 |
Учебные вопросы. Самостоятельная Работа. Работа 2. Определение групп крови системы АВ0. Использование стандартных сывороток.
|
|
|
|
УЧЕБНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Группы крови (система АВ0, резус-принадлежность, другие системы). Правила переливания крови. Кровезаменяющие растворы.
2. Наследование групп крови.
3. Тромбоциты, их строение, количество, функции.
4. Процесс свертывания крови (А. А. Шмидт) и его значение.
5. Современные представления об основных факторах, участвующих в свертывании крови (тканевые, плазменные, тромбоцитарные, эритроцитарные, лейкоцитарные).
6. Фазы свертывания крови.
7. Фибринолиз, этапы фибринолиза.
8. Свертывающая, противосвертывающая и фибринолитическая системы крови как главные аппараты функциональной системы поддержания ее жидкого состояния.
9. Факторы, ускоряющие и замедляющие свертывание крови. Регуляция гемостаза.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
Темы практических работ:
1. Определение времени свертывания крови.
2. Определение групп крови системы АВ0.
3. Определение резус-принадлежности.
4. Определение индивидуальной совместимости крови по системе АВ0.
Работа 1. Определение времени свертывания крови.
Метод свертывание крови in vitro является одним из широко применяемых в клинической практике. Однако позволяет выявить лишь грубый дефицит факторов свертывания (фибриногена, антигемофильных глобулинов, протромбина). Время свертывания крови зависит от используемого способа определения, поэтому в результате всегда необходимо указывать название метода.
По Сухареву. (В норме начало свертывания 0, 5-2 минуты, конец - 3-5 минут. )
Оснащение: сухой капилляр Панченкова, секундомер.
Ход работы: уколите палец. Первую каплю удалите. В капилляр Панченкова наберите 25 мм крови. Включите секундомер. Путем наклона капилляра на 45 о переведите взятую кровь на его середину. Затем каждые 30 секунд наклоняйте капилляр на 45 о сначала в одну сторону, затем возвращайте капилляр в горизонтальное положение и через 30 секунд вновь наклоняйте его, но уже в другую сторону. Отметьте момент замедления движения крови или появления на стенке капилляра микросгустков. Окончание процесса свертывания регистрируйте в момент полного прекращения движения крови.
|
|
|
По Альтгаузену. (В норме время свертывания 5-6 минут. )
Оснащение: часовое стекло, секундомер, скарификатор.
Ход работы: чистое и сухое часовое стекло согрейте на ладони до температуры тела. Нанесите на стекло 2-3 капли капиллярной крови. Включите секундомер. Через каждые 30 секунд проводите через кровь скарификатором до тех пор, пока не потянется первая нить фибрина. Зафиксируйте время.
Оформление результатов работы: полученные результаты определения времени свертывания крови по обеим методикам занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.
Работа 2. Определение групп крови системы АВ0.
Для определения групп крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.
Использование стандартных сывороток.
Оснащение: предметные стекла, вата, стандартные сыворотки крови групп 0(I), А(II) и В(III).
Ход работы: предметное стекло поместите на белую бумагу и нанесите (не смешивая) по капле стандартной сыворотки 0(I), А(II) и В(III) групп. Возьмите другое предметное стекло, и первым его углом перенесите небольшое количество крови, полученной из пальца, в каплю сыворотки I группы, затем вторым углом стекла перенесите такое же количество крови в сыворотку II группы, третьим углом – в сыворотку III группы крови. При этом, каждый раз перемешивайте тщательно кровь в капле сыворотки, пока смесь не примет равномерно розовый цвет. Акция агглютинации наступает через 1-5 минут.
|
|
|
При отсутствии агглютинации, капля остается равномерно окрашенной. При агглютинации капля состоит из комочков красного цвета, разделенных прозрачной смесью плазмы и стандартной сыворотки.
Для исключения «холодовой агглютинации» к капле сыворотки с кровью прилейте каплю физиологического раствора комнатной температуры.
Группу крови установите в зависимости от агглютинации (таб. 3):
1. При отсутствии агглютинации со всеми тремя сыворотками, кровь принадлежит к 0(I) группе.
2. При агглютинации с сыворатками I и III групп, кровь принадлежит ко А(II) группе.
3. При агглютинации с сыворатками I и II групп, кровь принадлежит к В(III) группе.
4. При агглютинации с сыворатками I, II и III групп, кровь принадлежит к АВ((IV) группе.
Таблица 3.
Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с использованием стандартных сывороток.
|
Результат реакции с сывороткой группы |
Исследуемая кровь принадлежит к группе | ||
| 0(α β ) | А(β ) | В(α ) | |
| _ | _ | _ | 0(I) |
| + | _ | + | А(II) |
| + | + | _ | В(III) |
| + | + | + | АВ(IV) |
Примечание: знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком
«-» - отсутствие агглютинации.
Использование цоликлонов.
Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека системы АВ0 вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М.
Цоликлоны готовят из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. В отличии от сывороток, в цоликлонах наблюдается высокий титр антител.
Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих АВ0-сывороток.
Оснащение: цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ; пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.
Ход работы: нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле (0, 01 – 0, 03 мл) исследуемой крови, смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции при периодическом покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, однако наблюдение следует вести 3 минуты.
|
|
|
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице 4.
|
|
|
