 |
простая радиальная иммунодиффузия по Манчини
|
|
|
|
Цель - определение класса и концентрации Ig в сыворотке пациентов(сероидентификация).
Компоненты (ингредиенты) – гель, содержащая антиглобулиновую сыворотку (Ат против Ig человека) и сыворотка пациента (содержащаяIg), которая вносится в лунки.
Визуально вокруг лунки с исследуемым материалом образуется
преципитат в виде кольца.
Двойная, или встречная, иммунодиффузия по Оухтерлони
Сущность - диффундируют оба компонента реакции,между которыми образуются полосы «усы» преципитации.
Компоненты (ингредиенты) – в центральной лунке сыворотка к Аг, в периферических лунках Аг
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: иммуноэлектрофорез
Сущность – электрофоретическое разделение белков (исследуемого материала) в забуференном агаровом геле;
в канавку (параллельно миграциибелков) вносят преципитирующую сыворотку;
дуги преципитации дают представление о составе исходнойсмеси антигенов по своему:
количеству,
расположению,
*форме
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: иммуноблотинг
электрофоретическое разделение антигенов в полиакриламидном геле;
перенос их на микропористую нитроцеллюлозную мембрану;
обработка моноклональными антителами;
выявление преципитатов с помощью меченной антиглобулиновой сыворотки (напр. в РИФ, ИФА)
48. реакции агглютинации
Этапы (стадии)
o СПЕЦИФИЧЕСКАЯ (невидимая) – взаимодействие Аг и АТ, формирование решетки (каркаса)
o НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ (видимая) – выпадение решетки (каркаса) в осадок
Способы постановки
1. Прямая реакция агглютинации:
- пластинчатая (ориентировочная)
- объемная (развернутая)
2. Непрямая реакция агглютинации:
эритроциты – гемагглютинация (РНГА,РОНГА);
|
|
|
частицы латекса - латекс-агглютинация;
стафилококки – коагглютинация;
3.На стекле (пластинчатая, ориентировочная) –чаще используется для идентификации антигена
Компоненты (ингредиенты): чистая культура неизвестного микроба и агглютинирующие диагностические сыворотки (поли- и моновалентные)
4.В пробирке (объемная, развернутая) – чаще используется для обнаружения антител (серодиагностики) и определения их количества (титра);
Повторение ее через 5-7 дней позволяет выявить нарастание титра антител у больного человека (метод парных сывороток);
Компоненты (ингредиенты): сыворотка больного и диагностикумы.
47 .виды серологических реакций
1. Простые (2-х компонентные: Ag + Ig)
РА (с корпускулярным антигеном)
РП (с растворимым антигеном)
2. Сложные (3-х компонентные):
(Ag + Ig + C) – РСК.
3. С использованием метки: РИФ, ИФА,РИА, ИЭМ.
46. Серологические реакции: цели применения
Серологическая диагностика – определение неизвестных Ат в сыворотке (или других биологических жидкостях) крови больного с помощью известного Аг (диагностикума):
а) неизвестные Ат – это искомые Ат сыворотки крови людей (больных, переболевших, носителей, вакцинированных);
б) диагностикум – это стандартные препараты, которые получают из чистых культур микроорганизмов определенных видов или их Аг. Микроорганизмы выращивают, затем инактивируют, стандартизируют (количество микробов в единице объема); инактивируют нагреванием, обработкой формалином, спиртом, ультразвуком и т.д. (диагностикум теряет патогенность, но сохраняет Аг свойства).
Серологическая идентификация –определение вида неизвестного Аг при помощи известных Ат:
а) неизвестные Аг – это микроорганизмы,токсины, белки крови, клетки разных органов
и тканей другого вида, клетки трансплантантов;
б) известные Ат – это стандартные препараты –иммунные диагностические сыворотки, специфичные определенному (искомому) Аг.
|
|
|
45.
44. Серологические реакции – реакции Аг+Ат,протекающие in vitro
Серология (от лат. serum – сыворотка) ► Раздел иммунологии, изучающий закономерности взаимодействия Аг и Ат сыворотки крови.
Характеристика
Взаимодействие Аг и Ат строго специфично;
Проходят при эквивалентных соотношениях Аг и Ат;
Имеют двухфазный характер:
а) специфическое взаимодействие – фаза «невидимая»;
б) образование видимых комплексов (для этого добавляют физ.раствор);
Проходят по типу физико-химической реакции в коллоидной системе;
Выделяется небольшое количество тепла(слабоэкзотермичны).
43. Антигены бактерий
Жгутиковый (Н-антиген) локализован в локомоторном аппарате бактерий – жгутиках. Представляет собой белок флагеллин, при нагревании быстро разрушается и теряет свою специфичность.
Соматический (О-антиген) связан с клеточной стенкой бактерий. Его основу составляют липополисахариды. Этот антиген термостабилен и не разрушается при кипячении.
Капсульный (К-антиген) расположен на поверхности клеточной стенки бактерий, образующих капсулу, имеет гетерополисахаридную или белковую природу. Некоторые из К-антигенов термостабильны, другие – термолабильны.
42. Свойства антител
АФФИННОСТЬ – прочность связи конкретной паратоп/эпитоп; наибольшая -> у моноклональных антител, IgG.
АВИДНОСТЬ – прочность связи молекулы антитела с молекулой антигена в целом; наибольшая ->у IgM
НЕПОЛНЫЕ АНТИТЕЛА
*одновалентные антитела, не образующие видимого глазом гигантского иммунного комплекса в ходе реакций агглютинации или преципитации
* блокирующие антитела, реагины
Процесс взаимодействия антигена и антитела в серологических реакциях протекает в две фазы:
1) специфическая - фаза взаимодействия, в которой происходит комплементарное соединение активных центров антител (паратопов) и эпитопов антигена. Обычно эта фаза длится несколько секунд или минут;
Неспецифическая - фаза проявления, характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов. Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.
|
|
|
Оптимальное специфическое взаимодействие антител с антигеном происходит в изотоническом растворе с рН, близким к нейтральному. Реакция антиген-антитело в системе in vitro может сопровождаться возникновением нескольких феноменов - агглютинации, преципитации, лизиса. Внешние проявления реакции зависят от физико-химических свойств антигена (размер частиц, физическое состояние), класса и вида антител (полные и неполные), а также условий опыта (консистенция среды, концентрация солей, рН, температура).
|
|
|
