Способ Уварова. Способ Леффлера. Способ Инуйе. Способ Бениньетти и Джино. Цитоплазматические включения. Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты

Способ Уварова

Особенность данного способа окраски жгутиков — отсутствие в протраве танина.

Техника окраски.

1. Культуру освежают двух-трехкратными пересевами на свежий агар и выращиванием при 37° в течение 15—16 часов.

2. Для приготовления эмульсии в физиологический раствор, налитый в чистую пробирку в объеме 5 мл, осторожно погружают петлю со свежей культурой для получения слабой эмульсии. Легкими круговыми вращениями пробирки между ладонями эмульсию равномерно смешивают, затем добавляют в нее одну каплю формалина.

3. Для окраски приготовляют:

а) насыщенный водный раствор калийных квасцов;

б) раствор: сульфаниловой кислоты 0, 5 г + соляной кислоты 1, 5 мл + 100 мл дистиллированной воды;

в) раствор Мюра: насыщенный водный раствор калийных квасцов 25 мл + насыщенный спиртовой раствор генцианвиолета - 5 мл;

г) насыщенный спиртовой раствор основного фуксина. Растворы «а» и «б» смешивают в пропорции 1: 2. Растворы «в» и «г» смешивают в пропорции 3: 1.

4. Окраска. Пастеровской пипеткой наносят на чистое предметное стекло каплю эмульсии и подсушивают препарат в термостате; на высох­ший нефиксированный препарат наливают смесь растворов «а» и «б», подогре­вают над пламенем при слабом отхождении паров 1—2 минуты, смывают водой и слегка высушивают. Затем на препарат наливают смесь красок «в» и «г» (раствор Мюра и насыщенный спиртовой раствор основного фуксина), нагревают препарат 1—2 минуты до слабых паров, обильно промывают и высушивают.

Микроскопическая картина: жгутики — яркого красно-фиолетового или розовато-фиолетового цвета, тела бактерий — густо-фиолетовые.

Способ Леффлера

Приготовленный препарат осторожно фиксируют на пламени горелки и обрабатывают при подогревании в течение 0, 5—1 минуты протравой следующего состава: 20% водный раствор танина (100 мл) + насыщенный на холоду водный раствор сернокислого закисного аммиач­ного железа (50 мл) + насыщенный спиртовой раствор основного фуксина (10 мл). Препарат тщательно обмывают слабой струей воды и слегка высуши­вают на воздухе, затем окрашивают карболовым раствором фуксина при подогревании в течение 2—3 минут, промывают водой и высушивают.

Способ Инуйе

Препарат, приготовленный со всеми предосторожностями, подогревают до появления паров в течение 1—1, 5 минут в леффлеровской протраве (способ Леффлера см. выше). Затем протраву смывают водой до прекращения отхождения краски и окрашивают мазок в растворе Мюра, предварительно смешанном и профильтрованном (см. способ Уварова), над пламенем в течение 1-2 минут. Препарат после окраски промывают водой.

Бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый, а жгутики — в бледно-фиолетовый, красноватый цвет.

Способ Бениньетти и Джино

За 2—3 дня до окраски готовят следующие растворы:

1) Раствор сернокислого цинка (1г), 15г танина, 100 мл дистиллированной воды;

2) Насыщенный (при нагревании! ) водный раствор квасцов;

3) Насы­щенный спиртовой раствор генцианвиолета.

Непосредственно перед окраши­ванием указанные растворы смешивают в пропорции 1: 2: 3, смесь обязательно фильтруют, затем наливают на фиксированный препарат, подогревают в течение 2—3 минут, после чего препарат тщательно промывают водой и высу­шивают.

Микроскопическая картина: тела бактерий — темно-фиолетового цвета, жгутики — более нежной окраски. Обычно не во всех точках препарат одинаково хорошо и равномерно окрашивается.

Этот способ наиболее доступен для начинающих и дает вполне удовлет­ворительные результаты.

Цитоплазматические включения

У многих бактерий, выращиваемых в определенных условиях, в результате обменных процессов в цитоплаз­ме образуются отложения, которые называют включениями. Среди них — отложения жира, поли-β -оксимасляной кислоты, полифосфата, крахмалоподобных полисахаридов, серы и различных кристаллов. Некоторые из них представляют собой полимеризованные ненужные продукты, а другие можно отнести к запасам питатель­ных веществ. Для выявления этих включений, которые к тому же преломляют свет, применяется несколько ме­тодик окраски.

Окрашивание поли-β -оксимасляной кислоты

Для выявления цитоплазматических включений в бактериях используют следующий метод:

1. Фиксированный нагреванием мазок на предметном стекле погружают в раствор 0, 3%-ного (вес/объем) судана черного В, приготовлен­ного на этиленгликоле. Фильтруют и окрашивают в те­чение 5—15 минут (время определяют экспериментально).

2. Краситель сливают, препарат высушивают на воз­духе, положив предметное стекло на промокательную бумагу.

3. Несколько раз погружают и промывают предметное стекло в ксилоле, а затем подсушивают впитывающим ксилол материалом.

4. Дополнительно окрашивают препарат в течение 15—10 с 0, 5%-ным (вес/объем) водным сафранином.

5. Промывают предметное стекло водопроводной водой, подсушивают и смотрят в микроскоп.

Включения поли-β -оксимасляной кислоты выглядят как черно-синие капельки, в то время как цитоплазма окрашивается в розовый цвет.

⇐ Предыдущая14151617181920212223Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: