Водный фуксин (фуксин Пфейффера)

Карболовый фуксин Циля 1 мл

Дистиллированная вода 10 мл

 

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего

Метиленовый синий 10 г

Спирт 96⁰ до 100 мл

 

Водно-спиртовый раствор метиленового синего

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 10 мл

Дистиллированная вода 100 мл

 

Метиленовый щелочной синий Лёффлера

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 30 мл

Едкий натр или едкое кали 1%-ный раствор I мл

Дистиллированная вода до 100 мл

 

 

ЗАНЯТИЕ 4

 

Дата_________________

 

Тема: МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛ0ГИЯ СПИРОХЕТ. АКТИНОМИЦЕТОВ, ГРИБОВ И ПРОСТЕЙШИХ.

 

План занятия

1.Спирохеты возвратного тифа. Микроскопия готовых препаратов.

2.Бледная спирохета. Микроскопия готовых препаратов, приготовленных из чистой культуры бледной спирохеты.

3.Лептоспиры. Демонстрация живой культуры в темном поле.

4.Актиномицеты: а) приготовление, окраска и микроскопия пре­парата-мазка из чистой культуры актиномицета; друза актиномицета демонстрация готового препарата.

5.Нитчатые грибы. Макроскопия культур и микроскопия препара­тов "раздавленная капля".

6.Дрожжевые грибы. Приготовление и микроскопия окрашенных препаратов-мазков.

7.Дрожжеподобные грибы рода кандида. Макро- и микроскопия культур грибов кандида.

8.Простейшие:

а)микроскопия трипаносом, окрашенных по Романовскому;

б)микроскопия препаратов лейшманий из тканей больного и из чистой культуры.

9.Малярийный плазмодий. Микроскопия препаратов из крови больных малярией: изучение различных форм развития плазмодия маля­рии.

10.Токсоплазмы. Микроскопия готовых препаратов, приготовленных из органов зараженной токсоплазмами белой мыши.

11.Амебы. Микроскопия готовых препаратов.

 

Методические указания

§ 3. Метод микроскопии в темном поле.

При микроскопии по методу темного поля препарат освещается сбоку косыми пучками лучей, не попадающими в объектив. В объектив микроскопа попадают лишь лучи, отклоненные частицами препарата в результате отражения, преломления или дифракции. В силу этого мик­робные клетки и другие частицы представляются ярко светящимися на черном фоне.

Для микроскопии в темном поле используется специальный кон­денсор и обычные объективы. Так как апертура иммерсионного объек­тива больше чем апертура конденсора темного поля, внутрь иммерсион­ного объектива вставляется специальная трубчатая диафрагма, снижающая его апертуру.

Свет от осветителя направляют на плоское зеркало микроскопа. Удаляют конденсор, вывинчивают объектив и вынимают окуляр. На ту­бус микроскопа кладут матовое стекло и, поворачивая зеркало, доби­ваются равномерной освещенности матового стекла. После этого, не меняя положения зеркала и осветителя, вставляют конденсор темного поля и окуляр.

Препарат для микроскопии готовят по типу "раздавленной капли" на возможно более тонком предметном стекле (не толще 1,1 мм). На поверхность конденсора наносят каплю иммерсионной жидкости (воды; глицерина, кедрового масла), препарат кладут на столик микроскопа и конденсор поднимают до соприкосновения с предметным стеклом.

Поворотом револьвера устанавливают слабый сухой объектив и фокусируют его на препарат. При этом в поле зрения видны либо круглое освещенное пятно, либо освещенное кольцо с темным центром. Вращением центрировочных винтов конденсора устанавливают этот освещенный участок точно в центре поля зрения. Осторожно опускают конденсор. Если при этом диаметр светлого кольца уменьшается, конденсор опускают до тех пор, пока темный участок в центре исчезнет и кольцо превратится в небольшой светлый диск. Если же при опуска­нии конденсора диаметр светлого кольца не уменьшается, а, наоборот, увеличится, необходимо поднять конденсор. Если, при максимальном подъеме конденсора кольцо все же не исчезает и его центральный участок остается темным, это указывает на слишком большую толщину предметного стекла. В этом случае необходимо приготовить новый препарат на более тонком стекле.

Поставив конденсор на необходимую высоту и еще раз уточнив его центрировку с помощью регулировочных винтов, включают поворотом револьвера сильный сухой или иммерсионный объектив и приступают к наблюдению.

§ 4. С помощью прокаленного и остуженного скальпеля отрезают небольшой кусочек культуры актиномицета на плотной питательной среде и помещают его в каплю воды на предметном стекле. Каплю накрывают вторым чистым предметным стеклом. Стекла плотно придавливают друг к другу, растягивают и таким образом получают два мазка, которые высушивают, фиксируют обычным способом и окрашивают водным фуксином.

При микроскопии обратить внимание на сплетение тонких нитей, истинное ветвление их и большое количество свободно лежащих эктоспор - конидий.

В гистологическом срезе из органа при актиномикозе центральная часть друзы актиномицета представляет сплетение тонких нитей, окрашенных в темно-фиолетовый цвет. Отходящие на периферию концевые нити образуют колбовидные вздутия, окрашенные в розовый цвет.

§ 5. В каплю вода на предметном стекле вносят небольшую частицу гриба и накрывают покровным стеклом. При микроскопии со слабой и сильной сухими системами обратить внимание на строение мицелия и органов плодоношения. Мицелий у мукора одноклеточный, несептированный, а у аспергилла и пеницилла - многоклеточный. Органы плодоношения: большой спорангиеносец с эндоспорами у мукора; конидиеносцы несептированные в виде лейки у аспергилла, септированные в виде кисти рук у пеницилла.

§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.

§ 7. Дрожжеподобные грибы рода кандида являются одноклеточными микроорганизмами. Диаметр клеток варьирует в пределах 2-15 микронов. Клетки дрожжёподобных грибов одеты отчетливо заметной оболочкой, имеют цитоплазму, компактное ядро, вакуоли и разнообразные включения. Почкование является единственной формой размножения этих грибов. Форма почек округлая или слегка грушевидная.

Наружных спор, типа конидий, и внутренних типа аскоспор, дрожжеподобные грибы не образуют, чем и отличаются от истинных дрожжей, аскомицетов и конидиальных организмов. Некоторые виды кандида образуют хламидоспоры, диаметр их достигает 10-20 микронов, форма округлая, оболочка толстая, двуконтурная. Хламидоспоры возникают на концах псевдомицелия из укрупненных клеток, называемых протохламидоспорами.

Настоящего мицелия дрожжеподобные грибы также не имеют. Образование нитей (филаментация) происходит за счет удлинения клеток и расположения их в длинные цепочки. Такие нити называются псевдомицелием и отличаются от истинного мицелия тем, что не имеют общей оболочки и перегородок, а состоят из длинных клеток, образующихся путем последовательного бокового или концевого почкования.

§ 9. В препаратах из крови больных трехдневной малярией найти различные стадии развития малярийного плазмодия: молодые шизонты кольцевидной формы с вакуолью в центре; зрелые шизонты неправильной амебовидной формы без вакуоли; делящиеся шизонты - в стадии меруляции; макфо- и микрогаметоциты правильной овальной формы. Обратить внимание на форму и размеры эритроцитов. Препараты зари­совать.

§ 10. Токсоплазмы имеют форму полумесяца или напоминают доль­ки апельсина. Один конец токсоплазмы заострен, а другой - закруглен. Размеры их следующие: длина 4-7 микронов, ширина - 2-4 микрона. При окраске по методу Романовского цитоплазма токсоплазм окрашивается в голубой цвет; ядро, имеющее вид скопления гранул и сети, - в рубиново-красный цвет. Ядро располагается, как правило, в центре паразита, занимая около 1/4 части его тела.

 

Контрольные вопросы

Какое место занимают спирохеты в системе микроорганизмов?

Дайте классификацию спирохет.

Какое строение имеют спирохеты?

Какие метода микроскопии применяются для изучения морфологии спирохет?

Какой принцип микроскопии в темном поле?

Какое место занимают актиномицеты в системе микроорганизмов?

Как устроена друза актиномицета?

Каковы особенности морфологии актиномицетов?

Что такое спорангий, гифы, мицелий, конидии?

чем отличаются мицелий и органы плодоношения мукоровых, аспергилловых и пеницилловых плесеней?

Чем отличаются споры грибов от спор бактерий?

Каковы строение и способы размножения дрожжей?

Каковы морфологические отличия дрожжеподобных грибов от дрожжей?

Что такое аски?

Почему дрожжеподобные грибы относятся к категории несовершенных грибов?

Какие грибы используются как продуценты антибиотиков?

Какова роль дрожжевых и дрожжеподобных грибов в медицине и промышленности?

Что такое хламидоспоры? Псевдомицелий?

У каких грибов имеет место их образование?

Дайте классификацию простейших.

Назовите патогенных представителей из каждого класса простей­ших..

Какое строение имеют трипаносомы?

Что такое блефаробласт, ундулирующая мембрана?

Какое строение имеют лейшманин?

Чем отличается лептомонадная форма лейшманий от лейшманиальной?

Какова классификация возбудителей малярии?

Какие отличительные признаки имеет комар - переносчик возбудители малярии?

Какие циклы развития имеет малярийный плазмодий?

Как и где протекает спорогония?

Как и где протекает шизогония?

Какова морфологии молодых и зрелых шизонтов, микро- и макро-гаметоцитов и стадии меруляции у возбудителя 3-х дневной малярии?

Каковы отличительные особенности возбудителей 4-дневной и тропической малярии?

Как изменяются эритроциты при различных формах малярии?

Какое строение имеет токсоплазма?

Рис.1 Боррелия возвратного тифа (мазок крови, окраска по Романовскому)

Рис.2 Бледная спирохета (мазок из чистой культуры, окраска по Романовскому)

Рис.3 Лептоспира (темное поле)

Рис.4 Актиномицет

Рис.5 Друза актиномицета

Рис.6 Нитчатый гриб мукор

Рис.7 Нитчатый гриб аспергилл

Рис.8 Нитчатый гриб пеницилл

Рис.9 Дрожжи

Рис.10 Дрожжеподобные грибы кандида

Рис.11 Трипаносома (мазок крови, окраска по Романовскому)

Рис.12 Лейшмании в чистой культуре (лептомонадная форма, окраска по Романовскому).

Рис.13 Лейшмании в организме больного (лейшманиальная форма, окраска по Романовскому)

Рис.14 Токсоплазма

Рис.15 Амеба

Рис.16 Малярийные плазмодии (окраска по Романовскому) Молодой шизонт (3-дневная; тропическая)

Рис.17 Малярийные плазмодии (окраска по Романовскому) Зрелый шизонт (3-дневная; 4-дневная)

Рис.18 Стадия меруляции (4-дневная; тропическая)

Рис.19 Гаметоцит (3-дневная; 4-дневная)

Рис. 20 Гаметоцит возбудителя тропической малярии

 

Приложение к занятию № 4

Для дифференциации малярийных плазмодиев необходимо учитывать следующие признаки:

1. Размеры, форма и количество молодых шизонтов;

2. Размеры и форма зрелого шизонта;

3. Количество мерозоитов на стадии меруляции;

4. Размеры поражённых эритроцитов;

5. Морфология половых клеток - гаметоцитов.

При всех формах малярии молодой шизонт имеет форму "голубого перстня с рубиновым камнем". При тропической малярии в одном эри­троците может быть иногда 2-3 молодых шизонта одновременно, при остальных формах - только один.

При 3-дневной и тропической малярии зрелый шизонт имеет амебовидную форму с зернистостью, при 4-дневной - лентовидную форму с узким ядром в виде рубиновой полосы сбоку.

На стадии меруляции при 3-дневной малярии в пораженном эритроците 16-20 мерозоитов, при 4-дневной - 6-8, при тропической – до 30.

Пораженный эритроцит увеличен в диаметре в 1,5-2 раза по сравнению с нормальным только при 3-дневной малярии.

Гаметоциты при 3-х и 4-дневной малярии крупные, занимают почти всю площадь эритроцита, у макрогамет ядро крупнее, у микрогамет -мельче. При тропической малярии гаметоциты имеют серповидную форму.

 

 

АНЯТИЕ 5

Дата______________

 

Тема: ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ.

МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЩИ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ФИЗИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ

 

План занятия

1. Питательные среды, применяемые для выращивания бактерий. Универсальные среды-(мясопептонный агар - МПА, мясопептонный бульон - МПБ)- растут многие вида бактерий. Специальные среды - (кровяные, сахарные, сывороточные) - для культивирования бактерий, плохо растущих на универсальных средах. Избирательные (элективные) среды -(желчь, желчный бульон, пептонная вода, свернутая сыворотка)-хорошо растут (избирательно) лишь определенные виды бактерий. Дифференциально-диагностические среда -(Эндо, Левина, Плоскирева и др) - различные виды бактерий растут в виде окрашенных или неокрашенных колоний (дифференциация по внешнему виду колоний). Среды "пестрого ряда".

2. Знакомство с термостатами, их устройством, терморегуляцией. Знакомство с бактериологической посудой.

3. Методы стерилизации. Знакомство с устройством и работой сухожарового аппарата и автоклава.

4.Знакомство с характером роста бактерий на плотных и жидких питательных средах (культуры бактерий на МПА в чашках Петри и в пробирках, а также на МПБ).

Пигменты бактерий, Демонстрация пигментных культур.

Изучение колоний бактерий на пластинках МПА.

7.Техника пересева бактериальных культур с пластинок МПА на косячок МПА, с косячков МПА на косячок и пластинки МПА с помощью бактериальной петли и шпателя.

8.Исследование смеси бактерий. Бактериоскопия смеси и посев ее на пластинки МПА для выделения изолированных колоний.

9.Знакомство с микрофлорой человеческого тела: посев отпе­чатков пальцев, посев слизи из зева.

10.Изучение биохимической (ферментативной) активности бак­терий. Знакомство со средами "пестрого ряда", принципами их конструирования и характером изменений в результате роста бактерий. Посев бактерий на среды "пестрого ряда" для изучения их сахаролитических и других биохимических свойств.

 

Методические указания.

§ I. Питательные среды должны обязательно отвечать следующим требованиям: а) они должны содержать все необходимые питательные вещества, витамины и соли; б) иметь оптимальную рН; в) иметь дос­таточную влажность (особенно плотные среды). Кроме того, они должны быть стерильными и прозрачными.

§§ 4-7. Обратить внимание на внешний вид культуры: муть, плен­ка, осадок (для жидких культур). Описать внешний вид колоний на пластинках МПА: размеры; края колонии (ровные, фестончатые, лопастные); поверхность колонии (влажная или сухая, гладкая или шероховатая, складчатая или ровная, плоская или выпуклая и т.д.); прозрачность колонии (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная); на­личие пигмента и цвет его; консистенция колонии (плотная, рыхлая, слизистая).

Из описанной колонии приготовить препарат-мазок, окрасить фуксином Пфейффера, зарисовать препарат и записать морфологию бактерий, а затем при помощи бактериальной петли сделать посев на косячок МПА. Для этого необходимо простерилизовать петлю, приподнять крышку чашки Петри и стерильной петлей прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берется пробирка с косячком МПА (между большим и указательным пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирка открывается над пламенем горелки, обжигается ее край, а затем петля вводится в пробирку до дна ее, где имеется небольшое количество конденсационной влаги. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности косячка агара и делают посев штрихообразными движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают на пламени спиртовки край пробирки и пробку и закрывают пробирку над пламенем спиртовки. На пробирке восковым карандашом -надписывают название культуры, дату посева, фамилию и группу студента и ставят посев до следующего занятия в термостат. Результаты работы оформляют в виде протокола по следующей форме.

 

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: