 |
Реакция нейтрализации токсина антитоксином и реакция нейтрализации вирусов. Механизм, компоненты, постановка и применение
|
|
|
|
Реакция нейтрализации. Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами. т.е. их нейтрализацией. При постановке реакции смесь антиген-антитело вводят животным или вносят в культуру клеток.
Реакция нейтрализации применяется для титрования антитоксических сывороток и для определения типа токсина (при ботулизме, газовой гангрене). Основана на способности антитоксической сыворотки нейтрализовать летальное действие токсина. Токсин смешивают с диагностической антитоксической сывороткой in vitro и затем вводят белым мышам in vivo. При соответствии типа токсина и антитоксической сыворотки мыши не погибают. Например, при определении типа экзотоксина у возбудителя ботулизма смешивают токсин с диагностическими сыворотками различных типов, затем смесь вводят белым мышам. По выжившей мышке устанавливают тип экзотоксина.
Реакция нейтрализации используется для выявления противовирусных антител или установления типа вируса. Иммунную противовирусную сыворотку смешивают с вирусом, и смесь вводят восприимчивым животным или заражают культуру клеток. При нейтрализации вируса антителами в первом случае животное выживает, а во втором случае – отсутствует ЦПД.
Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В. Механизм и пути передачи инфекций, патогенез, клиника. Лабораторная диагностика (1-ая, 2-ая и 3-ья неделя заболевания). Препараты для специфической профилактики и лечения.
Брюшной тиф, паратифы, сальмонеллезы - острые кишечные инфекции; брюшной тиф и паратифы - антропонозы, сальмонеллезы - зоонозы.
|
|
|
Характеристика возбудителей (Таксономия)
Возбудители относятся к роду Salmonella, семейству Enterobacteriaceae, отделу Gracilicutes.
Брюшной тиф и паратифы А и В вызываются соответственно S. typhi, S. paratyphi и S. schottmuelleri, а сальмонеллезы - S. typhimurium, S. enteritidis, S. heidelberg, S. newport, S. haifa, S. derby, S. suipestifer, S. anatum, S. lоndon и др. (чаще всего - первыми четырьмя видами).
Морфологические и тинкториальные свойства.
Сальмонеллы мелкие (1-3 х 0,6-0,8 мкм) палочки, перитрихи, спор, капсул не образуют; грамотрицательны.
Культуральные свойства.
Факультативные анаэробы; не требовательны к питательным средам. На МПА образуют средне-мелкие прозрачные слегка выпуклые S-формы колонии (S. schottmuelleri на периферии колонии формирует слизистый вал); на МПБ - равномерное помутнение.
На дифференциально-диагностических средах Эндо, Левина, Плоскирева растут в виде бесцветных колоний, т. к. не расщепляют лактозу, входящую в состав среды. На висмут-сульфитном агаре образуют черные колонии с черной окраской среды под ней (кроме S. paratyphi).
Факторы патогенности.
Возбудители брюшного тифа и паратифов образуют эндотоксин с энтеротропным, нейротропным, пирогенным действием, S.typhi кроме того - микрокапсулу, обуславливающую адгезивные свойства и устойчивость к фагоцитозу.
Остальные сальмонеллы вырабатывают токсины: эндотоксин, энтеротоксин, цитотоксин.
Патогенность для животных.
Брюшным тифом и паратифами болеют люди, S. schottmuelleri редко может вызывать заболевания телят и цыплят.
Возбудители сальмонеллезов вызывают заболевания у человека и животных; из экспериментальных животных наиболее чувствительны к ним белые мыши.
Эпидемиология.
Источник инфекции при брюшном тифе и паратифах - больные люди и бактерионосители, при паратифе В также крупный рогатый скот и домашняя птица.
Механизм передачи инфекции - фекально-оральный. Пути передачи - пищевой, водный, контактно-бытовой.
|
|
|
При брюшном тифе и паратифах преобладают контактный и водный путь передачи инфекции; при сальмонеллезах - пищевой (факторы передачи инфекции - недостаточно термически обработанные инфицированное мясо и яйца; кондитерские изделия с использованием сырых яиц, реже - рыба, овощи, фрукты инфицированные в процессе кулинарной обработки на загрязненных столах.
Внутрибольничная сальмонеллезная инфекция передается также воздушно-пылевым путем. Брюшным тифом и паратифами болеют люди 15-30лет, сальмонеллезами - чаще дети первых лет жизни,особенно до года.
Патогенез и клиника брюшного тифа и паратифов.
Возбудители брюшного тифа и паратифов попадают в организм через рот, в желудке многие из них погибают, остальные достигают нижнего отдела тонкого кишечника, где размножаются - фаза инвазии.
Лабораторная диагностика брюшного тифа и паратифов. проводится с учетом патогенеза заболевания. Основными методами лабораторной диагностики являются бактериологический и серологический. С первого для заболевания исследуют кровь на гемокультуру (бактериологический метод). Для этого 5-10 мл крови больного засевают в колбы с 50-100 мл питательной элективной среды с желчью – среды Раппопорта. Желчь нейтрализует бактерицидные свойства сыворотки крови. После инкубирования в термостате производят пересев на среды Эндо, Левина, Плоскирева (для получения изолированных колоний и чистых культур из них). Прозрачные бесцветные колонии отсевают на среду Ресселя (Олькеницкого), на которой учитывают ферментацию сальмонеллами глюкозы и отсутствие ферментации лактозы.
Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам (сахаролитическим - по результатам посева на среды Гисса и протеолитическим - тестами на индол, Н2S, NH3 в посевах на МПБ) и антигенной структуре. Для сероидентификации ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, Д, Е. Положительный результат свидетельствует о принадлежности выделенной культуры к роду Salmonella. Затем определяется О-серогруппа в реакциях агглютинации с отдельными О-сыворотками (входящими в поливалентную сыворотку). Для определения серовара (вида возбудителя) устанавливают Н-антигены с монорецепторными Н-сыворотками первой, а затем второй фазы. Для полноты идентификации выделенную культуру проверяют на лизабельность поливалентным брюшнотифозным фагом.
|
|
|
Для ранней ускоренной диагностики перспективным является иммунофлюоресцентный метод, позволяющий выявить специфический антиген в исследуемом материале (крови, костном мозге).
Со второй недели заболевания проводят бактериологические исследования с испражнениями (получение копрокультуры), мочой (получение уринокультуры), желчью.
Испражнения (мочу, желчь) непосредственно, а также после проведения их через среды обогащения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева) так, чтобы выросли изолированные колонии. Из бесцветных колоний получают чистые культуры, которые идентифицируют так же, как и гемокультуру.
Серодиагностика (выявление антител в сыворотке больного) осуществляется с конца первой - начала второй недели заболевания путем постановки реакции агглютинации Видаля с О-, Н-брюшнотифозными и А- и В-паратифозными диагностикумами.
Лечение брюшного тифа, паратифов.
Используют антибиотики - левомицетин, ампициллин, тетрациклин, при устойчивости к антибиотикам - бактрим, фуразолидон.
Для предупреждения рецидивов и бактерионосительства рекомендуется сочетать антибиотики со средствами, стимулирующими защитные силы организма - иммуноантибиотикотерапию.
Для создания специфического иммунитета используется Vi-антиген, который вводят двукратно с интервалом в семь день, назначая в возможно более ранние сроки заболевания на фоне антибактериальной терапии.
С лечебно- профилактической целью применяют брюшнотифозный бактериофаг.
Профилактика.
Для профилактики тифо-паратифозных заболеваний проводят санитарно-гигиенические мероприятия и вакцинацию. Однако вакцинацию рассматривают как вспомогательную меру в системе противоэпидемических мероприятий, так как вакцины малоэффективны, а заболеваемость тифо-паратифозными инфекциями носит спорадический характер.
|
|
|
Препараты для специфической профилактики:
1) Брюшнотифозная химическая моновакцина.
2) Брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном, состоит из взвеси брюшнотифозных бактерий, обезвреженных этанолом, обогащенная Vi-антигеном, извлеченным из клеток S. typhi химическим методом.
3) Химическая сорбированная тифо-паратифозная вакцина, состоит из полных антигенов, извлеченных из возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, адсорбированных на геле гидроксида алюминия.
4) Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг в вид таблеток с кислотоустойчивым покрытием - для экстренной профилактики.
Билет 3.
12.Рост и размножение бактерий. Фазы роста в жидкой питательной среде. Характер роста на жидких и плотных питательных средах. Методы изучения протеолитических свойств бактерий.
Размножение – увеличение числа особей. Способы размножения бактерий: а) деление клетки на 2 части (бинарное деление); б) почкование; в) распад нитевидных клеток; г) при помощи спор (актиномицеты).
Рост – увеличение массы в результате синтеза клеточного материала. Во время роста бактерии потребляют питательные вещества, и если объем питательной среды не изменяется, то наблюдается ее истощение и прекращение роста. Культивирование (выращивание) бактерий в такой среде называют периодическим, а культуру – периодической. Если при культивировании непрерывно подается свежая питательная среда, то такое культивирование называется непрерывным, а культура – непрерывной.
Рост периодической культуры на жидкой питательной среде разделяют на несколько фаз:.
I фаза – лаг-фаза – период между посевом и началом размножения;
II фаза – фаза логарифмического роста – период интенсивного деления бактерий и рост количества клеток;
III фаза – фаза стационарного роста – количество клеток не меняется и равно максимальной концентрации (М-концентрация);
IV фаза – фаза гибели - снижение количества живых клеток;
V фаза – фаза уменьшения скорости отмирания клеток – клетки переходят в состояние покоя.
На жидких питательных средах рост бактерий может быть: а) поверхностным – образование пленки; б) диффузным – равномерное помутнение среды; в) придонным – образование осадка.
На плотной питательной среде бактерии образуют колонии. Колониия– это макроскопическое скопление микробов одного вида, образовавшееся из одной клетки. Колонии бывают разными по размеру, форме, цвету, поверхности, форме края, консистенции, структуре.
Изучение протеолитических свойств.
Протеолитические свойства бактерий изучают:
а) по способности разжижать желатин: разные виды бактерий имеют разную форму разжижения желатина; S. aureus – в виде воронки; Bac. antracis – в виде опрокинутой елки; Vibrio cholerae – в виде гвоздя и т.д. Разжижают желатин бактерии, имеющие фермент - коллагеназа;
|
|
|
б) по конечным продуктам распада белков после посева на мясо-пептонный бульон (МПБ). Могут быть следующие конечные продукты: индол, Н2S, NH3.
Для обнаружения этих продуктов используют бумажки с индикаторами. Индикатор для индола - щавелевая кислота (бумажка окрашивается в розовый цвет). Для Н2S – ацетат свинца (черный цвет). Для NH3 – лакмусовая бумажка (синий цвет).
Дополнительно изучаются такие свойства, как восстановление нитратов в нитриты, бутандиоловое брожения на среде Кларка, расщепление крахмала и др.
|
|
|
