 |
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
|
|
|
|
Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.
Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С.
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.
Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.
Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.
Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика представителей нормальной микрофлоры кишечника человека:
1. Бифидобактерии ( род Bifidobacterium).
Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.
|
|
|
Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.
Культуральные свойства бифидобактерий. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков.
Морфологические свойства бифидобактерий. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.
2. Кишечные палочки (Escherichia coli).
Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.
ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительные бактерии) колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.
3. Энтерококки (род Enterococcus).
Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.
Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).
На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт колонии мелкие или средних размеров яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии.
|
|
|
Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.
К работе № 4
4. Микрофлора урогенитальной системы. Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Myсobaсterium smegmatis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, монококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору немногочисленную - непатогенные кокки, сапрофиты, дрожжи. Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и рН влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Lас. vaginalis (палочки Додерлейна), влагалищные палочки. Влагалищные палочки имеют двоякую форму - одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие - тонкие, изящные, с заострёнными концами, располагаются поодиночке или попарно. Микроорганизмы неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью.
В некоторых случаях, в микрофлоре влагалища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации.
Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидий в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники - в этом случае имеет место персистенция - до начала появления клинической болезни.
|
|
|
Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов - так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски.
Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования - микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей.
Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом.
Различают 4 степени чистоты влагалищного секрета при окраске по Граму:
• при первой степени - обнаруживаются влагалищные палочки в чистой культуре и скудное количество клеток плоского эпителия;
• при второй степени чистоты - кроме влагалищной палочки в мазке определяется небольшое количество посторонних бактерий (кокков и других непатогенных микроорганизмов) и клеток плоского эпителия;
• третья степень чистоты характеризуется очень незначительным содержанием влагалищных палочек, значительным количеством кокковых форм, бактерий и обилием лейкоцитов;
• при четвёртой степени частоты - влагалищные палочки совершенно отсутствуют, большое количество разнообразных кокков, палочковидные бактерии, грибы, микоплазмы, клебсиеллы, и др. Лейкоциты находятся в большом количестве.
Микрофлору третьей и четвёртой степени чистоты следует рассматривать как дисбактериоз влагалища, но у женщин в климактерическом периоде или в пожилом возрасте она является распространённым явлением и не всегда рассматривается как патология.
Во влагалищном содержимом при патологии могут быть обнаружены патогенные или условно-патогенные микроорганизмы - гонококки, стафилококки, хламидии, а также простейшие.
Наиболее распространённым возбудителем из простейших является вагинальная трихомонада - Tr. vaginalis - жгутиковое простейшее длинной 5-30 мкм, имеет 3-5 жгутиков, вызывающая трихомонадный кольпит.
Для обнаружения этого возбудителя вагинальный секрет берут ватным тампоном или вагинальной ложечкой, помещают на подогретое предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Вагинальная трихомонада обнаруживается и в окрашенных мазках - по Граму, по Романовскому-Гимза.
|
|
|
