 |
Окраивание капсул. Окрашивание бруцелл. Окрашивание кислотоустойчивых микробов. Окрашивани анаэробов. 8. Морфология и структура основных групп микроорганизмов (бактерий, спирохет, мико- плазм, риккетсий, хламидий).
|
|
|
|
Окраивание капсул
2. Окраска по Романовскому-Гимзе
Фиксированный спиртом или жидкостью Никифорова препарат кладут мазком вниз в чашку Петри на подставки из спичечной или стеклянной соломки. Готовят рабочий раствор краски Романовского-Гимзы (15-20 капель на 10 мл. дистиллированной воды), перемешивают и подливают под препарат, следя за тем чтобы все мазки были полностью смочены краской. Через 15-20 мин. Препараты промывают водой и высушивают на воздухе. Под микроскопом тела бактерий темно-синие, капсулы розовые
3. Окраска по Ребигеру
Не фиксированные мазки окрашивают (и одновременно фиксируют) формалинизированным генцианвиолетом 15-20 сек., быстро промывают водой и подсушивают. Бактерии густо-фиолетовые, капсулы красновато-фиолетовые.
4. Окраска по Ольту
Для окрашивания готовят свежий 2 %-ный водный раствор сафранина. Краситель растворяют в горячей воде и фильтруют при подогревании. Мазки красят 1-3 мин., промывают и высушивают. Бациллы – коричневые, капсулы бледно-желтые.
5. Окраска по Михину
Дает хорошие результаты только при наличии старой синьки Леффлера, способной за счет образования азура давать разноцветное окрашивание тел и капсул микробов. Мазок красят синькой 3-5 мин., быстро споласкивают малым количеством воды и быстро подсушивают. Тела бактерий синие, капсулы розовые
Окрашивание бруцелл.
6. Окрашивание по Ольту
Мазок фиксируют над пламенем, окрашивают 2 %-ным свежеприготовленным водным раствором сафранина при подогревании 2 мин., промывают водой, докрашивают без подогрева 0, 75-1 %-ным растворм малахитовой зелени в течении1 мин., промывают и высушивают. Бруцеллы из молодых культур красные, другие микроорганизмы зеленые. В более старых культурах бруцеллы красятся в оба цвета и промежуточно.
|
|
|
7. Окраска по Шуляку-Шину
На фиксированный мазок наливают фуксин Циля в разведении 1: 5, выдерживают 2 мин. Без подогревания и промывают водой; докрашивают 2 %-ным водным раствором метиленовой сини 5 мин. и промывают водой. Бруцеллы ярко-красные, остальные бактерии сине-голубые.
Окрашивание кислотоустойчивых микробов
8. Окраска по Цилю-Нильсену
Мазок фиксируют над пламенем, накрывают полосой фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин Циля и нагревают с появлением паров 3-5 мин., периодически проводя стекло над пламенем, но не доводя до кипения; при этом надо доливать краску на мазок. Препарату дают остыть, удаляют бумажку, промывают водой; обесцвечивают 5 %-ным раствором серной кислоты 15-20 сек. затем этиловым спиртом 5-10 сек. промывают водой; докрашивают синькой Леффлера 3-5 мин. и смыв краску, подсушивают препарат. Микобактерии ярко-красные, все прочие бактерии синие.
Окрашивани анаэробов
9. Окраска по Шоу-Муромцеву
Мазки из органов и культур фиксируют смесью 1: 4 формалина и этилового спирта 5-10 мин., не давая им испариться (доливая свежий раствор). После высушивания на воздухе окрашивают фуксин-синькой через полоски фильтровальной бумаги 20-30 сек., промывают водой и подсушивают. Бактерии и клетки тканей голубовато-синие, капсулы красные, фон мазка розовый.
8. Морфология и структура основных групп микроорганизмов (бактерий, спирохет, мико- плазм, риккетсий, хламидий).
Морфология м-о
По внешнему виду Бухне разделил м-о на 3 группы:
1. Шаровидные кокки(неподвиж). Подгруппы: микрококки(сапр), диплококки(2кл, пат/сапр), тетракокки(4кл, сапр), стрепток. (цепь, пат/сапр), стафиококки(гроздь, пат/сапр), сарцины(пакеты, сапр).
2. Палочковид. мо(подвиж/неподвиж)Подгруппы:
Бактерии(нет спор)- рожа, бруцеллез, листериоз
|
|
|
Бациллы(бациллярные споры, т. е. не более поперечного сечения, клетка форму не меняет)
Кластригии(споры кластригиальные, > сечения)
Спора может располагаться центрально, субтерминально и терминально.
3. Извитые м-о(подвижны) Подгруппы:
Вибрионы (, V или S, пат/сапр)
Спириллы (до 6 крупных завитков)
Спирохеты (10 и более мелких завитков)
-кристоспиры
-трепонемы
-лептоспиры
9. Строение бактериальной клетки.
Структурные компоненты бактериальной клетки делят на основные и временные. Основные структуры – это клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана с ее производными, цитоплазма с рибосомами и различными включениями, нуклеоид. Временные компоненты: капсула, жгутики, ворсинки, эндоспоры. Эти компоненты образуются лишь на определенных этапах жизненного цикла бактерий, а у некоторых видов отсутствуют полностью.
Клеточная стенка. Важный структурный элемент бактериальной клетки, находится между цитоплазматической мембраной и капсулой, у бескапсульных бактерий – это внешняя оболочка клетки. Выполняет ряд функций:
· защищает бактерии от осмотического шока и других повреждающих факторов;
· определяет форму бактерий;
· участвует в метаболизме;
· несет на своей поверхности поверхностные антигены и специфические рецепторы для фагов.
Толщина клеточной стенки от 10 до 100 нм, она содержит от 5 до 50% сухого вещества клетки. Основным компонентом клеточной стенки является пептидогликан или муреин – опорный полимер сетчатой структуры, образующий ригидный наружный каркас клетки. Специфика химического состава и ультраструктура клеточной стенки обусловливает способность прокариот окрашиваться по методу Грама в красный или фиолетовый цвет. Эту особенность широко используют для дифференцирования бактерий.
Цитоплазматическая мембрана и ее производные.
Цитоплазматическая мембрана (плазмолемма) – это полупроницаемая липопротеидная структура бактериальной клетки, отделяющая цитоплазму от клеточной стенки. Цитоплазматическая мембрана представляет собой белково-липидный комплекс, состоящий на 50…75% из белков и 15…20% из липидов. Цитоплазматическая мембрана выполняет ряд функций:
|
|
|
· является осмотическим барьером клетки;
· контролирует поступление питательных веществ и выход наружу продуктов метаболизма;
В процессе роста клетки цитоплазматическая мембрана образует многочисленные инвагинаты, формирующие внутрицитоплазматические мембранные структуры. Локальные инвагинаты получили название мезосом. Они хорошо выражены у грамположительных бактерий, хуже – у грамотрицательных и плохо – у риккетсий и микоплазм. Мезосомы, как и цитоплазматическая мембрана, представляют собой центры дыхательной активности бактерий, поэтому их иногда называют аналогами митохондрий.
Цитоплазма.
Цитоплазма – это содержимое бактериальной клетки, ограниченное цитоплазматической мембраной. Состоит из цитозоля (гомогенная фракция, включающая растворимые компоненты РНК, ферменты, продукты метаболизма) и структурных компонентов (рибосомы, внутрицитоплазматические мембраны, включения, нуклеоид).
Рибосомы – органоиды, осуществляющие синтез белка. Состоят из белка и РНК. Одна бактериальная клетка содержит от 5000 до 50 000 рибосом, которые посредством иРНК объединены в полисомы – агрегаты, состоящие из 50…55 рибосом, обладающих высокой белоксинтезирующей активностью.
В цитоплазме бактерий присутствуют (непостоянно) различного типа включения: твердые, жидкие, газообразные, с белковой мембраной и без нее. Значительная их часть представляет собой запасные питательные вещества и продукты клеточного метаболизма. К запасным питательным веществам относятся: полисахариды, липиды, полифосфаты, отложения серы и др.
К включениям, окруженным мембраной, также относятся газовые вакуоли (аэросомы), которые снижают удельную массу клеток. Такие образования встречаются у водных прокариот.
Нуклеоид – ядро у прокариот. Состоит из одной замкнутой в кольцо двуспиральной нити ДНК, которую рассматривают как одиночную бактериальную хромосому. Нуклеоид не отделен от остальной части клетки мембраной, т. е. у него отсутствует ядерная оболочка. Нуклеоид не имеет митотического аппарата, и расхождение дочерних ядер обеспечивает рост цитоплазматической мембраны.
|
|
|
L - формы бактерий и процесс их образования
Это мутанты с измененным морфологическим признаком, частично или полностью утратившие способность синтезировать пептидогликан в клеточной стенке. Листер 1935 год. Образуются при воздействии L-трансфогенных агентов – антибиотиков, аминокислот, фермента лизоцима, УФ и рентген-луче. L-формы высокожизнеспособны, полиморфны(шары, нити). Различают стабильные и нестабильные формы. Стабильные лишены ригидной кл стенки и редко возвращаются к исходному состоянию, нестабильные(сферопласты) могут обладать элементами клеточной стенки и могут вернуться к исходному состоянию. L-трансформация – это процесс образования L-форм. Это способностью обладают почти все бактерии и многие патогенные м-о.
|
|
|
