 |
Убитые (инактивированные) корпускулярные (цельноклеточные и цельновирионные) вакцины. Определение и способы инактивации. Приготовление. Преимущества и недостатки. Примеры.
|
|
|
|
КОРПУСКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ - препараты из инактивированных культур патогенных (высоко вирулентных) или вакцинных штаммов бактерий и вирусов.
Способы инактивирования:
1) физические: температура, УФ-лучи, ионизирующее излучение;
2) химические: - формалин, спирт, ацетон, β-пропиолактон.
Корпускулярные вакцины из целых бактерий называют цельноклеточными, а из целых (неразрушенных) вирусов - цельновирионными.
Получение корпускулярных вакцин:
- выращивают в асептических условиях чистую культуру микробов;
- проводят инактивацию в оптимальном режиме, например, гретые вакцины инактивируют путем прогревания взвеси микробов при 56°С;
- стандартизуют (по концентрации микробов),
- добавляют консервант (мертиолат, формальдегид, 2-феноксиэтанол и др.), который подавляет постороннюю микрофлору при хранении, фасуют.
Преимущества цельноклеточных и цельновирионных вакцин:
1) простота получения;
2) большая устойчивость при хранении и более длительный срок хранения.
Недостатки цельноклеточных и цельновирионных вакцин:
1) менее прочный и продолжительный иммунитет;
2) необходимость 2-х и 3-х-кратных прививок парентеральным путем (подкожно, внутримышечно), иногда перорально;
3) реактогенность - боль, чувство жжения на месте введения, повышение температуры, судорожный синдром и т.д.
Примеры вакцин:
против гриппа,
коклюша,
холеры,
гепатита А,
герпеса,
вирусного энцефалита и др.
Характеристика возбудителя столбняка. Распространение в окружающей среде. Патогенез, клиника и принципы лабораторной диагностики столбняка. Препараты для специфической профилактики и лечения.
Столбняк (tetanus - оцепенение, судороги) - острое инфекционное заболевание с поражением двигательных нейронов ЦИС и развитием тонических и клонических судорог поперечно-полосатых мышц.
|
|
|
Характеристика возбудителя. Возбудитель столбняка Clostridium tetani относится к отделу Fermicutes, сем. Васillaсеае.
Морфология: длинные тонкие палочки, перитрихи, образуют терминально расположенную спору, что придает возбудителю вид барабанной палочки. Тинкториальные свойства: грам”+”.
Культуральные свойства: строгий анаэроб. Хорошо растет на простых питательных средах. На плотных средах образует прозрачные или сероватые колонии. На кровяном агаре колонии окружены зоной гемолиза.
Биохимические свойства: обладает слабыми протеолитическими и сахаролитическими свойствами.
Антигенная структура: имеет групповой О-антиген и специфический Н-антиген.
Факторы патогенности: образует сильный экзотоксин, состоящий из 2-х компонентов:
тетаноспазмина — поражает клетки нервной системы и тетаногемолизина - вызывает разрушение эритроцитов. К столбнячному токсину чувствительны человек, морские свинки, кролики и др.
Резистентность: столбнячная палочка устойчива к дез. растворам, споры погибают при температуре 100°С через 30 - 50 мин. вегетативные формы - при температуре 60-70°С через 30 мин. Экзотоксин разрушается также при температуре 65°С и под действием ферментов кишечника.
Эпидемиология столбняка. С. t. является нормальным обитателем кишечника человека и животных, он попадает в почву, где в виде спор может сохраняться десятки лет.
Заболевание связано с травматизмом. Заражение происходит при проникновении возбудителя через поврежденную кожу, слизистые оболочки при ранениях, ожогах, обморожениях, через операционные раны, через пупочную рану, у рожениц - через слизистую матrи. Больной столбняком не заразен для окружающих. Столбняк распространен повсеместно, вызывая спорадическую заболеваемость с высокой летальностью.
|
|
|
Патогенез и клиника. Входные ворота: поврежденная кожа и слизистые оболочки (даже незначительные повреждения - уколы острыми предметами, занозы). Главный патогенетический фактор - столбнячный экзотоксин. Попав в рану, споры в анаэробных условиях прорастают в вегетативные клетки, которые начинают выделять экзотоксин. Он продвигается по двигательным волокнам периферических нервов, а также через кровь и достигает центральной нервной системы. Поражает нервные окончания синапсов, в результате чего нарушается проведение импульсов по нервным волокнам. При столбняке поражаются практически все системы организма.
Инкубационный период: от 6 до 14 дней. У больных наблюдается спазм мимических (сардоническая улыбка) и жевательных мышц, затруднено глотание, зубы сжаты, невозможно разжать, напряжены мышцы затылка, спины, тело принимает дугообразное состояние (опистотонус), т.е. у человека наблюдается картина нисходящего столбняка. Смерть наступает от удушья и паралича сердца. Заболевание протекает при повышенной температуре и ясном сознании.
Иммунитет после заболевания не вырабатывается. У новорожденных - непродолжительный пассивный иммунитет (антитела - от матери).
Лабораторная диагностика. Проводится лишь для подтверждения клинического диагноза. Исследуемый материал: материал из раны, воспалительных очагов, а также кровь, об- рынки одежды, инородные тела, перевязочный материал.
Методы диагностики:
1) бактериологический метод - материал сеют в среду Китта - Тароцци, через 4-6 суток исследуют надосадочную жидкость: а) микроскопически обнаруживают возбудителя (окраска по Граму и по Ожешко); б) ставят биопробу на белых мышах для обнаружения экзотоксина.
2) серологический метод - обнаружение столбнячного токсина при помощи реакции вейтрализации с противостолбнячной сывороткой на белых мышах;
3) биологический метод - белым мышам вводят фильтрат исследуемого материала, если есть экзотоксин - у животных через 2 -3 дня развивается восходящий столбняк: вначале паралич мышц хвоста и задних конечностей, затем - туловища, шеи и головы; животные погибают в характерной позе - поджав передние и вытянув задние ноги.
Лечение
Своевременное введение противостолбнячной антитоксической сыворотки и иммуноглобулина человека.
|
|
|
Профилактика.
Специфическая профилактика: делают плановые прививки в возрасте 5-б месяцев до 1-7 лет и военнослужащим. Для этого причиняют адсорбированный столбнячный анатоксин. Он входит в состав ассоциированных вакцин: АКДС, АДС и Таbte. Экстренную профилактику проводят в случае травм, ожогов, обморожений, укусов животных, внебольничных абортах. В случае экcтренной профилактики кроме анатоксина используют человеческий иммуноглобулин или противостолбнячную гетерогенную сыворотку. Неспецифическая (общая) профилактика: хирургическая обработка ран.
Билет 4.
Строение и функции необязательных структур бактерий. Микроскопические методы их обнаружения. Техника иммерсионной микроскопии. Суть, значение и применение методов Циля-Нильсена, Бурри-Гинса, Ожешко, Нейссера.
Капсула. Строение: наружный толстый слой слизи определенной формы и упорядоченного строения (микрокапсула – более тонкое слизистое образование, выявляемое при электронной микроскопии).Состоит из полисахаридов или белков (возбудители сибирской язвы и чумы).
Патогенные бактерии образуют капсулу внутри организма хозяина (например, пневмококки, бациллы сибирской язвы). В чистых культурах бактерий капсула образуется реже.
Функции: 1) защита от повреждений и высыхания (капсулы гидрофильны и хорошо связывают воду); 2) защита от фагоцитоза патогенных бактерий в макроорганизме (капсула - признак вирулентности этих бактерий).
Капсулы окрашиваются по методу Бурри-Гинса. Клетки окрашиваются в красный цвет, капсулы бесцветные, тушь создает темный фон (негативное контрастирование).
Жгутики. Строение: тонкие нити, отходящие от ЦПМ. Состоят из фибрилл, покрытых чехлом. Фибриллы состоят из сократительного белка флагеллина. Жгутики прикрепляются к ЦПМ и клеточной стенке специальными дисками (базальное тело). Импульсы в базальном теле вызывают сокращение белка флагеллина и жгутики совершают вращательные движения. Функция: движение клеток.
|
|
|
По количеству и расположению жгутиков выделяют следующие группы бактерий:
- монотрихи – один жгутик на одном из концов клетки (холерный вибрион);
- перитрихи – 20-30 жгутиков по всей клетке (кишечная палочка);
- лофотрихи – пучок (несколько) жгутиков на одном конце клетки (синегнойная палочка);
- амфитрихи – один или пучок жгутиков на противоположных концах клетки (спириллы).
Жгутики выявляют:
1) метод серебрения по Морозову; 2) в препаратах "раздавленная" или "висячая" капля (витальные - прижизненные препараты); вывод о том, что есть жгутики, делают по подвижности микробов; 3) при помощи электронной микроскопии.
Ворсинки (фимбрии и пили). Строение: поверхностные нити, более тонкие и короткие, чем жгутики. Состоят из белка пилина. Ворсинки выполняют различные функции.
Ворсинки общего типа покрывают всю поверхность клетки и прикрепляют бактерии к поверхности и к поражаемым клеткам (адгезия), участвуют в питании, водно-солевом обмене. Половые ворсинки или пили участвуют в конъюгации. Их образуют мужские клетки – доноры, которые содержат F-плазмиды.
Включения: гликоген, гранулеза, полиметафосфаты (волютин), жиры, кристаллы солей. Функция: запасные питательные вещества, нерастворимые конечные продукты.
Волютин окрашивается метиленовым синим в красно-фиолетовый цвет, а цитоплазма клетки – голубая. Зерна волютина окрашивают и по методу Нейссера. Они окрашиваются в темно-синий цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.
Гликоген раствором Люголя окрашивается в красно-бурый цвет, а гранулеза – в серо-синий цвет. Капли жира растворами судана III окрашиваются в красно-оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный цвет.
Споры. Образование и строение: образуются внутри клетки вокруг нуклеоида. Нуклеоид покрывается плотной многослойной оболочкой, а остальная часть клетки отмирает. В составе споры мало воды, много липидов. В оболочке содержится дипиколинат кальция, который придает термоустойчивость. Споры имеют различную форму (круглая, овальная) и расположение в клетке. Расположение бывает: 1) центральное (возбудитель сибирской язвы); 2) терминальное – на конце палочки (возбудитель столбняка); 3) субтерминальное – ближе к концу палочки (возбудитель ботулизма, газовой гангрены). Диаметр споры может быть меньше, чем клетка и форма клетки не изменяется (возбудитель сибирской язвы). Но диаметр споры может быть больше, чем клетка, и форма клетки изменяется: в виде теннисной ракетки у возбудителя ботулизма, в виде барабанной палочки у возбудителя столбняка.
Споры образуют не все бактерии, а бактерии с грамположительным типом строения клеточной стенки (фирмикутные бактерии). Патогенные бактерии образуют споры вне организма человека и животных.
|
|
|
Функция: перенесение неблагоприятных условий среды. Споры обладают высокой устойчивостью к действию неблагоприятных физических (высушивание, высокая температура, УФ-лучи, замораживание) и химических факторов (спирты, кислоты и др.). Они находятся в состоянии покоя и сохраняют жизнеспособность в течение длительного времени (споры возбудителя сибирской язвы хранятся в почве десятки лет). В благоприятных условиях спора прорастает и превращается в вегетативную форму.
Споры погибают в автоклаве при 120 С в течение 15-20 минут и при действии сухого жара (150-170 С) в течение 1-2 часов.
Обычными методами споры не окрашиваются. Споры окрашивают по методу Ожешко. Сущность метода. Используют сильные воздействия для разрыхления оболочки (протравливание HCl при подогревании), сильные красители (5 % карболовый фуксин Циля). Споры медленно воспринимают краску и с трудом отдают ее обесцвечивающим растворам (5 % H2SO4), т.е. не обесцвечиваются. Споры окрашиваются фуксином в красный цвет, а вегетативные формы окрашиваются метиленовым синим в синий цвет.
Для изучения окрашенных препаратов применяется иммерсионная микроскопия при помощи иммерсионного объектива, дающего большие увеличения (х90). При работе с иммерсионным объективом на препарат наносят каплю кедрового масла, т.к. его показатель преломления близок к показателю преломления стекла (n=1,51).
5. Особенности строения спирохет, актиномицетов, риккетсий, хламидий и микоплазм. Методы их обнаружения. Значение в медицине.
|
|
|
