 |
Реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vivo
|
|
|
|
Реакция нейтрализации на животных применяется
- для определения специфической активности анатоксинов и опытной дозы токсина по стандартной антитоксической сыворотке (дифтерийной, столбнячной и др.). Активность анатоксинов выражается в единицах связывания (ЕС). ЕС – количество анатоксина, которое целиком связывается с 1МЕ/мл антитоксической сыворотки;
- для идентификации токсина бактерий (возбудителей газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма и др.) по стандартной антитоксической сыворотке;
- для титрования антитоксических сывороток (противодифтерийная, противостолбнячная, и др.) по стандартному токсину. Титрование – это определение количества антитоксинов в 1 мл сыворотки. Специфическая активность сывороток выражается в международных антитоксических единицах (МЕ). 1МЕ – минимальное количество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах: смертельных, некротических или реактивных дозах в зависимости от вида токсина и способа титрования.
Титрование антитоксических сывороток может производиться следующими методами:
Метод Эрлиха. Титрование антитоксических сывороток по известной смертельной (опытной) дозе токсина.
Проводится в 2 этапа:
1) определение опытной дозы токсина. Смертельная доза – это количество токсина, которое в смеси с 1МЕ стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных.
2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, инкубируют 45 минут и вводят животным. По результатам производят расчет титра сыворотки.
Метод Ремера Титрование антитоксических сывороток по известной некротической дозе токсина.
|
|
|
Проводится в 2 этапа:
1) определение опытной некротической дозы токсина путём внутрикожного введения морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. Некротическая доза токсина – это его минимальное количество, которое в смеси с 1/50МЕ стандартной сыворотки вызывает на месте внутрикожного введения некроз на 4-5 – й день;
2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина и вводят внутрикожно морской свинке.
По результатам производят расчёт титра сыворотки. Так титруется противодифтерийная сыворотка.
РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ВИРУСОВ
Реакция нейтрализации основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов. Она применяется в двух направлениях:
1) для идентификации вирусов;
2)для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.
Компоненты:
1.Исследуемый вирус (при идентификации выделенного вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции).
2.Диагностическая (группо-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус – диагностикум (при серодиагностике).
3.Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.
Реакции нейтрализации in vivo ставят в культурах клеток (см. прилож. 3, рис.15), куриных эмбрионах и на лабораторных животных.
Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный) + сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течение определенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион или лабораторное животное. При (+) реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле – гибель или характерные изменения.
|
|
|
Реакция нейтрализации in vitro – реакция торможения гемагглютинации (РТГА).
РТГА применяется:
- для серотипирования вирусов;
- для серодиагностики инфекций.
Выделяют два способа постановки:
- капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серотипирования вирусов;
- развернутый в пробирках.
Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса: При наличии в сыворотке антител – антигемагглютининов наблюдается ингибированные активности вирусов (см. прилож. 3, рис.16).
РТГА. Цель: серотипирование вируса гриппа А.
Компоненты.
1.Исследуемый материал – аллантоисная жидкость куриного эмбриона.
2.Диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки.
3.5% взвесь куриных эритроцитов.
4.Физиологический раствор.
Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).
ОПСОНО – ФАГОЦИТАРНАЯ РЕАКЦИЯ
Применяется для определения опсонинов – антител, стимулирующих фогоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.
Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Fав – фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Fc – фрагментов к Fc – рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.
| Компоненты | опыт | Контрль |
| 1. Исследуемая сыворотка 2. Нормальная сыворотка 3. Суточная микробная культура (напр., стафилококковая) 4. Фагоциты – взвесь нейтрофилов | + - + + | - + + + |
Инкубация при 370С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому – Гимзе и считают под микроскопом количество микробов в 100 и более нейтрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.
|
|
|
Фагоцитарный показатель – количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.
Опсонический индекс – фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.
Опсоно-фагоцитарный индекс – это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглащенных микробов). Максимальный показатель – 75.
ИММУННЫЙ СТАТУС
Иммунный статус определяется совокупностью показателей специфических и неспецифических факторов защиты и характеризует индивидуальную иммунореактивность организма. Оценка иммунного статуса имеет значение:
-для выявления иммунологической недостаточности (иммунодефицита) и других патологических нарушений работы иммунной системы;
-наблюдения за эффективностью иммунодепрессивной или иммуностимулирующей терапии;
-определения показаний и выбора терапевтических препаратов.
Исследование иммунного статуса включает проведение тестов 1-го и 2-го уровней.
Тесты 1-го уровня (ориентирующие):
1.определение факторов естественной резистентности (БАС, лизоцим, комплемент и др.);
2.подсчет абсолютного и относительного числа лимфоцитов в периферической крови;
3.подсчет числа Т- и В- лимфоцитов;
4.оценка фагоцитарной активности лейкоцитов;
5.определение концентрации разных классов иммуноглобулинов.
Тесты 2-го уровня (аналитические):
1.определение субпопуляции Т- лимфоцитов;
2.определение функциональной активности Т- и В- лимфоцитов;
3.определение медиаторов иммунной системы;
4.Тесты на ГЧЗТ.
|
|
|
