Оздоровление посадочного материала от вирусов методами химио- и термотерапии.

Оздоровление посадочного материала от вирусов методами химио- и термотерапии.

Успех клонирования зависит от меристематического экспланта. Чем больше листовых зачатков и тканей, тем легче идет морфогенез и регенерация. И тем быстрее транспортируется вирус по проводящей системе. Эффективность применения апикальной меристемы в качестве метода оздоровления может быть низкой, т. к., до нее вирус может быстро добраться. Метод термотерапии может применяться в in vivo и in vitro. Растения помещают в термокамеры, где в первую неделю температура повышается до 25-37⁰С равномерно на 2⁰С. Все остальные режимы в оптимальном состоянии.

Другой способ химиотерапия, добавляют препарат вирозола, добавляют в питательную среду с концентрацией 35 мг\л. Препарат имеет широкий спектр противовирусного действия и очищает до 100% растений от вирусов.

Суспензионные культуры

Они выращиваются в виде отдельных клеток в жидкой среде, поэтому на них легко проверять воздействие любых химических веществ и изучать их физиологию и генетику. Клеточную суспензию получают путем мацерации, чтобы остались мембраны с содержимым. Для культивирования суспензий и аэрации жидкой питательной среды используют качалки или магнитные мешалки с 2 оборотами в секунду, чтобы клетки не слипались.

На рост клеток влияет наличие кислорода и углекислого газа. Клетки в in vitro слабо дышат, высокая степень аэрации негативна. Клетки необходимо отгейзить.

Методика культивирования одиночных растительных клеток

Отдельные клетки выделяют из каллуса или экспланта путем моцерации ферментами пектиназами, растворяющими клеточную стенку, однако, при отсутствии материальной ткани одиночная клетка может погибнуть даже в питательном растворе. Ткань вырабатывает особое вещество, стимулирующее деление клеток, поэтому используется метод ткани-няньки, где клетки лежат на фильтре, который расположен на каллусе, находящийся в питательной среде.

По мере старения каллуса (няньки) его меняют. Можно использовать старую культуральную среду, где накопился фактор стимуляции.