Определение сероводорода. Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов. Определение редуцирующей способности. Определение фермента каталазы

Определение сероводорода

Сероводород яв­ляется конечным продуктом расщепления аминокислот: цистина, цистеина и метионина, содержащих серу. Петлю ис­следуемой культуры микробов засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном или бульоном Хоттингера. Тотчас после посева в пробирку вносят пропитанную ацетатом свинца по­лоску индикаторной бумаги на определение сероводорода. В положительных случаях образующийся в культуре сероводород вступает в соединение с бесцветным ацетатом свинца и превращается в сульфид свинца, который придает индикаторной бумаге черно-бурое окрашивание.

Окончательный учет результатов на образование индола и сероводорода проводят на 7—10‑ й день после посева, так как процесс ферментативного расщепления белка и образова­ния конечных продуктов распада происходит иногда в тече­ние длительного времени.

Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов

В культуре микробов могут быть обнаружены окисли­тельно-восстановительные ферменты, связанные главным об­разом с дыхательной функцией микроорганизма.

Как известно, процесс окисления субстрата может про­исходить посредством присоединения к нему кислорода с участием ферментов оксидаз или в результате отщепления от него водорода с участием ферментов дегидрогеназ. Для этого типа реакции характерно то, что окисление какого-либо од­ного вещества всегда сопровождается восстановлением (ре­дукцией) другого органического вещества. Первое вещество, от которого отщепляется водород, называют донатором, а то вещество, к которому он присоединяется, — акцептором.

Акцептором водорода чаще всего является кислород воз­духа, однако им могут быть также многие органические со­единения, способные легко окисляться и восстанавливаться.

С целью выявления ферментов дегидрогеназ и определения их активности в практике микробиологических исследований предложен метод, основанный на введении в питательную среду органической краски, выполняющей роль акцептора водорода. В результате присоединения водорода краситель восстанавливается, превращаясь в бесцветное соединение, называемое лейкобазой. При обильном доступе кислорода оно может вновь окислиться и приобрести прежний цвет.

В качестве акцептора водорода используют метиленовый синий, лакмусовую настойку, малахитовый зеленый, индигокармин, нейтральный красный и др.

Для выявления редуцирующих свойств микроорганизмов указан­ные красители добавляют к обычным питательным средам: мясо-пептонному бульону, мясо-пептонному агару, молоку.

Один и тот же вид микроба ведет себя неодинаково по отношению к краскам разного состава. Это свойство микро­ба использовано в микробиологической практике в качестве дифференциального признака. Бактерии брюшного тифа ре­дуцируют метиленовый синий, но не редуцируют лакмуса и не изменяют нейтрального красного в противоположность ки­шечной палочке, которая остается нейтральной в отношении метиленового синего, но восстанавливает лакмус и нейтраль­ный красный.

Определение редуцирующей способности

1. В 5 мл среды—молока с метиленовым синим— засевают петлю исследуемой культуры с плотной питательной среды или 0, 1 мл 18-часовой бульонной культуры и после 24 ч инкубации учитывают результаты роста. При положительной реакции на редукцию метиленового синего среда из голубой становится кремового цвета, а при слабоположи­тельной — приобретает зеленоватое окрашивание.

2. Пробирки с лакмусовым молоком, средой Минкевича засевают так же, как молоко с метиленовым синим, суточной культурой с плотной или жидкой питательной сре­ды. Посевы инкубируют в термостате в течение 10 дней, еже­дневно наблюдая за изменением цвета среды. Редукция лак­муса проявляется полным обесцвечиванием молока, имеюще­го розовато-сиреневый цвет до посева. В протоколе иссле­дования редукцию лакмуса обозначают буквой Р.

Среда Минкевича позволяет также выявлять кислото- или щелочеобразование, выражающееся соответственно в покрас­нении или посинении молочной среды. Образование кислоты обозначается буквой К, щелочи — буквой Щ.

Определение фермента каталазы

Некоторые виды микроорганизмов, принадлежащие к группе аэробов, в процессе дыхания образуют перекись водорода, являющую­ся клеточным ядом. Количество перекиси водорода в культуре никогда не достигает высоких концентраций, так как по ме­ре образования перекись расщепляется на воду и молекуляр­ный кислород при участии фермента каталазы. На поверх­ность микробной культуры, выращенной на плотной пита­тельной среде в чашке Петри, наносят 1—2 мл 1% раствора перекиси водорода так, чтобы она покрывала поверхность культуры тонким слоем. Появление пузырьков газа в слое нанесенной жидкости свидетельствует об образовании кис­лорода в результате расщепления перекиси водорода под действием каталазы. Подобный результат в протоколе опыта отмечается знаком + как положительный результат реакции на каталазу.

⇐ Предыдущая21222324252627282930Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: