Определение глюкозы в крови по методу Хагедорна и Иенсена

Метод основан на реакции окисления глюкозы гексациано-(III)-ферратом калия в слабощелочной среде:

К₃[Fe(CN)₆] + C₆H₁₂O₆ ® К₄[Fe(CN)₆] + C₆H₁₂O₇

(красная кровяная соль)

Глюкоза окисляется до глюконовой кислоты, гексациано-(III)- феррат калия восстанавливается до гексациано-(II) феррата калия. (Напишите уравнение реакции.)

Гексациано-(III)-феррат калия берут в избытке и неиспользованный остаток его определяют иодометрически в кислой среде:

2 К₃[Fe(CN)₆] + 2KI «2 К₄[Fe(CN)₆] + I₂

Вследствие обратимости этой реакции, гексациано-(II)-феррат калия переводят в нерастворимую соль К₂Zn₃[Fe(CN)₆]₂ действием ZnSO₄.

Свободный иод оттитровывают тиосульфатом натрия:

2 Na₂S₂O₃ + I₂ ® Na₂S₄O₆ + 2 NaI

(Напишите полуреакции, укажите окислителя и восстановителя).

Реактивы: ZnSO₄ – 0,45 %-й раствор, NaOH – 0,1 н раствор, K₃[Fe(CN)₆] – 0,005 н раствор, тройной раствор, CH₃COOH – 3 %‑й раствор, крахмал – 1 %-й раствор в насыщенном растворе NaCl, Na₂S₂O₃ – 0,005 н раствор.

Посуда: лабораторные пробирки (10 мл), «сахарные пробирки», конические колбы для титрования (100 мл).

Х о д р а б о т ы. В первую (опытную) пробирку набрать: 4 мл 0,45 %-го раствора ZnSO₄, 1 мл 0,1 н раствора NaOH, 0,1 мл крови. После выпускания крови пипетку дважды промыть раствором из пробирки. Во вторую (контрольную) набрать: 4 мл 0,45 %-го раствора ZnSO₄ и 1 мл 0,1 н раствора NaOH. Опытную и контрольную пробирки поставить в кипящую водяную баню на 15 мин.

Содержимое пробирок отфильтровать через смоченные заранее горячей дистиллированной водой фильтры в «сахарные пробирки». Пробирки трижды промыть 2 мл (точно!) горячей дистиллированной воды и также отфильтровать в «сахарные пробирки».

В обе «сахарные пробирки» отмерить по 2 мл 0,005 н раствора K₃[Fe(CN)₆]и поместить в кипящую водяную баню на 15 мин. (Время соблюдать точно!)

Пробирки вынуть и охладить. В обе пробирки прилить по 3 мл тройного раствора, 2 мл 3 %-го раствора СН₃СООН и 5–6 капель крахмала.

Титровать в конических колбах 0,005 н раствором тиосульфата до исчезновения синей окраски.

Содержание сахара определяется по табл. 14.

Пример: на титрование пробы пошло 1,34 мл тиосульфата. По таблице находим в вертикальном столбце – 1,3, в горизонтальном – 0,04. На месте пересечения стоит число 117, что соответствует содержанию сахара 117 мг %. Так же находим контроль, на титрование которого пошло 1,97 мл (5 мг % сахара). Вычитаем из опыта контроль и получаем истинную концентрацию сахара в крови – 112 мг %.

Таблица 14

Содержание сахара по результатам титрования тиосульфатом

 

Целые и	Объем раствора тиосульфата
десятые	сотые доли мл
	0,00	0,01	0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09
	Содержание сахара, мг%
0,0		0,382
0,1		0,352
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,1
1,2
1,3
1,4
1,5
1,6
1,7
1,8
1,9

 

Нормальное содержание сахара в крови здорового человека 60–100 мг %.

 

Лабораторная работа № 12

«КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛИКОЗИЛИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ ЧЕЛОВЕКА»

Количественное определение гликозилированного гемоглобина в крови человека проводится с целью ранней диагностики сахарного диабета, в том числе его скрытых форм.

Метод основан на аффинной хроматографии гликозилированной и негликозилированной фракций гемоглобина в гемолизате крови. Используемый в микроколонках сорбент с привитой 3‑аминофенилборной кислотой обеспечивает на первой стадии специфическое связывание гликозилированного гемоглобина и его отделение от негликозилированной фракции. На второй стадии происходит полная элюция гликозилированной фракции за счет вытеснения сорбента сорбитолом. Измерение оптических плотностей обеих фракций при длине волны 414 нм позволяет рассчитать относительное содержание гликозилированного гемоглобина в анализируемой пробе.

 

Исследуемый материал: капиллярная или венозная кровь человека.

Реактивы: набор «Диабет-тест» для определения гликозилированного гемоглобина. В состав набора входят:

· раствор № 1 (антикоагулянт для забора крови): динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,1 М; хлорид натрия, 0,9 %;

· раствор № 2 (гемолитик для гемолиза эритроцитов): Тритон Х-100, 0,1 %; азид натрия, 8 мМ;

· раствор № 3 (для приготовления рабочих буферных растворов I и II): ацетат аммония, 2,5 М; хлорид магния, 0,5 М; азид натрия, 80 мМ;

· раствор № 4 (для приготовления рабочих буферных растворов I и II): гидроксид натрия, 1 М;

· раствор № 5 (для приготовления регенерирующего раствора): уксусная кислота, 10 %;

· раствор № 6 (для приготовления консервирующего раствора): азид натрия, 80 мМ;

· сорбитол (тв.) (для приготовления рабочего буферного раствора II).

Материалы и оборудование: фотоколориметр (l = 414 нм), кювета (1 см), микроколонки, автоматические пипетки на 0,02-5,0 мл, мерные колбы на 500 и 1000 мл, мерный цилиндр на 200–1000 мл, пробирки.

Х о д р а б о т ы.

 

Приготовление рабочих буферных растворов

Перед проведением анализа готовятся рабочие буферные растворы I и II. Рабочий буферный раствор I применяется для уравновешивания микроколонок и элюции негликозилированного гемоглобина (рН=8,1±0,1). В мерную колбу на 500 мл количественно переносится содержимое флакона с раствором № 3, затем в колбу добавляется 300–400 мл дистиллированной воды и постепенно добавляется при постоянном перемешивании содержимое флакона с раствором № 4. Дистиллированной водой раствор доводится до метки и тщательно перемешивается.

Рабочий буферный раствор II используется для элюции гликозилированного гемоглобина. Для его приготовления в мерную колбу на 500 мл количественно переносится содержимое флакона с раствором № 3, добавляется 300–400 мл воды, затем постепенно при постоянном перемешивании добавляется содержимое флакона с раствором № 4. В эту же колбу вносится сорбитол, раствор тщательно перемешивается до полного растворения осадка, и объем раствора доводится до метки дистиллированной водой.

 

⇐ Предыдущая12345Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: