Подготовка посуды и материалов
3.1.1. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1-2%) в течение 15 мин и затем ополаскивают дистиллированной водой. Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160 ±5) °С в течение 2 ч или в автоклаве при (121±2) °С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием. Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации (для определения редуктазы, бродильной и сычужно-бродильной проб) посуду, пипетки и пробы непосредственно перед испытанием кипятят в дистиллированной воде или конденсате не менее 30 мин. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.
3.2. Приготовление питательных сред и реактивов
3.2.1. Приготовление раствора хлористого натрия Состав: хлористый натрий - 8,5 г; питьевая вода - 1000 см В 1000 см 3.2.2. Приготовление концентрированного раствора фосфатного буфера Состав: однозамещенный фосфорнокислый калий - 34 г; дистиллированная вода - 1000 см В 500 см
3.2.3. Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера 1,25 см
3.2.4. Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра Состав: лимоннокислый натрий - 20 г; дистиллированная вода - 1000 см В 1000 см
3.2.5. Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски В 100 см
3.2.6. Приготовление питательной среды для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов Состав: гидролизованное молоко - 25 г; агар - 15 г; питьевая вода - до 1000 см
40 г сухой питательной среды помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см (Измененная редакция, Изм. N 3).
3.2.7. Приготовление среды Кесслер (модифицированной) Состав:
16 г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см
Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет. Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингредиентов. Для этого к 1000 см цвет.
3.2.8.-3.2.12. (Исключены, Изм. N 3).
3.2.13. Приготовление раствора сычужного фермента 0,5 г сычужного порошка растворяют в 100 см
3.2.14. Приготовление реактивов из метиленового голубого
3.2.14.1. Приготовление спиртового раствора метиленового голубого для окраски препаратов
10 г метиленового голубого смешивают со 100 см Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37±1) °С не более 3 мес. (Измененная редакция, Изм. N 2).
3.2.14.2. (Исключен. Изм. N 2).
3.2.14.3. Приготовление краски для препаратов К 30 см (Измененная редакция, Изм. N 2).
3.2.14.3а. Для проведения редуктазной пробы с метиленовым голубым готовят водный раствор с массовой концентрацией метиленового голубого 0,005 г/см
Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см (Введен дополнительно, Изм. N 2). (Измененная редакция, Изм. N 3). 3.2.15. Приготовление раствора резазурина Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим образом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см Срок хранения основного раствора резазурина-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8-10 °С. Рабочий раствор резазурина-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например, к 10 см При использовании резазурина в таблетках (производства ГДР) для приготовления рабочего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при температуре 0-5 °С. Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.
3.2.16. Определение рН среды Определение рН питательной среды проводят с помощью рН-метра по прилагаемым к ним инструкциям. Ориентировочное определение рН питательных сред может проводиться с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.
3.3. Подготовка проб к анализу
3.3.1. Молоко, сливки, сметана Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.
3.3.2. Кисломолочные напитки и продукты, закваски Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 см
3.3.3. Мороженое Отобранные пробы фасованного мороженого развертывают и помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой. Перед исследованием посуду с пробой нагревают в водяной бане при температуре 40-45 °С до расплавления пробы.
3.3.4. Сыр, творог, творожные изделия
10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную или профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают.
3.3.5. Масло Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40-45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
3.4. Приготовление разведения продуктов для посева
3.4.1. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах хлористого натрия, лимоннокислого натрия (для сыров) или фосфатного буфера. Для приготовления разведений готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см
3.4.2. Из проб молока, сливок, сметаны, кисло-молочных напитков и продуктов, мороженого, масла отбирают стерильной пипеткой 10 см Масло и мороженое вносят в растворы хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретые до 40-45 °С.
3.4.3. К приготовленным навескам по 10 г творога, творожных изделий; сгущенных молочных консервов и сухих молочных продуктов добавляют 90 см К навеске сыра 10 г постепенно добавляют 90 см Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 и т.д. Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой. 4. МЕТОДЫ АНАЛИЗА 4.1. Метод определения редуктазы с метиленовым голубым
4.1.1. Сущность метода
Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
4.1.2. Проведение анализа В пробирки наливают по 1 см Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37±1) °С. При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37±1) °С. Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37±1) °С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
4.1.3. Обработка результатов В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл.1. Таблица 1
4.1.2, 4.1.3. (Измененная редакция, Изм. N 2).
4.2. Метод определения редуктазы с резазурином
4.2.1. Сущность метода Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
4.2.2. Проведение анализа Пробу с резазурином следует проводить не ранее чем через 2 ч после доения. В пробирки наливают по 1 см При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37±1) °С. Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, ее поддерживают в течение всего времени определения (37±1) °С. Пробирки с молоком и резазурином на протяжении анализа должны быть защищены от света прямых солнечных лучей (редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой). Время погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Показания снимают через 1 и 1,5 ч. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают. По истечении 1 ч пробирки вынимают из редуктазника. Пробирки с молоком, имеющие серо-сиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, оставляют в редуктазнике еще на 30 мин.
4.2.3. Обработка результатов В зависимости от продолжительности обесцвечивания или изменения цвета молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл.2 и приложении. Таблица 2
Молоко, имеющее через 1,5 ч окраску, соответствующую 1-му классу (согласно приложению), относят к высшему классу.
4.2.2, 4.2.3 (Измененная редакция, Изм. N 2).
4.3. Проба на брожение
4.3.1. Сущность метода Метод основан на способности некоторых микроорганизмов, присутствующих в молоке, свертывать его. В зависимости от времени свертывания и характера образовавшегося сгустка оценивают состав микрофлоры молока и пригодности его для производства сыра. Проба применяется при определении пригодности молока для производства сыра.
4.3.2. Проведение анализа В чисто вымытые широкие пробирки, хорошо просушенные и ополоснутые два-три раза тем же молоком, из которого отбирают пробу, наливают около 20 см
4.3.3. Обработка результатов Через 12 ч после помещения пробирок в термостат или водяную баню производят первичный осмотр проб. Если молоко не свернулось или лишь начинает свертываться, оно считается хорошим. Если свернулось и сгусток вспученный - плохое. Вторично пробы просматривают спустя еще 12 ч и на основании этого просмотра относят молоко к одному из четырех классов, указанных в табл.3. Таблица 3
4.4. Сычужно-бродильная проба
4.4.1 Сущность метода Метод основан на способности некоторых микроорганизмов и сычужного фермента свертывать молоко. По характеру образовавшегося сгустка оценивают качество молока на его пригодность для производства сыра. Для постановки сычужно-бродильной пробы используют сычужный порошок из сычугов телят и ягнят-молочников, соответствующий по показателям качества:
4.4.2. Проведение анализа В чисто вымытые широкие пробирки, хорошо просушенные и ополоснутые два-три раза тем молоком, из которого отбирают пробу, наливают около 30 см
4.4.3. Обработка результатов По истечении 12 ч пробы осматривают и относят молоко к одному из трех классов, указанных в табл.4. Таблица 4
Воспользуйтесь поиском по сайту: ![]() ©2015 - 2025 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|