 |
Метод определения белка в моче с помощью тест-полосок ФАН
|
|
|
|
Принцип теста определения белка в моче
Тест основан на принципе "белковой ошибки индикатора". Реактивная зона содержит кислый буфер и специальный кислотно-основной индикатор тетрабромфеноловый синий. В кислой среде из тетрабромфенолового синего освобождаются ионы водорода (протоны). В отсутствии белков протоны остаются около чувствительной зоны, и цвет тест-зоны остается желтым. В растворе с белком протоны от индикатора переносятся на белок, в результате недостатка протонов индикатор меняет цвет с желтого через зеленый до синего. Среди различных белков мочи лучше всего связывают протоны альбумин и трансферрин.
Чувствительность и специфичность
Тест высокочувствителен к альбумину. Высокомолекулярные белки, такие, как IgG, обнаруживаются с меньшей чувствительностью, чем альбумин. Низкомолекулярные белки, такие, как β2-микроглобулин, белок Бенс-Джонса, практически не выявляются этим тестом.
Поэтому тест-полоски на белок способны распознавать в основном нарушения гломерулярной функции почек. Для оценки тубулярных дефектов и экскреции белка Бенс-Джонса тест-полоски на белок не используются. Обнаружение белка (альбумина) с помощью тест-полосок, как правило, указывает на патологию почек.
Влияющие факторы
Проба на белок в моче не зависит от значения рН в пределах физиологических величин.
В моче, рН которой составляет 8,0 и более, или в пробах со значительной буферной емкостью могут быть получены ложноположительные результаты. В таких случаях рекомендуется вносить в пробирку с мочой несколько капель 30% раствора уксусной кислоты до рН 5-6 и повторить исследование.
Ложноположительные результаты могут быть получены при исследовании мочи больных, длительное время принимающих лекарственные препараты, содержащие хинин и хинолин, а также при использовании для сбора мочи приспособленной посуды, плохо отмытой от моющих и дезинфицирующих средств на основе четвертичного аммония. Следовательно, неионные или анионные детергенты могут снизить чувствительность теста либо привести к ложным результатам. Риск ошибки полностью снимается при использовании стандартных пластиковых мочевых контейнеров с завинчивающейся крышкой, произведенных в асептических условиях или стерильных.
|
|
|
Оценка теста
Положительным тест считается в том случае, если меняется цвет реактивной зоны. В зависимости от концентрации альбумина в моче реактивная зона может приобретать оттенок от зеленого до синего. Эти оттенки, позволяющие полуколичественно определить содержание белка, сравниваются с цветной шкалой на упаковке, отдельные зоны которой соответствуют концентрации альбумина: neg (отр.); 0,3; 1,0; 5,0 г/л (30; 100; 500 мг/дл). Если цвет реагентной зоны оказывается промежуточным между двумя квадратами шкалы, то результат определяется по наиболее близкой по окраске зоне шкалы.
Качественные пробы.
Принцип: качественные пробы на белок основаны на коагуляции его химическими реактивами (кислотами) или нагреванием. При наличии белка появляется помутнение или выпадает хлопьевидный осадок.
Проба с 20% р-ром сульфосалициловой кислоты.
Реактив: 20% раствор сульфосалициловой кислоты (хранить во флаконе из темного стекла в темном месте!).
Приготовление реактива: 20 г кислоты + 80 мл дистиллированной воды.
Ход определения:
К 2-3 мл прозрачной мочи добавляют 2-3 капли 20% р-ра сульфосалициловой к-ты - опыт.
В отдельную пробирку наливают 2-3 мл профильтрованной мочи - контроль.
Учет результатов:
Опытную пробирку сравнивают с контрольной на черном фоне.
|
|
|
Наличие помутнения – положительная реакция.
Необходимо подогреть пробирку – если истинный белок, муть усилится, если ложный (соли, слизь) – исчезнет.
Недостатки пробы:
· проба c сульфосалициловой кислотой дает положительный результат не только с сывороточным белком, но и с альбумозой и другими белками (при нагревании муть от альбумозы растворяется, а от белка усиливается);
· избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению белка – проба из положительной становится отрицательной
Кольцевая проба Геллера.
Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива: мерным цилиндром отмеривают 46,7 мл дист. воды + 53, 3 мл азотной кислоты с относительной плотностью 1,4.
Приготовление реактива Ларионовой: готовят насыщенный раствор хлорида натрия (20 – 30 г соли растворяют в 100 мл воды при подогревании, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают, фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты.
Вместо азотной кислоты можно добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты.
Ход определения:
В пробирку наливаем 1 мл азотной кислоты или реактива Ларионовой и аккуратно пипеткой по стенке наслаиваем 1 мл профильтрованной мочи, стараясь не взболтать жидкость в пробирке.
Учет результатов:
На черном фоне. Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.
Недостатки пробы:
· постановка пробы является достаточно трудоемкой и длительной процедурой, требующей концентрированной азотной кислоты;
· иногда при постановке пробы появляется пигментное (коричневатое) кольцо от окисления урохрома азотной кислотой, которое может мешать определению белка;
· в моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей (уратное кольцо, в отличие от белкового, растворяется при легком нагревании);
· проба выдает ложноположительные результаты при высокой концентрации мочевой кислоты, мочевины и т. д.
Более четкий результат пробы Геллера получается, если использовать реактив Ларионовой. Проба с реактивом Ларионовой имеет ряд преимуществ:
· на границе наслоения не бывает пигментных колец, которые часто образуются при наслаивании мочи на азотную кислоту и мешают распознаванию белкового кольца;
|
|
|
· кольца получаются более четкие, чем с азотной кислотой;
· экономится азотная кислота;
· реактив более удобен в работе: попадая на ткань, не прожигает ее.
Количественные пробы.
|
|
|
