Занятие 27. Туберкулез. . Бактериологическая диагностика болезни

Занятие 27. ТУБЕРКУЛЕЗ.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ

Задание. 1. Освоить методику изготовления мазков из патологического материала для исследования на туберкулез мокроты, молока, мочи и кала.

2. Окрасить приготовленные мазки по Циль — Ниль­сену и провести их микроскопию.

3. Микроскопия готовых окрашенных мазков с воз­будителем туберкулеза.

Основное оборудование и материалы. Молоко, моча, кал, мок рота для исследования. Предметные стекла, набор красок для ок­рашивания по Циль—Нильсену, бактериологические петли, спирто­вые или газовые горелки, антиформин, дистиллированная вода, ван­ночка, мостик для окрашивания мазков, фильтровальная бумага, мерные цилиндры, колбочки, бактериологические чашки, 25% раствор хлористого натрия, марля, воронки, спирт, эфир, серная кис­лота, физраствор, стерильные ступки с пестиками, микроскопы, иммер­сионное масло, центрифуга с набором центрифужных стаканчиков или пробирок. Готовые мазки с возбудителем туберкулеза.

Место занятия. Лаборатория техникума.                                           _А

Методика проведения занятия. Преподаватель напоминает уча­щимся, какой патологический материал берут для исследования на туберкулез, показывает методику приготовления мазков из молока, мочи, кала и мокроты, напоминает учащимся методику окраски маз­ков по Циль — Нильсену, знакомит с морфологией возбудителя ту­беркулеза.

Учащихся разбивают на группы по три человека. Каждый уча­щийся изготовляет мазки из молока, мочи и кала, окрашивает их по Циль — Нильсену и микроскопирует.

В заключение преподаватель раздает готовые мазки с возбуди­телем туберкулеза; учащиеся микроскопируют их и зарисовывают микрокартину.

Изготовление мазков из патологического материала для исследования на туберкулез. Для исследования на туберкулез в лабораторию направляют следующий материал: при подозрении на туберкулез легких — мок­роту, взятую от животного в кювет (тарелку) во время искусственно вызванного кашля; при подозрении на ту­беркулез вымени — молоко из пораженных долей вымени. ⁹ Посылают также кал, мочу, истечение из половых орга­нов, сперму и т. п. От павших или убитых животных по­сылают кусочки пораженных органов и тканей со све­жими неинкапсулированными и необызвествленным^ очагами, лимфатические узлы/Трупы птиц посылают це­ликом.

Патологический материал доставляют в лабораторию в свежем виде или консервируют 30%-ным водным раство­ром глицерина. Молоко посылают в количестве 150—250 мл в стерильных флаконах. Перед взятием пробы вымя и руки тщательно промывают и дезинфицируют 70%-ньгм спиртом.

Истечение из половых органов берут стерильной И1ЖКОЙ в объеме 3—5 мл после тщательного обмыва- НИИ наружных половых органов. Кал берут непосред- » I пенно из прямой кишки в количестве 30—50 г. Мочу • опирают во время мочеиспускания в стерильную по-

I уду (200 мл).

Мазки из мокроты, гноя и слизи готовят путем нане- м'нии на предметное стекло желтоватых или буроватых ч. нчиц (комочков), которые выбирают из исследуемого v т риала. Эти частицы раздавливают между двумя пред- \ гными стеклами и размазывают материал. Можно при- < и гнуть к методу «обогащения». Для этого мокроту по­чинают в специальную баночку с битым стеклом и гомо- и'мизируют путем встряхивания, после чего добавляют |}- > иной объем 3—6%-ного раствора серной кислоты

II снова встряхивают. Затем материал центрифугируют 10 15 мин при 2000 об/мин. Из осадка делают мазки.

Молоко предварительно центрифугируют при 3000 об/ мин в течение 30 мин. Мазки готовят из верхнего слоя и из пелдка. После высушивания мазки из молока обра­батывают эфиром 30 мин для удаления жира. Для того чтобы легче было обнаружить туберкулезные микробы, молоко центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, средний слой удаляют, а верхний и нижний смешивают. К 5 мл мой смеси добавляют 5 мл спирта-ректификата, 5 мл > фира и 10 мл 25 %-ного раствора антиформина, взбалтывают и ставят в термостат до тех пор, пока эта смесь не приобретает гомогенный (однообразный) вид. 11осле этого доливают к смеси 25 мл физраствора и центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Осадок про­мывают физраствором и изготовляют мазки.

Мочу многократно центрифугируют, при этом верхний слой осторожно сливают, а к осадку прибавляют новую порцию мочи. Затем к осадку добавляют 3—5 мл 3— О %-ного раствора серной кислоты, встряхивают 5—10 мин ^-центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Мазки делают из осадка.

Кал перед исследованием тщательно растирают в стерильной ступке и добавляют 25 %-ный раствор хло­ристого натрия до получения жидкой консистенции. Полученную массу фильтруют через марлю. К 5 мл филь­трата добавляют 2 мл эфира (можно бензина, лигроина) и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Из осадка изготовляют мазки (с нижней части верхнего слоя). Приготовленные мазки высушивают, фиксируют и окрашивают по способу Циль—Нильсена (см. заня­тие 3). В окрашенных по этому способу мазках возбу­дитель туберкулеза имеет вид небольших тонких прямых или слегка изогнутых палочек, окрашенных в красный цвет. Некислотоустойчивые микробы при этом окраши­ваются в синий цвет (цветная вкладка).