 |
Наиболее часто встречающиеся ошибки
|
|
|
|
1. Исследование капли в повреждённой части. Чтобы избежать ошибок, нужно анализировать образец в центральной части, так как при растекании по сухому стеклу максимально повреждаются клетки наружного слоя. По периметру препарата практически все эритроциты превращаются в эхиноциты, либо образуют густые плотные скопления деформированных клеток.
2. Изменение формы клеток при движении. При диагностике необходимо учесть один важный момент: когда мы накрываем каплю покровным стеклом, возникает спонтанное движение крови, что может неправильно интерпретироваться как движение эритроцитов. Самостоятельно в крови двигаться могут только лейкоциты. Эритроциты и тромбоциты передвигаются исключительно с током крови. Эти клетки не имеют способности к самостоятельному передвижению. Учитывая наличие большого количества рецепторов и антигенных детерминант на поверхности эритроцита, представляется разумным понимать возможность сцепления клетки с поверхностью стекла и изменением ее формы.
3. Выросты на клетках. В ряде научных работ показана способность клеток образовывать отростки на мембране – цитоплазматические выросты. Функция данных структур у эритроцита пока не очень понятна, но доказано, что эти образования не имеют ничего общего со жгутиками простейших.
4. Монослой. Важным моментом в приготовлении препарата является помещение капли крови под покровное стекло. Последнее должно равномерно накрыть каплю и распределить клетки монослоем. Если покровное стекло не прилегает равномерно к капле, клетки крови не распределяются в монослой, что делает невозможным диагностику.
5. Раздавливание капли. Если покровное стекло сильно прижать, клетки раздавливаются, эритроциты теряют форму двояковогнутого диска и сплющиваются.
|
|
|
6. Попадание в кровь посторонних веществ. Эритроциты будут выглядеть поврежденными, если в кровь, например, попал спирт при обработке пальца (кожу пальца не высушили).
История метода
Все новое, как известно, – это
лишь хорошо забытое старое
Сегодня трудно представить себе научную деятельность человека без микроскопа. Микроскоп широко применяется в большинстве лабораторий медицины и биологии, геологии и материаловедения. Полученные с помощью микроскопа результаты необходимы при постановке точного диагноза, при контроле над ходом лечения. С использованием микроскопа происходит разработка и внедрение новых препаратов, делаются научные открытия. В настоящее время существует много методов микроскопии и зачастую складывается ситуация, когда один и тот же метод обозначают разными понятиями или же разные методы обозначают одним понятием. Давайте разберемся, что и как следует обозначать.
Микроскоп - (от греческого mikros - малый и skopeo - смотрю), оптический прибор для получения увеличенного изображения мелких объектов и их деталей, невидимых невооруженным глазом.
Первый микроскоп был создан лишь в 1595 году Захариусом Йансеном (Z. Jansen). Изобретение заключалось в том, что Захариус Йансен смонтировал две выпуклые линзы внутри одной трубки, тем самым, заложив основы для создания сложных микроскопов. Фокусировка на исследуемом объекте достигалось за счет выдвижного тубуса. Увеличение микроскопа составляло от 3 до 10 крат. И это был настоящий прорыв в области микроскопии! Каждый свой следующий микроскоп он значительно совершенствовал.
В 1681 г. Лондонское королевское общество в своем заседании подробно обсуждало своеобразное положение. Голландец Левенгук (A. van Leenwenhoek) описывал изумительные чудеса, которые открывал своим микроскопом в капле воды, в настое перца, в иле реки, в дупле собственного зуба: «С величайшим изумлением я увидел в капле великое множество зверюшек, оживленно двигающихся во всех направлениях, как щука в воде. Самое мелкое из этих крошечных животных в тысячу раз меньше глаза взрослой вши".
|
|
|
В 70-х годах 19 века победоносное шествие микроскопии двинулось вперед во многом благодаря Эрнсту Карлу Аббе (Е. Abbe), немецкому физику оптику, автору теории формирования изображения в микроскопе.
Призвав на помощь основы волновой теории света, Аббе впервые ясно показал, что каждой остроте инструмента соответствует свой предел возможности. Тончайший же из всех инструментов - это длина волны. Нельзя видеть объекты меньше полудлины волны - утверждает дифракционная теория Аббе,- и нельзя получить изображения меньше полудлины волны, т.е. меньше 1/4 микрона. Или с разными ухищрениями иммерсии, когда мы применяем среды, в которых длина волны меньше,- до 0,1 микрона. Волна лимитирует нас. Правда, лимиты очень мелкие, но все же это лимиты для деятельности человека. Глаз человека способен различать детали объекта, отстоящие друг от друга не менее чем на 0,08 мм
В настоящее время по способу получения изображения виды микроскопии делятся на:
- оптическая, или световая микроскопия, изображение получают под воздействием пучка света. С помощью светового микроскопа можно видеть детали, расстояние между которыми составляет до 0,2 мкм
- электронная микроскопия, изображение получают под воздействием пучка электронов. Электронный микроскоп позволяет получить разрешение до 0,1-0,01 нм. Электронная микроскопия принципиально отличается от световой как устройством электронного микроскопа, так и его возможностями. В электронном микроскопе вместо световых лучей для построения изображения используется поток электронов в глубоком вакууме. В качестве линз, фокусирующих электроны, служит магнитное поле, создаваемое электромагнитными катушками. Изображение в электронном микроскопе наблюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. В качестве объектов используют ультратонкие срезы микроорганизмов или тканей толщиной 20- 50 нм, что значительно меньше толщины вирусных частиц. Высокая разрешающая способность современных электронных микроскопов позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз.
|
|
|
- рентгеновская микроскопия, изображение получают под воздействием электромагнитного излучения с длиной волны от 0,01 до 1 нанометра. Рентгеновские микроскопы по разрешающей способности находятся между электронными и оптическими микроскопами. Теоретическая разрешающая способность рентгеновского микроскопа достигает 2-20 нм, что на два порядка больше разрешающей способности оптического микроскопа.
Если начиная работу на микроскопе, Вы включаете лампочку, то в этом случае пользуетесь каким то видом световой или оптической микроскопии. В зависимости от наличия или отсутствия дополнительных опций у Вашего микроскопа методы микроскопии могут быть разными
- светлопольная микроскопия, которую чаше всего называют просто микроскопия;
- темнопольная микроскопия;
- фазово-контрастная микроскопия в темном или светлом поле (позитивный или негативный фазовый контраст);
- люминесцентная или флуоресцентная микроскопия.
При светлопольной микроскопии или микроскопии в светлом поле изображение формируется под воздействием прямого светового потока прямо проходящего через изучаемый объект. Получаемое изображение темное на светлом поле. Данный метод позволяет хорошо различить структуру и детали изучаемого объекта, если он состоит из частей с разной оптической плотностью (эритроциты, лейкоциты). Для этого метода не нужны специальные дополнительные устройства.
Темнопольная микроскопия основана на рассеивании света микроскопическими объектами, в том числе теми, размеры которых меньше предела разрешения светового микроскопа. При темнопольной микроскопии в объектив попадают только лучи света, рассеянного объектами при боковом освещении (аналогично эффекту Тиндаля, примером которого является обнаружение пылинок в воздухе при освещении узким лучом солнечного света). Прямые лучи от осветителя в объектив не попадают. Объекты при темнопольной микроскопии выглядят ярко светящимися на темном фоне. При использовании этого метода хорошо различимы мелкие объекты, но детали и структура крупных объектов (от2-3 мим) практически не различимы, так как виден только светящийся контур. Для темнопольной микроскопии нужен темнопольный конденсор. Фазово-контрастная микроскопия основана на интерференции света: прозрачные объекты, отличающиеся по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст).
|
|
|
Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения живых микроорганизмов и клеток в культуре ткани. Для этого метода нужны набор объективов со специальными фазовыми пластинками, конденсор с поворачивающимся диском и вспомогательный микроскоп.
В основе люминесцентной микроскопии лежит явление люминесценции, т. е. способности некоторых веществ светиться при облучении их коротковолновой (сине-фиолетовой) частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами с длиной волны, близкой к видимому свету. Люминесцентная микроскопия используется в диагностических целях для наблюдения живых или фиксированных микроорганизмов, окрашенных люминесцирующими красителями (флюорохромами) в очень больших разведениях, а также при выявлении различных антигенов и антител с помощью иммунофлюоресцентного метода.
Для микроскопии нативной крови используется метод оптической микроскопии в светлом поле. В качестве дополнительной, но не обязательной можно использовать темнопольную микроскопию.
Капилляры
Роль капилляров в кровоснабжении органов и тканей.
Вся сложная система кровообращения, включающая сердце, сосуды, а также механизмы нервной и эндокринной регуляции, созданы природой для того, чтобы доставить в капилляры кровь, необходимую для жизни клеток и тканей.
Капилляры являются составной частью системы кровообращения человеческого организма наряду с сердцем, артериями, артериолами, венулами и венами. В отличие от крупных, видимых невооруженным глазом кровеносных сосудов, капилляры очень мелки и невооруженным глазом не видны. Как только в капиллярах прекращается циркуляция крови, в тканях наступают некротические изменения - они отмирают. Вот почему эти микрососуды являются важнейшим участком кровеносного русла.
Капилляры состоят из одного слоя эндотелиальных клеток и образуют барьер между кровью и внеклеточной жидкостью. Диаметры их различны. Наиболее узкие имеют диаметр 3-5 мкм, самые широкие - 20-30 мкм. Кровеносные капилляры могут изменять свой диаметр в 2-3 раза. При максимальном тонусе они сужаются настолько, что не пропускают никакие кровяные тельца и сквозь них может проходить только плазма крови. При минимальном тонусе, когда стенки капилляров значительно расслабляются, в их расширенном пространстве, наоборот, скапливается много эритроцитов, тромбоцитов и белых кровяных телец (лейкоцитов).
|
|
|
Сужение и расширение капилляров играет роль во всех патологических процессах: при травмах, воспалениях, аллергиях, инфекционных, токсических процессах, при любом шоке, а также трофических нарушениях. Когда капилляры расширяются, происходит снижение артериального давления, когда они сужаются, наоборот, артериальное давление повышается. Изменения просвета капиллярных сосудов сопутствуют всем физиологическим процессам, протекающим в организме.
Эндотелиальные клетки, образующие стенки капилляров - это живые фильтрующие мембраны, через которые происходит обмен веществ между капиллярной кровью и межклеточной жидкостью. Из кровотока к клеткам поступают питательные вещества, регуляторные компоненты, а из межклеточного матрикса в кровь и лимфу поступают продукты метаболизма. Проницаемость этих живых фильтров меняется в зависимости от потребностей организма.Степень проницаемости капиллярных мембран играет важную роль в развитии воспалений и отеков, а также при секреции (выделении) и резорбции (обратном всасывании) веществ. В нормальном состоянии стенки капилляров пропускают молекулы небольших размеров: воды, мочевины, аминокислот, солей, но не пропускают большие белковые молекулы. При патологических состояниях увеличивается проницаемость капиллярных мембран, и белковые макромолекулы могут профильтровываться из плазмы крови в межтканевую жидкость, и могут возникать отеки тканей.
Используя метод микроскопии нативной крови, можно оценить состояние микроциркуляции пациента. Присутствие в капле большого количества агрегатов эритроцитов и тромбоцитов, а также выраженного фибрина говорит о затруднении капиллярного кровотока и, как следствие, нарушение трофики тканей, прежде всего тканевой гипоксии.При остром недостатке витамина С, дефиците тромбоцитов, под влиянием молекул гистамина повышается хрупкость капилляров.
Капилляры меняют свой диаметр в разные периоды дня, месяца, года. В утреннее время они сужены, поэтому общий обмен веществ у человека утром понижен, также понижена и внутренняя температура тела. Вечером капилляры становятся шире, они более расслаблены, и это обусловливает повышение общего обмена веществ и температуры тела в вечернее время. В осенне-зимний период обычно наблюдаются спазмы капиллярных сосудов и многочисленные застои крови в них. В этом состоит первая причина болезней, возникающих в эти сезоны, в частности язвенной болезни.
На клеточном уровне обмен веществ между капиллярами и клетками тканей происходит через клеточные оболочки (мембраны). Мембраны эндотелиальных клеток капилляров могут утолщаться, становиться непроницаемыми. При сморщивании эндотелиальных клеток расстояние между их мембранами увеличивается.При их набухании, наоборот, наблюдается сближение капиллярных мембран. Когда эндотелиальные мембраны разрушаются, тогда разрушаются их клетки в целом. Наступает распад и смерть эндотелиальных клеток, полное разрушение капилляров.
Патологические изменения капиллярных мембран играют большую роль в развитии болезней:
- кровеносных сосудов (флебиты, артерииты, лимфангииты, слоновость),
- сердца (инфаркт миокарда, перикардиты, эндокардиты),
- нервной системы (миелопатии, энцефалопатии, эпилепсии, отек мозга),
- легких (все легочные болезни, включая легочный туберкулез),
- почек (нефриты, пиелонефриты, липоидный невроз),
- пищеварительной системы (болезни печени и желчного пузыря, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки),
- кожи (крапивница, экзема),
- глаз (катаракта, глаукома и др.).
При всех этих болезнях нужно в первую очередь восстановить проницаемость мембран капилляров и состояние текучести крови.Кровь составляет около 8 % массы нашего тела. Объем крови, находящейся в артериях, не превышает 10% всего ее объема. В венах объем крови примерно такой же. Остальные 80% крови находятся в артериолах, венулах и капиллярах. В состоянии покоя у человека задействована только одна четвертая часть всех его капилляров. Если какая-либо ткань организма или какой-либо орган имеют достаточное снабжение кровью, то часть капилляров в этой области начинает автоматически сужаться. Количество открытых, действующих капилляров имеет ключевое значение для каждого болезненного процесса. С полным основанием можно считать, что патологические изменения капилляров, капилляропатии, лежат в основе любой болезни. Эта патофизиологическая аксиома была установлена исследователями при помощи капилляроскопии.
В капиллярах ногтевого ложа при нормальном состоянии давление крови составляет 10-12 мм рт. ст., при болезни Рейно оно понижается до 4-6 мм рт. ст., при гиперемии (приливе крови) повышается до 40 мм рт.ст.. Великий знаток человеческого организма доктор Залманов писал: "Когда каждый студент будет знать, что общая длина капилляров взрослого человека достигает 100000 км, что длина почечных капилляров достигает 60 км, что размер всех капилляров, открытых и распластанных на поверхности, составляет 6000 м2, что поверхность легочных альвеол составляет почти 8000 м2, когда подсчитают длину капилляров каждого органа, когда создадут развернутую анатомию, настоящую физиологическую анатомию, много гордых столпов классического догматизма и мумифицированной рутины рухнет без атак и без сражений! С такими идеями мы сможем достигнуть значительно более безвредной терапии, развернутая анатомия человека заставит нас уважать жизни тканей при каждом медицинском вмешательстве".
А. С. Залманов с болью в сердце писал о "достижениях" современной медицины и фармации, которые создали бесчисленные антибиотики против различных видов микробов и вирусов, а также ультразвук; придумали внутривенные инъекции, опасным образом изменяющие состав крови.Все это преподносится как великие достижения. Этот мудрый врач был противником того, что мы наблюдаем в официальной медицине каждодневно. Он призывал всех врачей уважать неприкосновенность и целостность человеческого организма, учил считаться с мудростью тела и использовать лекарства, инъекции и скальпель только в самых крайних случаях.
|
|
|
