Ход работы

Получение накопительной культуры аммонификаторов-аэробов

Аммонификаторы-аэробы обычно выделяются на пластинках МПА в чашках Петри. Однако следует иметь в виду, что на МПА, помимо аммонифицирующих бактерий, могут выделяться и другие микроорганизмы.

Для заражения питательной среды в колбе объемом 250 мл готовят почвенную суспензию: 10 г почвы на 90 мл стерильной дистиллированной воды. Пробирки с МПА разогревают на водяной бане, охлаждают до температуры 40—50°С и заражают почвенной болтушкой, перенося одну петлю взвеси из колбы в пробирку с МПА. Содержимое пробирки перемешивают вращением ее между ладонями и выливают в стерильную чашку Петри. Засеянные чашки Петри помещают в термостат при температуре 25— 28°С.

Через 3—4 суток на поверхности МПА в чашках Петри развиваются колонии микроорганизмов. Наиболее характерные из развившихся колоний описывают и микроскопируют. На пластинках МПА преимущественно развиваются колонии бацилл.

Вас. subtilis—подвижная палочка, одиночная или соединенная в длинные цепочки, размером 3—5 мкм. Споры овальные, располагаются центрально. Колонии на МПА, сухие, морщинистые, срастающиеся с агаром.

Вас. subtilis vаr теsепtеriсиs—подвижная палочка размером 3—10 мкм, часто соединенная в цепочки. Споры овальные, расположены центрально. Колонии на МПА тонкие, сухие, морщинистые, не срастаются с субстратом.

Вас. сеrеиs—подвижная толстая палочка, нередко соединенная в цепочки, размером 3—5 мкм. Споры овальные, расположены центрально. Колонии на МПА, толстые, со складчатым центром и ризоидными волнистыми краями.

Вас. сеrеиs vаr тусоidеs—подвижная палочка, одиночная или соединенная в цепочки, размером 5—10 мкм. Споры овальные, расположены центрально. Колонии на МПА, плоские ризоидные, стелющиеся по поверхности агара.

Помимо бацилл, на пластинках МПА развиваются колонии бактерий, преимущественно Рseudomonas fluorescens—мелкая, подвижная палочка размером 1—2 мкм. Культура образует зеленовато-желтый флуоресцирующий пигмент. На МПА колонии часто бесцветные, выпуклые, блестящие; Proteus vulgaris—клетки отличаются большой полиморфностью, в молодых культурах клетки мелкие, размером 1—3 мкм, подвижные, позднее появляются нитевидные формы длиной 10—20 мкм. Колонии стелются по поверхности агара тонким, едва заметным налетом, Achromobacter prodigiosum—мелкая, подвижная палочка, близкая по форме к кокку, размером 0, 6—1, 0 мкм. Колонии на МПА гладкие или зернистые, ярко-красные, с металлическим блеском.

Для выделения исключительно спорообразующих аммонифи-цирующих бактерий почвенную болтушку предварительно перед высевом пастеризуют на водяной бане 10 мин при температуре 80°С. При этом вегетативные клетки бактерий погибают, споры сохраняются жизнеспособными. Высев из почвенной болтушки проводят на среду Мишустина (смесь МПА с СА в отношении 1: 1) в чашки Петри, как указано выше, для выделения аммонификаторов-аэробов.

На среде Мишустина по культуральным и частично по морфологическим признакам удается дифференцировать ряд бацилл на виды. При проведении микробиологического анализа почвы изучению споровых форм бактерий уделяется особое внимание, так как каждый тип почвы характеризуется своей специфичной бациллярной микрофлорой. Спорообразующим формам бактерий отводится ведущая роль в превращении сложных органических веществ в почве, не разлагающихся под воздействием неспороносных бактерий. Количество споровых форм бактерий в почве является, по Мишустину, показателем глубины трансформации органических веществ, а следовательно, и плодородия почвы.

Получение накопительной культуры аммонификаторов-анаэробов.

Аммонификаторы-анаэробы легко выделяются на мясном бульоне с добавлением 2%-ного пептона, оптимальная рН среды 7—8. Среду наливают высоким слоем в большие пробирки, закрывают плотно ватными пробками и стерилизуют в автоклаве.

Рис. 19. Аммонификаторы белка анаэробы: Clostridium paraputrificum и Clostridium bifermentas. Фуксин.

Среду заражают комочком почвы. Для обнаружения выделяющегося аммиака под пробку пробирки подвешивают полоску красной лакмусовой бумаги, а для обнаружения сероводорода — полоску фильтровальной бумаги, смоченную 10 %-ным раствором уксуснокислого свинца. Полоски бумаги не должны касаться жидкости в пробирке. Для герметичности пробирку плотно закрывают целлофановым колпачком, закрепляя его резиновым колечком. Зараженные пробирки помещают в термостат при температуре 25—28°С.

На препаратах преимущественно выделяются бактерии: Clostridium paraputrificum—подвижная, палочка, одиночная или соединенная в цепочки, размером 7—9 мкм. Спора расположено терминально на одном из концов клетки. Встречается в гниющих трупах, навозе, пищевых, продуктах; Clostridium bifermentas —подвижная палочка, одиночная или соединенная в цепочку, размером 3—5 мкм. Спора расположена эксцентрально. При разложении белка образуется большое количество сероводорода (рис. 19).