Занятие 25. Анаэробные инфекции (злокачественный отек, столбняк, некробактериоз и др. ). Техника лаборатор­ного исследования

Задание. 1. Ознакомиться с техникой лабораторного исследования на анаэробные инфекции. Демонстрация питательных сред для выращивания анаэробов и мето­дов посева.

2. Ознакомиться с методами культивирования ана­эробов.

3. Приготовить и окрасить мазки из культур или провести микроскопию готовых мазков.

4. Приготовить суспензию из органов трупа и про­извести посев на жидкие питательные среды для выра­щивания анаэробов.

Основное оборудование и материалы. Готовые питательные среды: мартеновский бульон, среда Китт—Тароцци, мясо-пептонная желатина, кровяной агар. Бактериологические чашки с агаром, бактериологичес­кие петли, пастеровские пипетки, карандаши по стеклу, спиртовые или газовые горелки, эксикатор, насос Комовского, термостат, микро- анаэростат, сосуд с дезинфицирующей жидкостью, стерильные ступки с пестиками, стерильный физраствор, водяные бани, шпатель, наборы красок для окрашивания по Граму, иммерсионное масло, микроскопы. Культура возбудителя некробактериоза или злокачественного отека. Органы животного, павшего от незаразной болезни или боенский материал.

Место занятия. Лаборатория техникума.

Методика проведения занятия. Преподаватель знакомит учащихся г гехникой лабораторного исследования на анаэробные инфекции, , 1 шкже с наиболее часто употребляемыми питательными средами для иырлщивания анаэробов, демонстрирует способы пересевов анаэроб- Ш. 1Ч культур с одной среды на другую. Затем преподаватель пока- I in иле г, как создаются анаэробные условия для выращивания культур, демонстрирует аппаратуру (эксикатор, насосы и пр. ).

Учащиеся самостоятельно готовят мазки из культур возбудителей игкробактериоза или злокачественного отека и окрашивают их по I |► лму и на споры. При отсутствии указанных культур пользуются иноными мазками. Учащиеся зарисовывают наблюдаемую микрокар- I * у, готовят суспензию из органов животного (павшего от незаразной Пи кмни) и делают посевы на жидкие питательные среды для выра- щимлния анаэробов.

Лабораторное исследование на анаэробные инфекции. ! {\а лабораторного исследования необходимо посылать определенный патологический материал для той или иной болезни.

На злокачественный отек — экссудат из воспалительного отека в запаянных пипетках и мазки- отпечатки из пораженных мышц на предметных стеклах. ()т трупов — кусочки внутренних органов и поражен­ных мышц.

На столбняк — из мест глубоких ранений берут кусочки ткани и раневой секрет.

На некробактериоз — некротические участки из пораженных органов и тканей вместе с прилегающей здоровой тканью; мазки делают из пораженной ткани на границе со здоровой.

В лаборатории производят микроскопию мазков (при­готовление мазков см. занятие 3); посевы на питатель­ные среды (занятие 6); исследование на лабораторных животных (занятие 8).

Для выделения анаэробных микробов из исследуе­мого материала пользуются жидкими питательными сре­дами — мартеновский бульон, среда Китт—Тароцци, ко­торые содержат кусочки животной ткани (печень, почка, селезенка). Среды разливают в пробирки высоким стол­биком. На поверхность бульона наслаивают вазелиновое или парафиновое масло (1—2 мл). Перед посевом среду прогревают в кипящей водяной бане 20—30 мин, чтобы удалить воздух, попавший в бульон через слой вазели­нового масла во время хранения среды. Затем пробирки быстро остужают и производят посев. Посевной мате­риал вносят в среду пастеровской пипеткой, бактерио­логической пипеткой или бактериологической петлей.

Для выращивания анаэробов применяют также мясо- пептонную желатину (посев производят уколом, см. занятие 6), полужидкий агар с глюкозой, мозговые, кровяные, сывороточные среды.

Материалом для посева при исследовании на ана­эробную микрофлору служат суспензии из кусочков внутренних органов и пораженных мышц. Перед при­готовлением суспензии ступки вместе с пестиками, завер­нутые в бумагу, стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве. Материал из органов или мышц берут cff рильным инструментом. Место, откуда берут материал, предварительно обжигают огнем или прижигают нагре­тым шпателем. Стерильным скальпелем или ножницами вырезают кусочек органа, помещают в ступку и тщателв^ю растирают пестиком.

Суспензию готовят на стерильном физрастворе одна часть материала и девять частей стерильного физ­раствора (по объему).

Из приготовленной суспензии производят посевы на питательные среды и заражение лабораторных живот­ных (при необходимости). Одновременно для контроля на наличие аэробной микрофлоры делают высев из этого же материала на простые питательные среды — МПА и МПБ.

Посевы на специальных жидких средах (мартенов­ский бульон, среда Китт — Тароцци) выращивают в термостате. Посевы на МПЖ выдерживают 5—б сут в условиях комнатной температуры. Посевы на твердых средах выращивают в анаэробных условиях, которые создаются различными способами. Наиболее простым из них является выкачивание воздуха из эксикатора, еР котором помещены среды с посевами анаэробов. Для этой же цели употребляют металлические микроанаэро- статы.

Откачивают воздух с помощью насосов (масляные на*» сосы, насос Комовского и др. ). Можно получить ана­эробные условия сжиганием в эксикаторе тампона, смочен­ного спиртом. После откачивания воздуха эксикаторы помещают в термостат. Результаты роста учитывают через 1—2 сут. С этой целью изготовляют мазки из культур с помощью пастеровской пипетки или бактерио­логической петли. При отсутствии роста посевы выдер­живают в термостате еще 4—6 дней.

J л н я т и е 26. ПАСТЕРЕЛЛЕЗЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ_г СВИНЕЙ, КРОЛИКОВ И ПТИЦ. ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ. БИОПРЕПАРАТЫ

Задание. 1. Ознакомиться с правилами взятия и игресылки патологического материала на пастереллезы.

2. Изучить культуральные свойства пастерелл.

3. Изготовить мазки из органов павших от пасте­реллеза мыши или голубя и из культур пастерелл. Окрасить мазки метиленовой синькой; провести микро­скопию.

4. Демонстрация биопрепаратов, применяемых при пастереллезе.

Основное оборудование и материалы. Трупы мышей или голубей, павших от экспериментального пастереллеза. Культура пастерелл на питательных средах. Набор красок для окрашивания по Граму, метиле- новая леффлеровская синька, 1 %-ный раствор уксусной кислоты. Предметные стекла, бактериологические петли, спиртовые или газо- н|»iе горелки, карандаши по стеклу, микроскопы, пинцеты, скальпели, ножницы, ванночки, доски для вскрытия мышей, булавки, шпатели для прижигания. Спирт-эфир, метиловый спирт, иммерсионное масло, биопрепараты, применяемые при пастереллезах; наставления по при­менению этих биопрепаратов.

Место занятия. Лаборатория техникума.

Методика проведения занятия. Преподаватель знакомит учащихся с правилами взятия и пересылки патологического материала на пас- гереллез, указывает на культуральные особенности возбудителя пасте­реллеза. Подчеркивает, что типичную овоидную форму возбудитель пастереллеза имеет в мазках, изготовленных из органов павшего от пастереллеза животного.

Учащиеся самостоятельно вскрывают павших мышей или голубей (преподаватель должен за 2—3 дня до занятия заразить партию мышей или голубей вирулентной культурой возбудителя пастереллеза; трупы сохраняют в холодильнике), делают мазки из органов и крови сердца, а также из культур пастерелл (методику вскрытия см. занятие 8, методику изготовления мазков см. занятие 3). Изготовленные мазки окрашивают по Граму и метиленовой синькой, проводят микроскопию мазков и зарисовывают микрокартину.

В заключение преподаватель демонстрирует учащимся биопрепа­раты, применяемые при пастереллезах животных и кратко излагает методику их использования. При наличии в районе техникума хо­зяйств, неблагополучных по пастереллезу, следует провести занятия по применению биопрепаратов непосредственно в неблагополучных хозяйствах.

Взятие и пересылка патологического материала на пастереллез. Для бактериологического исследования в ла­бораторию посылают от больных животных — кровь, сте­рильно взятую из вены в пробирку; от трупа животно­го— кровь из- сердца (в запаянных пипетках), ку­
сочки паренхиматозных органов в 30%-ном глицерине и трубчатую кость. Трупы птиц и кроликов посылают целиком.

Свойства возбудителя пастереллеза. Пастереллы, об наруживаемые в мазках из органов павшего животного, имеют форму коротких палочек с закругленными кон­цами. В культурах микроб может иметь различную фор му, иногда в виде дипло- или стрептококков, дипло- или стрептобактерий. По Граму окрашивается отрицатель­но. При окраске леффлеровской метиленовой синькой последующей обработкой в течение нескольких секунд 1%-ным раствором уксусной кислоты хорошо заметно биполярное окрашивание пастерелл (по полюсам окраши­ваются интенсивно, в центре слабо или совсем не окра­шиваются). Биполярность обычно наблюдается в препа­ратах из крови и селезенки павших животных; в мазках из культур биполярность не отмечается (цветная вкладка). Рост на простых питательных средах:

МПА — в первые сутки роста наблюдаются мелкие круглые прозрачные колонии;

МПБ — легкое равномерное помутнение, при встря­хивании поднимается слизистый осадок в виде косички.

Биопрепараты, применяемые при пастереллезе. Вакцины. 1. Преципитированная формолвакцина про­тив геморрагической септицемии (пастереллеза) круп­ного рогатого скота, овец и свиней. Применяют для предохранительных и вынужденных прививок. Вакци­нируют животных, начиная с 2-месячного возраста, через 15 дней после последнего случая заболевания или падежа животных в хозяйстве. Прививке подлежат жи­вотные с нормальной температурой тела, не имеющие клинических признаков болезни. Вакцину вводят под­кожно двукратно с интервалом 12—15 дней в дозах (в мл):

 

1-й раз

2-й раз

Вид животных

 

5 5 3

8 5

Крупному рогатому скоту Взрослым овцам и свиньям Ягнятам и поросятам

 

Иммунитет сохраняется до 5—6 мес. 2. Концентрированная поливалентная формолквас- цовая вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят. Применяют для при-

нинсж поросят и супоросных свиноматок с профилакти- чп кой целью в хозяйствах, неблагополучных по саль- моисллезу, пастереллезу и диплококковой септицемии. Поросят вакцинируют в возрасте 20—30 дней, свино- м. 1 гок за 15—40 дней до опороса. Вакцину вводят внутри­мышечно. Поросят вакцинируют двукратно с интервалом между прививками в 5—7 дней, в дозе 3—4 мл для пер- пой и 4—5 мл для второй прививки. За 7—10 дней до < »г ьсма поросят ревакцинируют однократно в дозе 4—5 мл. < упоросных свиноматок вакцинируют трехкратно за ЁГ, 40, 25—30 и 15—20 дней до опороса, вводят соответ- « I пенно 5—10 мл вакцины.

3. Эмульгированная вакцина против пастереллеза пищ. Применяют в благополучных, угрожаемых и небла- |» юлучных по пастереллезу хозяйствах. Прививают кур с 3-месячного, уток — с 1, 5-месячного возраста однок­ратно, в дозе 1, 5 мл независимо от вида и возраста птицы. Вакцину вводят подкожно в области верхней трети шеи. Иммунитет у привитой птицы сохраняется до 6 мес, после чего рекомендуют ревакцинировать птицу.

Кроме указанной вакцины для иммунизации птиц про- гмв пастереллеза могут быть использованы первая и чторая вакцины против пастереллеза кур и уток (из­готовленные по методике Краснодарской НИВС), су­хая авирулентная вторая вакцина из пастеровского штамма против пастереллеза птиц, эмульсинвакцины против пастереллеза кур, индеек, уток и гусей. Привив­ки этими вакцинами проводят в соответствии с настав­лениями, утвержденными Главным управлением вете­ринарии Госагропрома СССР.

Сыворотка против пастереллеза крупного рога- юго скота, буйволов, овец и свиней. С профилактичес­кой целью применяют подкожно в дозах (мл): поросятам, буйволятам, телятам, ягнятам — 10—20; свиньям, овцам, буйволам и крупному рогатому скоту —30—40. С лечеб­ной целью сыворотку применяют в двойной дозе внутри­мышечно или внутривенно.

⇐ Предыдущая13141516171819202122Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: