Определение действия фактора проникновения по распространению краски в коже кролика.

Рис.7 Опыт (тушь+фильтрат культуры стафилококка)

Контроль (тушь+физраствор)

Рис.8 Положительная дермонекротическа реакция при внутрикожном введении экзотоксина

Рис.9 Воспалительная реакция при внутрикожном введении эндотоксина.

Какие методы используются для обнаружения эндотоксинов?

Как определяется сила действия экзотоксина? Что такое минимальная смертельная доза, DL50?

Какие факторы патогенности (кроме токсинов) вы знаете?

Что такое патогенность и вирулентность микробов? Какие ферменты могут играть роль факторов патогенности? Какой фермент содержится в факторе распространения? Его действие на соединительную ткань?

С какой целью производится заражение лабораторных животных? Какие способы заражения животных Вы знаете?

Как маркируются подопытные животные и как они содержатся?

Какие меры предосторожности следует соблюдать при заражении животных?

Как производится подготовка животных к опыту?

Как осуществляется наблюдение за подопытными животными?

 

ЗАНЯТИЕ 8

Дата_____________

 

Тема: ИНФЕКЦИЯ. ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

План занятий

1. Регистрация результатов опыта по обнаружению гемотоксина.

2. Знакомство с методами обнаружения микробов в организме,
техникой взятия и пересылки материала от больного для бактериологического исследования.

3. Вскрытие мыши, зараженной на предыдущем занятии, и исследование ее органов.

4. Фагоцитоз:

а) постановка опыта фагоцитоза;

б) незавершенный фагоцитоз - микроскопия готовых мазков го­
нококков в гное от больных.

5. Лизоцим. Действие лизоцима на различные виды бактерий.

 

Методические указания.

§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном МПА. Зарисовать картину гемолиза.

§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пе­ресылки материала для исследования в бактериологические лаборато­рии.

§ 3. Вскрытие мыши. Инструменты стерилизуются кипячением. Труп мыши фиксируется на лотке с застывшим парафином брюшком кверху и дезинфицируется путем обжигания шерсти и кожи в области предполагаемых разрезов.

Делается продольный разрез кожи от лобка до нижней челюсти, а затем в стороны конечностей. После этого отсепаровывается кожа и изучается состояние подкожной клетчатки, лимфатических узлов, наличие кровоизлияний с помощью пинцета приподнимают слегка брюшную стенку и делают на ней надрез, после чего осторожно, чтобы не повредить кишечника, вскрывают брюшную полость. Изучают состояние внутренних органов брюшной полости, наличие в ней экссудата.

Печень, селезенку, почки стерильным пинцетом извлекают и помещают в стерильную чашку Петри для последующего микроскопического исследования. Далее вскрывается грудная полость, для чего пин цетом приподнимают грудину, рассекают диафрагму и с помощью ножниц отсекают грудину вместе с участком ребер таким образом, чтобы стали доступны легкие и сердце.

Раскаленным пинцетом прижигают стенку сердца (она при этом фиксируется с помощью другого пинцета) и кончиком пастеровской пипетки прокалывают стенку сердца. Отсасывают из сердца кровь и тут же делают посев в МПБ и на косячок МПА. Изучают состояние легких, обращают внимание на наличие экссудата в плевральной и околосердечной полостях. Для выделения чистой культуры возбудителя делается по­сев также из селезенки и печени (если нужно, то из других органов) на МПБ и МПА.

Мазки-отпечатки или препараты-оттиски готовят на одном стекле по определенной схеме:

из печени - № I;

из легких - № 2;

из селезенки - № 3;

из лимфатического узла - №.4;

на конце стекла делают один сплошной мазок из крови сердца.

Приготовить препараты-оттиски из органов мыши: печени, легких, селезенки, лимфатического узла, крови. Окрасить препарат-оттиск по способу Ионэ для обнаружения капсул. Отметить, соответствуют ли об­наруживаемые в препаратах микроорганизмы тем, которые использова­лись для заражения мыши. Составить протокол вскрытия мыши с указанием в нем обнаружен­ных изменений в органах трупа. Сделать необходимые зарисовки.

§ 4. а)Методика постановки опыта фагоцитоза: белой мыши внут-рибрюшинно вводят 1-2 мл стериального МПБ раздражение которым брюшины приводит к скоплению в брюшной полости большого количества лейкоцитов. Через 4-5 часов в брюшную полость мыши вводят шприцем или пастеровской пипеткой 0,5-1 мл густой взвеси суточной культуры стафилококка. Через 8-10 минут капилляром пастеровской пипетки прокалывают брюшную стенку и из брюшной полости набирают экссудат. Из экссудата готовят препараты-мазки, подсушивают, фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают метиленовым синим. При микроскопии в мазке видны бледно-голубые лейкоциты, в их цитоплазме - синие стафилокок­ки.

б) промикроскопировать готовые препараты-мазки гонококков из гнойных выделений больного. Зарисовать картину фагоцитоза микроорга­низмов.

§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.

Для опыта необходимо иметь:

1.Раствор яичного белка в разведении 1:25.

2.Культуру M. lysodeikticus на косячке МПА.

3.Физиологический раствор во флаконе.

4.Пипетки емкостью в I и 5 мл.

5.Две агглютинационные пробирки.

 

Порядок работы

1.Пометить карандашом по стеклу опытную и контрольную пробирки.

2.В контрольную пробирку налить I мл физиологического раствора.

3.В опытную пробирку налить I мл раствора яичного белка в ис­одном разведении.

4.Приготовить бактериальную взвесь, для чего в пробирку скультурой М. M. lysodeikticus внести 5 мл физиологического раствора и, вращая пробирку между ладонями, смыть культуру.

5.В опытную и контрольную пробирки добавить по I мл полученной бактериальной взвеси и поставить пробирки в термостат на 1 час при 37⁰.

6.Через час зарегистрировать результаты опыта, отмечая полное растворение микробов+ + + +, частичное + + и отсутствие лизиса знаком —.

 

⇐ Предыдущая234567891011Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: