 |
Модификация синтетических каучуков биологически активными не каучуковыми компонентами НК и их аналогами
|
|
|
|
Необходимость совершенствования свойств синтетического полиизопрена требует поиска путей его модификации. Одним из актуальных направлений является получение синтетического аналога натурального каучука. Очевидно, что получение аналога НК не равнозначно получению идентичного углеводорода. В комплексной структуре природного полиизопрена важная роль принадлежит некаучуковым веществам, большую часть которых составляют липиды, связанный и несвязанный белок, оказывающие влияние на весь комплекс свойств натурального каучука.
В настоящее время в зарубежных странах проводятся исследования по изучению механизма биосинтеза НК в растениях с целью моделирования данного процесса в промышленности с целью получения синтетического аналога натурального каучука [14].Также проводятся работы по выделению биокаталитических систем с применением биотехнологических приемов[15]. Эти исследования имеют большую теоретическую ценность, однако, ввиду их необычайной сложности, носят поисковый характер.
В нашей стране также проводились исследования биосинтеза каучука в культуре клеток и тканей растений-каучуконосов [16]. Полученное вещество содержало незначительную часть полиизопрена. В целом, получено низкомолекулярное окисленное соединение [17].
Одним из путей решения задачи совершенствования синтетического полиизопрена, сближения с НК, может служить химическая модификация СКИ-3. Правомерность такой задачи подтверждается наличием функциональных групп в молекулярных цепях НК, положительное влияние которых на свойства каучука известно [18,19,20]. Физическая модификация – совмещение эластомера с химически инертными веществами – не может считаться перспективной для повышения общего комплекса свойств таких материалов, поскольку при этом улучшение одних свойств, как правило, приводит к ухудшению других. Наилучшего эффекта можно добиться совместным применением химической и физической модификаций.
|
|
|
Особый интерес в этом отношении представляет собой химическая модификация каучука на стадии его изготовления за счет введения в полимерные цепи реакционоспособных функциональных групп.
Для выбора наиболее рациональных путей химической модификации проводились исследования по выявлению общих закономерностей влияния функциональных групп различного типа на структуру и свойства резин и влиянию факторов, ответственных за улучшения ряда характеристик резиновых смесей и вулканизаторов. При этом специфика действия модифицирующих функциональных групп практически не зависит от молекулярной основы полимера [21], а определяется главным образом их природой, которая оказывает влияние на характер химического и физико-химического взаимодействия между компонентами резиновой смеси, определяющего технологические и эксплуатационные свойства резин: межфазное взаимодействие эластомера с наполнителем, энергетический спектр вулканизационных связей, скорость и степень сшивания, стабильность эластомерных композиций при переработке и эксплуатации.
Наиболее перспективным представляется введение групп, обладающих полифункциональным действием, обеспечивающих положительное влияние на все факторы. Получены положительные результаты по модификации СПИ бинарным системам функциональных групп (аминоароматических и ангидридных), обеспечивающих повышение когезии смесей, приближающейся к уровню НК, модуля упругости резин, их адгезии к корду, усталостной выносливости [22].
Особенно важно взаимодействие модифицированного эластомера с техническим углеродом, так как это играет важную роль в усилении резин, которое обусловлено образованием как физических, так и химических связей, количество и соотношение которых может меняться в зависимости от свойств взаимодействующих компонентов. Введение в полимерную структуру амидных, аминоэфирных, нитроаминоароматических и ангидридных групп усиливает взаимодействие эластомера с техническим углеродом, а сложноэфирные группы не оказывают подобного влияния [21].
|
|
|
Одним из таких путей модификации синтетического полиизопрена может быть введение в эластомерную матрицу белковых фрагментов, которые присутствуют в НК, или в простейшем случае, аминокислот входящих в состав белков НК. Попытки модифицировать синтетический полиизопрен белками и аминокислотами предпринимаются давно, однако, эти опыты не выходят за стадию лабораторных испытаний [23].
Во ВНИИСКе совместно с НИИШПом были проведены исследования образцов СКИ-3, модифицированных разными типами белковых фрагментов при различных условиях их введения: при синтезе на стадии выделения из раствора [24]. Повышенное содержание азота, обнаруженное после экстракции ацетоном и водой, свидетельствует о присоединении белковых фрагментов к каучуку.
Ведение в каучук белковых веществ позволило несколько повысить когезионные свойства, модуль упругости, сопротивление раздиру [25]. Однако, для большинства образцов при различных условиях введения белковых фрагментов наблюдалось повышение структурирования каучуков, что приводило к ухудшению технологических свойств[24].
Эффективным способом модификации синтетического цис-1,4 полиизопрена может являться химическая иммобилизация на эластомерной матрице белковых фрагментов [26].
Белки могут вступать в реакцию радикальной полимеризации с мономерами типа стирола, метилметакрилата, акрилонитрила и другими [27]. Известна привитая сополимеризация кератина с винильными соединениями [28]. Данные примеры совместной полимеризации относятся к типу привитой сополимеризации мономеров на белки.
Однако непосредственное химическое взаимодействие полиизопрена с аминокислотами и белка осуществить не удается, вследствие отсутствия реакционноспособности относительно друг друга. Подобного рода взаимодействия могут быть реализованы различными косвенными путями [29].
|
|
|
·активированием молекул белка и аминокислот введением в их состав функциональных групп, реакционноспособных по отношению к макромолекулам полиизопрена [22]. Для усиления реакционной способности белков их предварительно можно обработать галогенами или диазосоединениями [30];
·активированием полиизопреновой матрицы введением в ее структуру функциональных групп, реакционноспособных по отношению к белкам и аминокислотам. Этот вариант представляет наибольший интерес, так как он, очевидно, реализуется в процессе биосинтеза НК и обеспечивает фиксацию белковых фрагментов на полиизопреновой матрице. В структуре НК обнаружены различные функциональные группы, в частности альдегидные и эпоксидные [22], реакционноспособные по отношению к белкам и аминокислотам, что, очевидно, и делает возможным протекание данного процесса;
·использованием соединений, активирующих процессы взаимодействия между белками, аминокислотами и полиизопреном, например, окислительно-востановительных систем, инициирующих процессы прививки фрагментов белка на молекулу полиизопрена [31];
·использованием аминокислот и белков с функциональными группами, способными в специфических условиях переработки, например, при латексной технологии, взаимодействовать с макромолекулами полиизопрена [32].
С целью поиска оптимальных условий проведения процесса была предпринята попытка систематического исследования указанных выше возможных способов иммобилизации белков и аминокислот.
При модификации синтетического полиизопрена аминокислотами и белками эффективно предварительное активирование эластомерной матрицы введением в нее ангидридных групп за счет взаимодействия с малеиновым ангидридом. Это обусловлено тем, что способы иммобилизации ряда белков и ферментов на данных функциональных группах широко известны и детально исследованы [33,34]. Выше были описаны свойства модифицированных этими функциональными группами эластомеров, резиновых смесей и вулканизатов на их основе.
|
|
|
При разработке промышленно-перспективных способов модификации СКИ-3 белками и аминокислотами необходимо выбирать такие соединения, которые обеспечивают введение в эластомерную матрицу небольших количеств функциональных групп, не ухудшая ее свойств. Примером таких групп являются эпоксидные группы [35]. Изучение взаимодействия полиизопрена, содержащего эпоксидные группы, с аминокислотами представляет интерес потому, что в работах, посвященных исследованию биосинтеза НК в растениях, теоретически рассматривается этап, заключающийся во взаимодействии эпоксидных групп НК с белковыми компонентами клеток [23].
Увеличение реакционной способности некоторых специфических аминокислот в составе белковой фракции НК, к числу которых относятся, в частности цистин, может происходить в латексе.
Среди функциональных групп аминокислот особое внимание привлекают сульфгидрильная, или тиоловая SH-группа цистеина и дисульфидная S-S-группа цистина. Это связано с высокой химической реакционной способностью этих групп, легко вступающих в разнообразные реакции со многими типами соединений, и может объясняться большим значением SH- и S-S-групп для специфических функций ряда ферментов (как, например Ко-фермента) и других биологически активных белков.
Использование серосодержащих аминокислот, таких как цистин, в промышленном масштабе сопряжено с трудностями экономического характера. В настоящее время проводятся изыскания технологий получения биологически активных веществ, получаемых из отходов мясомолочной промышленности [36]. Поиск более дешевых и доступных модификаторов привел к изучению возможности использования в качестве модифицирующей добавки гидролизата кератинового белка (ГКБ) [37]. Содержания в нем серосодержащих аминокислот доходит до 11%. Исследования модификации вводной дисперсии СКИ-3 ГКБ показали, что в результате модификации происходит взаимодействие кератинового белка с полиизопреновой дисперсией. Значительно улучшаются физико-механические свойства пленок из модифицированного ДСКИ-3.
Механическое введение белка в матрицу синтетического полиизопрена оказывает незначительное влияние на свойства смесей на его основе. Введение 1,6% мас. белка (количества, близкого к содержанию его в НК) вызывает изменение структуры синтетического каучука, приближая ее к структуре матрицы НК. Однако, последняя термодинамически более стабильная, чем структура системы СКИ-3 – несвязанный белок.
В товарном НК белок можно разделить на три вида: белок, связанный с молекулой каучука через пирофосфат в процессе синтеза, или продукт ферментативного гидролиза белка, образующийся в процессе обработки НК; белок, окружающий каучуковую глобулу и связанный с каучуком через посредник – молекулу фосфолипида; белок серума, осажденный вместе с каучуком в процессе коагуляции латекса, но химически с ним не связанный.
|
|
|
Первый вид белка смоделировать трудно, однако можно получить второй вид белка, связанного с каучуком через молекулу фосфолипида. Источником подобных комплексов могут стать микроорганизмы, содержащие подобные комплексы (напрмер, липопротеины) в своих мембраннах, или синтетический комплекс, причем вместо фосфолипидов могут выступать некоторые другие ПАВ [38].
Известны работы [39] по иммобилизации липидов и их аналогов на полимеры, при этом следует отметить возможность адсорбционной иммобилизации липидов.
В работах проведенных в МИТХТ совместно с НИИШП было показано, что добавки природных биополимеров в СКИ-3 придают последнему физико-механические свойства, приближающиеся к свойствам НК [39].
На первом этапе работы был выполнен качественный анализ по веществам, присутствие которых в латексе НК было достоверно установлено и строение которых достаточно достоверно доказано. В качестве таких веществ были выбраны: гидрофобный белок из латекса гевеи, растворимые белки серума того же латекса, лецитины разного происхождения, синтетические олигопренолфосфаты и пирофосфаты, а также гидрофобные белки и липидно-белковые смеси микробиологического и животного происхождения. Депротеинизацию торговых сортов НК (исходных, не подвергавшихся пластификации) проводили в разбавленных растворах (растворители – гексан, толуол) путем обработки активными добавками с последующим отделением белковой компоненты методом препаративного ультрицентрифугирования, затем депротеинизированный каучук выделяли сушкой под вакуумом в мягких условиях [40]. О содержании белка судили по определению азота с использованием прибора Кельдаля и анализу ИК-спектров.
Изомеризацию осуществляли в растворе толуола и в блоке путем обработки каучука оксидом серы, варьируя длительность и температуру. Об изменениях микроструктутры судили по появлению сигналов, соответствующих поглощению протонов trans – конфигурации звена изопренов в спектрах ЯМР, прибор Bruker – 500, ММР характеризовали методом ГПХ.
Кинетика кристаллизации является более медленной для фракции с низким содержанием белка по сравнению с нефракционированными образцами [41]. Однако основное влияние на кинетику статической кристаллизации (полупериод кристаллизации) оказывает не содержание белка, а содержание карбоновых кислот.
Изучение кристаллизации показало, что депротеинизированные образцы демонстрируют ориентационные эффекты при гораздо большем относительном удлинении (500 – 700 %) вместо 200 – 300 %для исходных, однако температура плавления кристаллической фазы депротеинизированных образцов в опытах по статической кристаллизации при этом практически не изменяется и составляет Тпл = 10-12оС.
Кинетика кристаллизации образцов с меньшим содержанием белка является более медленной, однако увеличение содержания белка выше 2–3 % масс. почти не влияет в дальнейшем на кинетику кристаллизации.
Объекты исследования
Натуральный каучук
Натуральный каучук (НК) – биополимер изопреноидной природы, типичный представитель широкого класса изопреноидов растительного происхождения, он вырабатывается в растениях, произрастающих в разных регионах мира (бразильская гевея, американская гваюла, среднеазиатский кок-сагыз) [1], представляет собой на 98 – 100% стереорегулярный циз-полиизопрен. Технические характеристики использованного в данной работе натурального каучука представлены в таблице 3.1
Таблица 3.1
Технические характеристики НК RSS1
| Загрязнённость, определённая на сите 45 мкм, %, не более | Начальная пластичность по Уоллесу, не менее | Показатель сохранения пластичности (ПСП), не менее | Содержание летучих веществ, %, не более | Содержание золы, %, не более |
| 0,5 | 33-47 тип 40 | 40 | 1,0 | 1,0 |
СКИ-3
Изопреновый каучук получают путем стереоспецифической полимеризации изопрена в растворе на катализаторах Циглера-Натта при температуре 30-
50 оС. Структура и химический состав:
Содержание цис-1,4-звеньев
транс-1,4 - 0-4%
Содержание Звеньев 1.2 и 3.4 в сумме 1-5%
Общая непредельность - 94-98%
Средневязкостная масса Мŋ – (350-1300)*103. Физические свойства СКИ подобны свойствам НК. Изопреновый каучук кристаллизуется при -25оС. Наименьшее относительное удлинение, при котором наблюдается образование кристаллической фазы при 20оС, составляет 300-400%. Параметр растворимости δр равен 16.8 (МДж/М3)1/2 [42]
Для изучения влияния биологически активных систем на комплекс свойств синтетических каучуков и резин на их основе были выбраны следующие продукты:
Липидный остаток биомассы Rhodobacter capsulatus
Из биомассы Rhodobacter сapsulatus (представитель аноксигенных фотосинтезирующих микроорганизмов) направленно получают бактериопурпурин для медицинских целей. Кроме того, биомасса Rhodobacter capsulatus может быть источником других ценных биологически активных соединений.
 |
Липидный остаток
Выход на сухую биомассу 6.45%
Бактериопурпурин
Выход на сухую биомассу 0.80%
Биотехнологический способ получения бактериопурпурина позволяет получать это ценное вещество с выходом не превышающим 1% на сухую биомассу. При этом образуются липидные отходы, которые не используются и могут быть источниками ценных БАС, в частности, ВЖК (насыщенных и ненасыщенных).
После проведения качественного анализа липидного остатка, на основании сравнения хроматографической подвижности, составляющих его веществ с хроматографическими характкристиками стандартных образцов и с учетом литературных данных, был сделан вывод о составе липидного отхода биотехнологического процесса переработки биомассы Rhodobacter capsulatus.
Идентификацию компонентов в липидном остатке Rhodobacter capsulatus проводили на основании результатов ТСХ в сравнении со свидетелями (образцы свободных жирных кислот и ацилглицеридов, токоферола, фитола) и на основании литературных данных.
На хроматограмме обнаружили: каротиноидные углеводороды, токоферолы, кислотосодержащие каротиноиды, высшие жирные кислоты, высшие жирные спирты. Для ТСХ анализа использовали систему петролейный эфир – этилацетат, 9:1.
Проведенное исследование, направленное на обнаружение полярных липидов показало их отсутствие в составе липидного остатка, что подтверждает гидролитическое расщепление фосфолипидов при щелочной обработке биомассы, в ходе которой выделяется бактериопурпурин, где в качестве образца сравнения использовали коммерческий лецитин, а детекцию проводили с помощью обработки хроматограммы, молибденовым синим [43].
Для количественного анализа других компонентов липидного остатка было проведено разделение компонентов смеси методом колоночной адсорбционной хроматографии на силикагеле. При использовании в качестве элюента бензола получили концентраты, обогащенные БАС различной природы.
Таблица 3.2
|
|
|
