отличается от фе­стончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко;

3. эрозированный, или зазубренный, край, состоящий из острых зубцов различной величины и формы;

4. бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых случаях четко выраженная линия, отграни­чивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым.

Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии нево­оруженным глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку. Различают:

1. каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпукло­сти, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Коло­нии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполо­образные — меньшую;

2. колонии плоско-выпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции;

3. колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника:

4. колонии с приподнятой в виде соска серединой и ва­ликом по периферии;

5. колонии с вдавленным центром;

6. колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды.

Поверхность колонии изучают с помощью лупы или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность коло­ний бывает матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозна­чают буквой S (smooth), шероховатые — буквой R (rough), что означает соответственно «гладкий» и «шероховатый». Ме­ханизм формирования гладких и шероховатых форм колоний обусловлен различием процессов клеточного деления. Мик­робные клетки в колониях S-форм располагаются, соприка­саясь своими боковыми поверхностями, клетки R-форм, сохраняя при делении цитоплазматические мостики, об­разуют цепочки, которые, накладываясь друг на друга, об­условливают шероховатую поверхность и неровный край колонии.

Переход S-форм в R-формы наблюдается при диссо­циации. Явление диссоциации у патогенных микробов на­блюдается под действием антибиотико- и химиотерапии, фак­торов специфического иммунитета, формирующихся в течение инфекционного процесса, а также факторов внешней среды. Среди шероховатых форм колоний различают: складча­тые, гирозные, по виду напоминающие исчерченную извили­нами поверхность мозга; бородавчатые, концентрически или радиально исчерченные; шагреневые, т. е. мелкозернистые.

Цвет колонии определяется пигментом, который проду­цирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образуют, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды мик­робов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

Структура колоний определяется в проходящем све­те при слабом увеличении микроскопа, суженой диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. У пигментирован­ных колоний и колоний, не пропускающих света, она не опре­деляется.

По характеру структуры различают следующие виды ко­лоний:

1. гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры;

2. зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко- и грубозернистые;

3. нитевидные или волокнистые, характеризующиеся на­личием длинных, густо переплетающихся нитей в толще ко­лонии.

Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой.

Консистенцию колонии, определяющую ее физиче­ское состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают:

1. пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла;

2. вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей;

3. волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соот­ветствующей величине и форме колонии;

4. хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли.

⇐ Предыдущая18192021222324252627Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: