 |
Техника приготовления препарата.
|
|
|
|
Фиксированный препарат помещают на параллельные стеклянные рейки, которые лежат над кюветой. На мазок наносят 1 % водный раствор фуксина или метиленового синего на 1 - 2 мин. Следят за тем, чтобы во время окрашивания раствор красителя не подсыхал. После завершения окрашивания препарат промывают водой до тех пор, пока стекающая воде не станет бесцветной. Затем препарат высушивают, промокая его фильтровальной бумагой, наносят на окрашенный сухой мазок каплю иммерсионного масла и микроскопируют с иммерсионной системой.
ДЕМОНСТРАЦИИ
1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
2. Современные методы работы с иммерсионным объективом.
3. Устройство фазово-контрастного, электронного и люминесцентного микроскопов.
4. Микроскопия в темном поле
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1. Каждый студент микроскопирует с сухим и иммерсионным объективом готовые окрашенные мазки дрожжей, антракоида, стафилококка, стрептококка.
2. Каждый студент готовит 3 мазка препарата из бактериальных культур: сарцина, стафилококка, антракоида, кишечной палочки, вибриона; окрашивает фуксином Пфейффера, метиленовой синькой; микроскопирует с иммерсионным объективом; зарисовывает изображением.
3. В ходе работы необходимо освоить и записать в тетрадь: а) методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных микробами объектов внешней среды; б) методы антисептической обработки рук, контаминированных исследуемым материалом, культурами патогенных микробов.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Какие задачи выполняет медицинская микробиология?
2. Какова структура и оснащение микробиологической лаборатории?
3. Почему необходимо выполнять правила работы в микробиологической лаборатории? В чем они заключаются?
|
|
|
4. Как определить увеличение микроскопа?
5. Что такое разрешающая способность микроскопа и от каких факторов она зависит?
6. Каковы преимущества иммерсионного объектива?
7. Изложите правила работы с иммерсионным объективом.
8. Из каких двух основных систем состоит электронный микроскоп?
9. Каковы основные отличия электронного микроскопа от светового?
10. Как готовят препараты для электронной микроскопии?
11. Основные принципы работы фазово-контрастного микроскопа.
12. Основные принципы работы люминесцентного микроскопа.
13. Принцип микроскопии в тёмном поле.
14. Что лежит в основе выбора метода микроскопического исследования микропрепаратов?
15. Назовите основные формы шаровидных, палочковидных и извитых бактерий.
16. Из каких этапов состоит процесс приготовления мазка?
17. Для чего осуществляют фиксацию бактериального микропрепарата и как она проводится?
18. Что такое тинкториальные свойства бактерий?
19. Назовите основные краски, применяемые для окраски микропрепаратов
20. Для чего изучают тинкториальные свойства бактерий?
21. Что такое простая окраска?
ЗАНЯТИЕ №2
Тема:
• Структура бактериальной клетки, сложные методы окраски (метод Грама), подвижность бактерий.
План занятия:
1. Строение бактериальной клетки.
2. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.
3. Исследование микроорганизмов в живом состоянии, подвижность бактерий.
ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ
По классификации Берджи все микроорганизмы подразделены на три царства: I- Эукариот, II - Прокариот, III- царство -Vira. Бактерии относятся к прокариотам. Клетки прокариот имеют более простое строение, чем клетки эукариот. Они имеют: клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, цитоплазму, рибосомы, мезосомы и ядерную субстанцию (нуклеоид), состоящую из ДНК, связанную с небольшим количеством РНК. Ядерная субстанция расположена свободно в цитоплазме, так как не имеет ядерной оболочки. Эти компоненты являются обязательными. Кроме того, бактериальная клетка может иметь необязательные (дополнительные) компоненты, такие как капсула, споры, жгутики, включения (например, зерна волютина). Они выявляются с помощью сложных методов окраски или специальных методов исследования (например, микроскопия препаратов, приготовленных из живых микроорганизмов), что может иметь большое значение для идентификации бактерий.
|
|
|
Цель занятия:
1. Ознакомиться со структурными (дифференциальными) особенностями прокариот и овладеть некоторыми методами их изучения (окраска по Граму и изучение подвижности).
Учебно-целевые задачи:
Знать:
1 Постоянные и непостоянные структуры бактериальной клетки, их функции.
2. Различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий.
3. Методы изучения структурных особенностей микроорганизмов в нативном и окрашенном состоянии:
а) технику приготовления и особенности микроскопии нативных препаратов;
б) сложный метод окраски по Граму.
Уметь:
1. Окрасить препарат методом Грама.
2. Приготовить и микроскопировать препараты из живых бактерий
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
1. При сложных методах окрашивания на один и тот же препарат воздействуют несколькими красящими веществами, одно из которых называется основным, другие - дополнительными. Кроме красителей используются различные обесцвечивающие вещества: спирты, кислоты, ацетон и др., которые играют роль дифференциаторов. С помощью сложных методов окрашивания выявляют цитологические особенности клеток микроорганизмов (клеточные структуры, запасные вещества, включения и т. д.)
Окраска по методу Грама является самым универсальным из сложных методов окраски. Окраска положена в основу дифференциации бактерий и отражает способность клеток воспринимать и удерживать внутри клетки красящий комплекс генцианвиолета и йода, либо терять его после обработки спиртом. В характеристике микроба каждого вида обязательно указывают на отношение к окраске по Граму. Все бактерии по отношению к этому методу окраски делятся на две группы: грамположительные: (Bacillus, Clostridium, Staphylococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Sarcina, etc.) и грамотрицательные (Escherichia, Pseudomonas, Erwinia, Neisseria, Rickettsia, etc.) формы.
|
|
|
Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генциан - виолета и йода. У грамположительных бактерий основным веществом клеточной стенки (до 90%) являются мукопептиды - муреин (пептидогликан) в соединении с тейхоевой кислотой и рибонуклеатом магния. У грамотрицательных бактерий однослойный муреин располоагается в глубине клетки, значительно больше содержится белков и липидов, которые вместе с полисахаридами образуют поверхностные слои в виде мозаики, их цитоплазма содержит РНК и ДНК в соотношении 8:1 и 1:1 соответственно. Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Это объясняется также меньшим диаметром пор у грамположительных бактерий, что способствует удержанию образовавшегося комплекса при обработке бактерий этиловым спиртом.
|
|
|
