 |
Министерство сельского хозяйства, пищевой и перерабатывающей промышленности Тверской области
|
|
|
|
Министерство сельского хозяйства, пищевой и перерабатывающей промышленности Тверской области
ГБП ОУ «Кашинский колледж»
Рабочая тетрадь
для студентов 2 курса
Основы микробиологии
для студентов дистанционной формы обучения
специальности 36. 02. 01 Ветеринария
___________________________________________________________
Ф. И. О. студента
г. Кашин
Лабораторная работа № 1
Тема: Изготовление и окрашивание микроскопированных готовых мазков, отпечатков из органов и трупов животных
Цель занятия: Изучить методику изготовления мазков из культур микробов и мазков- отпечатков отпечатков. Технику безопасности при работе с инфекционным материа-
лом и больными животными.
Литература: И. А. Бакулов. Эпизоотология с микробиологией, с. 18-22.
Задание № 1. Изучить технику безопасности при работе с инфекционным материалом и больными животными, изготовление мазков.
Задание № 2. Изучить устройство микроскопа.
Методика выполнения:
Задание №1.
При работе с патологическим материалом и больными животными внимание ветеринарного специалиста должно быть сосредоточенно на двух основных моментах: предупредить заражение людей и не допустить распространения возбудителя инфекции. Существуют инфекционные болезни животных, которыми может заразиться человек (зооанотропонозы): сибирская язва, туберкулез, бруцеллез, туляремия, Ку-лихорадка, лептоспироз, листериоз, мелиоидоз, бешенство, болезнь Ауески, ящур, дерматомикозы (трихофития, микроспория), сап, сальмонеллезы, эктима, чума верблюдов (зоантропонозная чума), рожа свиней, орнитоз. Заражение человека этими болезнями может произойти при: клиническом осмотре животных и оказании им лечебной помощи; вскрытии трупов и взятии патологического материала для лабораторного исследования; проведения прививок и диагностических исследований; работе с патологическим материалом лаборатории; соприкосновении с необеззараженным сырьем животного происхождения (кожа, шерсть и т. п. ) переработке мясных и молочных продуктов; употреблении в пищу инфицированных продуктов животного происхождения. В организм человека патогенные микробы проникают через кожу при нарушении ее целости, главным образом рук, а также через слизистые оболочки рта, носовой полости, дыхательных путей, глаз и пищеварительного тракта.
|
|
|
Чтобы предохранить себя и других от заражения инфекционной болезнью и не допустить ее распространения, нужно соблюдать следующие меры предосторожности:
1) люди, допускаемые к работе с патологическим материалом и больными животными, должны быть тщательно проинструктированы;
2) все работы с больными животными и патологическим материалом выполняют только в защитной одежде, включающей халат (с завязками на спине и рукавах), колпак или косынку, при необходимости – нарукавники, передники, резиновые перчатки, резиновые сапоги, очки и защитные марлевые маски. Людей с повреждениями на руках к этой работе, как правило, не допускают. При необходимости разрешают работать только в резиновых перчатках, раны на руках смазывают настойкой йода и затем коллодием. Перед надеванием проверяют целость резиновых перчаток;
3) оборудование лаборатории и рабочего места должны обеспечивать высокую производительность труда и его безопасность;
4) при работе с патологическим материалом нельзя курить, разговаривать, касаться лица руками, сморкаться, поправлять волосы, отвлекаться от работы. Следует избегать лишних передвижений. В лаборатории запрещается хранить и принимать пищу;
|
|
|
5) руки после работы погружают в сосуд с дезинфицирующей жидкостью (2%-ный раствор фенола) на 1 – 2 мин, затем тщательно моют водой с мылом;
6) использованные в работе пипетки, предметные и покровные стекла, куски ваты и т. п. тотчас помещают в сосуд с дезинфицирующей жидкостью (5%-ный раствор фенола; 3%-ный раствор лизола или креолина). Металлические предметы, бывшие в контакте с патологическим материалом, немедленно обеззараживают прокаливанием на пламени. Инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и др. ) после употребления кипятят в стерилизаторе или кладут в закрытый сосуд для последующего автоклавирования. Если патологический материал попал на окружающие предметы, необходимо немедленно провести тщательную дезинфекцию, залив это место дезинфицирующим раствором, а затем, если можно, прожечь данное место с помощью тампона, смоченного спиртом;
7) весь патологический материал (культуры микробов, трупы животных и т. п. ), не подлежащий дальнейшему исследованию, обеззараживают (автоклавируют, сжигают). Место работы с этим материалом должно быть тщательно продезинфицировано и очищено. Допускается только влажная уборка помещений. Особое внимание уделяют удалению пыли с предметов, находящихся в лаборатории. Для обеззараживания комнат, где работают с патологическим материалом, применяют бактерицидные лампы.
Меры против заражения при попадании патологического материала в организм человека: а) при ранениях инфицированным инструментом или при покусе животным не следует торопиться с остановкой кровотечения. Рану нужно прожечь настойкой йода и наложить 40-60%-ную спиртовую повязку; б) при попадании патологического материала в рот его немедленно выплевывают в чашку с дезинфицирующей жидкостью, а рот в течение нескольких минут прополаскивают слабым раствором йода (3 – 5 капель настойки йода на стакан воды) или перманганата калия; в) если патологический материал попал в глаз, его нельзя тереть; следует промыть глаз слабым раствором йода или перманганата калия.
Правила обращения с больными инфекционными болезнями животных. Ветеринарный специалист соприкасается с больными животными во время их исследования (при постановке диагноза), при оказании лечебной помощи, убое животных, вскрытии трупов, проведении эпизоотических мероприятий. Любая работа с больными и в особенности с подозрительными по заболеванию заразными болезнями животными проводится только в защитной одежде.
|
|
|
Исследование больного животного слагается из предварительного ознакомления, включающего регистрацию его, изучение документов и сбор анамнестических, в том числе эпизоотологических, данных, и собственно исследование, которое, в свою очередь, делится на общее исследование (внешний осмотр, исследование кожного покрова и видимых слизистых оболочек и лимфатических узлов, термометрия) и специальное исследование (исследование отдельных систем и органов). При необходимости берут кровь и другие материалы для лабораторного исследования. При исследовании больных и подозрительных по заболеванию животных необходимы чрезвычайная осторожность и продуманность действий. Прежде чем вплотную приступить к этому, надо собрать по возможности полный анамнез, провести предварительное наблюдение за животным и беглый клинический осмотр. Например, если кажется, что собака подавилась костью, прежде чем исследовать глотку, надо тщательно расспросить хозяина о поведении животного в последние дни, характере кормления, о возможных контактах с другими животными, особенно собаками, выяснить нет ли подобных признаков у собак или кошек, принадлежащим соседям. И только после всего этого, соблюдая все меры предосторожности, можно начинать исследовать животное (возможно бешенство! ).
Осторожность нужно соблюдать и при оказании больным животным лечебной помощи (при отделении последа или родовспоможении можно заразиться бруцеллезом; ошибочное вскрытие сибиреязвенного карбункула повлечет за собой рассеивание возбудителя болезни и возможность заражения человека). Место, где проводилась работа с больным животным, дезинфицируют.
|
|
|
Мазки готовятся на предметных стеклах. Ввиду того что от качества стекла зависит и качество мазка, необходимо хорошо промывать его и обезжиривать.
| Рис. Техника приготовления мазка. |
Стекло нужно хорошо промыть в проточной воде, а стекла, бывшие в употреблении, прокипятить в соде или еще лучше, по нашим наблюдениям, — в зольном щелоке. Прокипяченные в зольном щелоке стекла затем хорошо промывают в проточной воде, вытирают чистой сухой тряпочкой и помещают в смеси спирта с эфиром (в равных частях). Перед работой стекла вынимают с помощью пинцета и насухо вытирают чистым полотенцем. Лучшими стеклами являются приготовленные из фотопластинок, так как они не имеют пузырьков и поверхность их ровная и чистая.
В случае нужды можно использовать и старые стекла, бывшие в употреблении. После просмотра и браковки негодных стекол их подвергают тщательной обработке и очистке и после этого хранят в смеси спирта с эфиром.
Первую каплю крови удаляют ваткой, а из второй капли изготовляется мазок. Кровь необходимо использовать возможно быстрее, пока она не претерпела изменений И не потеряла своих фи-зических свойств. Быстронаступающее свертывание крови делает приготовление мазка совершенно невозможным.
Мазок крови нужно делать возможно быстрее и увереннее. При этом условии мазки получаются ровными, однородными и не имеют прерывистых линий (гармошка). При приготовлении мазка предметное стекло зажимается между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке находится шлифованное покровное стекло. Капля крови снимается прикосновением поверхности предметного стекла. У беспокойных животных каплю крови можно снять углом покровного стекла, а затем перенести ее на предметное стекло. Для получения мазков хорошего качества необходимо брать небольшие капли крови.
Прислонив край покровного стекла к капле крови, которая находится на предметном стекле, дают возможность распределиться ей между двумя стеклами. Если стекла чистые и сухие, кровь, в силу капиллярности, распределяется почти моментально. Угол между покровным и предметным стеклом не должен превышать 45—50°. Покровное стекло фиксируется между пальцами правой руки так, чтобы кончик одного или обеих пальцев касался края предметного стекла. В этих случаях мазки получаются с ровными краями. Передвигая покровное стекло по предметному спокойно и не очень быстро, приготовляют мазок. Кровь при движении покровного стекла движется(тянется) за стеклом, а не впереди его, и не подвергается травмированию. Такие мазки называют «вытяжными», что дает довольно точное определение процесса их изготовления.
|
|
|
Приготовленный мазок необходимо сейчас же высушить. Летом это можно сделать, положив его в перевернутом виде на спичку. Переворачивание стекла мазком вниз необходимо делать потому, что летом мазки очень часто портятся мухами. При работе в сыром и холодном помещении мазки можно высушивать на руке, а затем убирать в боковой карман, прикрыв его предварительно чистым стеклом с целью сохранения мазка от повреждения.
Если изготовление мазков производится на морозе 10—15°, то для предотвращения гемолиза, когда они внесены в помещение, их нужно сразу же опустить в кювету с метиловым спиртом и в таком виде нести в теплое помещение.
После фиксации в спирте в течение 5—10 минут мазки окрашиваются обычным методом. Обработанные таким образом мазки ничем не отличаются от сделанных в сухом и теплом помещении и могут быть использованы для самых тонких гематологических исследований.
Просушивание мазков на пламени горелки не рекомендуется, так как форменные элементы крови деформируются и мазки становятся непригодными для исследования. Когда мазок высох, на нем пишется порядковый номер, кличка животного или номер, а также дата приготовления мазка.
Для окраски и исследования отбираются лучшие мазки. Хороший мазок должен отвечать следующим требованиям.
1. Он должен быть уже и короче стекла, т. е. должен иметь свободные края по длине и зазубренный край по ширине в конце мазка.
2. Края мазка должны быть ровными.
3. Мазок должен быть тонким, гомогенным, без просветов и прерываю щих линий, с нежной поверхностью и без следов гемолиза.
Рис. Правильно и неправильно приготовленные мазки: 1 — мазок на плохо обезжиренном стекле; 2 —слишком короткий мазок; 3 — слишком длинный неравномерный мазок; 4—слишком толстый мазок; 5—Правильный мазок, тонкий, равномерный и достаточно длинный.
При дальнейшем хранении препаратов необходимо оберегать их от насекомых, влаги, действия кислот и щелочей, дыма и различных газов. Плохо сохраняемые мазки становятся иногда совершенно непригодными для исследования, несмотря на качественное приготовление их вначале.
Фиксация мазков. Фиксация мазков преследует цель закрепить клетки крови в таком виде, чтобы форма и внутренняя структура их не изменялась. Большинство артефактов, обнаруживаемых при исследовании мазка крови, зависит от плохой фиксации. Лучшим фиксатором мазков является абсолютный метиловый спирт.
Спирт можно наслаивать непосредственно на мазок высоким слоем. Препарат в этом случае должен лежать горизонтально. Можно также опускать препарат в спирт, налитый в кюветы. В этом случае весь препарат погружается в спирт. Чтобы предотвратить улетучивание спирта, кювета закрывается крышкой или пробкой.
Фиксация метиловым спиртом производится в течение 3—5 минут. Спирт можно использовать для фиксации препаратов вторично, если он не загрязнен. Способ фиксации в кюветах удобен тем, что позволяет фиксировать одновременно четыре препарата.
|
 |
Задание № 2.
М и к р о с к о п и е г о у с т р о й с т в о. Микроскоп – оптический прибор, с помощью которого рассматривают и изучают мельчайшие организмы и предметы, невидимые простым глазом. Микроскопы, производимые отечественной промышленностью для биологических исследований: биолам P-микроскоп биологический рабочий с моно- или бинокулярной насадками, увеличение от 50 до 1800 раз; биолам Д-микроскоп биологический дорожный; биолам С-микроскоп биологический студенческий; люмам Р- рабочий и люмам И-исследовательский люминесцентные микроскопы.
Каждый микроскоп имеет две основные системы: механическую и оптическую (рис. 1). Механическая система микроскопа состоит из штатива, включающего ножку (1) и тубусодержатель (3) или колонку. К ней прикреплен тубус (5) с вращающимся барабаном-револьвером (7) на нижнем конце. Тубус передвигается макрометрическим винтом (2), для тонкой наводки служит микрометрический винт (11). К ножке прикреплен предметный столик (8), на который помещают исследуемый препарат, закрепляемый зажимами.
Оптическая система состоит из зеркала(10), конденсора(9) с ирисовой диафрагмой, объективов (6) и окуляра (4). Степень увеличения объективов указана на оправе: *8, *10, *20, *40, *60, *90. Различают два типа объективов: сухие и иммерсионные (масляные). При работе с иммерсионными объективами каплю масла (кедрового, вазелинового или касторового) наносят на мазок и с помощью макрометрического винта осторожно под контролем глаза погружают объектив масло, не прикасаясь к стеклу. Наблюдая в окуляр, медленно поднимают макровинтом тубус до появления изображения. Для тонкой наводки используют микрометрический винт. Окуляры отечественных микроскопов обозначаются 7*, 10*, 15*, 20*, т. е. цифрами, указывающими на степень их собственного увеличения. Умножив цифру на оправе объектива на цифру окуляра, получим число, показывающее, во сколько раз увеличивает микроскоп.
Перед работой с микроскопом надо установить освещение. При дневном свете пользуется плоским зеркалом, при искусственном – вогнутым. В качестве источников искусственного света используют лампы – осветители. Когда свет установлен, берут препарат, помещают на предметный столик и изучают сначала под малым, а затем под большим увеличением, используя для этого сухую или иммерсионную систему.
|
|
|
