 |
Выделение ЧК из производственной среды и посев культуры на чашки Петри
|
|
|
|
1. Из производственной среды отбирают небольшое количество (50-100 мл) дрожжевой суспензии. И проводят 3-4 промывки дистиллированной водой.
2. Заранее готовят 5 пробирок со стерильной водой по 9 мл в каждой (рис. 4). Пробирки закрывают ватными пробками. Данные пробирки служат для 5 кратного разведения дрожжей.
Из отмытых дрожжей отбирают 1 мл суспензии и вносят в первую пробирку, закрывают пробкой, затем из полученной водно-дрожжевой суспензии отбирают 1 мл и переносят в следующую пробирку и так далее.
3. Из последней пробирки после разведения отбирают микробиологической петлей каплю вводно-дрожжевой суспензии и переносят в центр чашки Петри. Нанесенную каплю осторожно распределяют микробиологической петлей по всей поверхности среды в чашке, после чего этим же шпателем с остатками материала протирают поверхность среды последовательно во второй, затем в третьей, реже в четвертой чашке Петри. При этом крышка каждой чашки должна быть открытой лишь настолько, чтобы в щель мог пройти только шпатель или петля. По окончании распределения накопительной культуры шпатель помещают в дезинфицирующий раствор.
Чашки Петри готовят описанным ниже способом. Плотную питательную среду (сусло-агар) расплавляют на кипящей водяной бане, охлаждают до 48-500С и разливают в чашки Петри. Для этого сосуд со средой берут в правую руку, держат в наклонном положении, вынимают ватную пробку. Обжигают горловину сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и указательным пальцем левой руки крышку чашки, быстро выливают расплавленную среду (15-20мл), чтобы дно чашки было покрыто полностью. Крышку закрывают, чашки оставляют на горизонтальном столе до полного застывания среды
|
|
|
После посева чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат при температуре 28-30 градусов на 1-2 суток.
4. Пересев культуры из чашек Петри в пробирки со скошенным сусло-агаром
После прорастания отдельных колоний клетку так же микробиологической петлей в стерильных условиях пересевают в пробирки со скошенным сусло-агаром.
Полученные пробирки каждый студент подписывает своей фамилией и помещают в термостат на 1-2 суток для проращивания. Полученную чистую культуру хранят в холодильнике не более 3 месяцев.
21. Разведение чистой культуры дрожжей в лаборатории. Основные стадии.
Дрожжи обычно выращивают в 4 стадии. Первые три выращивают на солодовом сусле или витаминизированной среде. Четвертая стадия на комбинированном сусле. Стерилизацию проводят в автоклаве под давлением 0,5 атм в течение 20 секунд.
Первая стадия.
В четыре пробирки наливают стерильную среду и производят засев из музейной культуры с соблюдением стерильности. Выращивают дрожжи в термостате при 26-30 С в течение 18-24 часов.
Вторая стадия
В 4 колбы на 100 мл наливают по 50 мл сусла в каждую засевают 5 мл дрожжевой суспензии из первой стадии. Выращивают дрожжи в термостате при 26-30 С в течение 18-24 часов. Дрожжи являются засевными для третьей стадии.
Третья стадия.
В 4 пастеровские колбы на 750 мл наливают 450 мл сусла и с соблюдением стерильности вносят дрожжи с предыдущей стадии. Выращивают дрожжи в термостате при 26-30 С в течение 18-24 часов
В пастеровской колбе горлышко переходит в дважды изогнутую, открытую на конце трубку, через которую поступает воздух. Для предупреждения инфицирования конец трубки закрывают ватой. Кроме того, проникнуть микроорганизмам в питательную среду мешают изгибы трубки. Стеклянная надставка (справа) служит для стока жидкости. В настоящее время пользуются пластиковыми колбами, устроенными по тому же принципу.
|
|
|
Склянки со стерилизованной средой проверяют на стерильность, для чего их в течение 24 часов выдерживают в термостате при 35 ºС. Если за это время сусло в склянках не помутнеет, то его можно употреблять для приготовления ЧК.
Четвертая стадия.
В 4 колбы карлсберга на 10 литров заливают стерильное комбинирвоанное сусло (солодовое сусло + меласса). Вносят дрожжи с третьей стадии. Выращивают дрожжи в термостате при 26-30 С в течение 18-24 часов. Полученные дрожжи являются засевными для цеха чистых культур.
Карлсбергская колба представляет собой медный, луженый внутри сосуд с двумя отводными трубками общей ёмкостью 3…8 л (рисунок 9). Верхняя трубка предназначена для наполнения колбы, нижняя – для выливания суспензии дрожжей. Изогнутая трубка справа служит для той же цели, что и в пастеровской
колбе.
После употребления колбу сначала тщательно ополаскивают холодной водой, затем наливают в неё 5 л водопроводной воды, ставят в автоклав и стерилизуют под давлением 1 атм в течение 1 часа. Перед употреблением воду выливают, заменяют её на 5 л заранее подготовленного в литровых бутылях сусла. Затем сусло в карлсбергской колбе кипятят 1 час, причём в
течение 30 секунд выпускают через одно отверстие, 30 секунд – через другое отверстие, затем последовательно закрывают ватными стерильными фильтрами. После кипячения колбу охлаждают до 30 ºС и сразу засевают.
|
|
|
