 |
Количественное определение витамина С методом титрования индофеноловым реактивом
|
|
|
|
Принцип метода: количественное определение аскорбиновой кислоты в исследуемом материале основано на ее способности восстанавливать индофеноловый реактив. При титровании вытяжки исследуемого материала раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола происходит окисление аскорбиновой кислоты в дегидроаскорбиновую и восстановление индофенолового реактива. Завершение титрования можно установить по изменению окраски. Окисленная форма 2,6-дихлорфенолиндофенола имеет синюю окраску в нейтральной и щелочной среде, восстановленная форма – приобретает розовую окраску в кислой среде.
Ход работы: навеску исследуемого материала 5-20 г (картофель, морковь, яблоки и т.п.) тщательно растирают в ступке со щепоткой стекла или кварцевого песка, добавляя порциями по 4-5 мл 2% раствора соляной кислоты до получения однородной смеси. Далее полученную смесь переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и общий объем экстракта доводят до метки раствором кислоты. Содержимое хорошо перемешивают, настаивают 5-7 мин и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат должен быть совершенно прозрачным.
Берут две конические колбочки вместимостью 100-150 мл и в одну вносят 20 мл полученного фильтрата, в другую – 20 мл раствора кислоты. Содержимое колбочек титруют индофеноловым реактивом до розового цвета, удерживающегося 30 секунд. Результаты записывают, и титрование повторяют с новыми порциями того же фильтрата. На основании средней величины, полученной из 2-3 определений, рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты по формуле:
,
где:
Х – содержание аскорбиновой кислоты в материале, мг/100г продукта;
(a-b) – разность между объемами индофенолового реактива, пошедшими на титрование опытной (а) и контрольной (b) проб, мл;
|
|
|
М – масса аскорбиновой кислоты, соответствующая 1 мл индофенолового реактива мг;
V - общий объем экстракта, мл;
V 1 – объем фильтрата, взятого для титрования, мл;
m – масса исследуемого материала, г,
100 – пересчет на 100 г материала.
Оформление работы
К занятию:
1. Кратко законспектировать теоретический материал по лабораторной работе.
Во время занятия:
2. Описать этапы работы.
3. Описать результаты опытов по водорастворимым витаминам и занести их в таблицу:
| Название витамина, формула | Название кофермента | Название фермента | Признаки обнаружения витамина |
4. Сделать выводы по каждому из опытов
Приложение 1
Номенклатура и классификация витаминов по химическому строению и растворимости
| Тривиальное название | Буквенное обозна-чение | Структурная формула | Растворимость |
| Витамины алифатического ряда | |||
| Аскорбиновая кислота | С | 
| водорастворимый |
| Пантотеновая кислота | В3 | 
| водорастворимый |
| Витамины алициклического ряда | |||
| Ретинол | А1 | 
| жирорастворимый |
| Ретиналь | А2 | 
| жирорастворимый |
| Ретиноевая кислота | А3 | 
| жирорастворимый |
| Эргокальциферол | D2 | 
| жирорастворимый |
| Холекальциферол | D3 | 
| жирорастворимый |
| Витамины ароматического ряда | |||
| Менадион | К3 | 
| жирорастворимый |
| Менахиноны | К2 | 
| жирорастворимый |
| Филлохинон | К1 | 
| жирорастворимый |
| Витамины гетероциклического ряда | |||
| Никотиновая кислота | РР | 
| водорастворимый |
| Никотинамид | РР | 
| водорастворимый |
| a-Токоферол | Е | 
| жирорастворимый |
| Биотин | Н | 
| водорастворимый |
| Пиридоксин | В6 | 
| водорастворимый |
| Пиридоксаль | В6 | 
| водорастворимый |
| Пиридоксамин | В6 | 
| водорастворимый |
| Тиамин | В1 | 
| водорастворимый |
| Рибофлавин | В2 | 
| водорастворимый |
| Фолиевая кислота | ВС | 
| водорастворимый |
| Метилкобаламин Цианокобаламин Оксикобаламин | В12 | 
| водорастворимый |
|
|
|
|
|
|
