Протокол исследования микрофлоры пальцев рук.

Среда	Число выросших колоний
МПА
Эндо (колонии кишечной палочки)

 

 

Протокол исследования выросшей микрофлоры слизистой оболочки носоглотки.

	Морфологические названия бактерий и их отношение к окраске по Граму
На МПА
На кровяном МПА

 

Протокол исследования колонии.

1.Размер колонии_______________________________________

2.Форма колонии_______________________________________

3. Поверхность колонии_________________________________

4. Края колонии________________________________________

5.Прозрачность колоний_________________________________

6.Пигмент_____________________________________________

7.Консистенция________________________________________

8.Форма бактерий______________________________________

9. Взаиморасположение бактерий_________________________

10.Латинское морфологическое название бактерий__________

 

§ 4. Результаты посева на среды пестрого ряда зарегистрировать в таблице.

§ 5. Приготовить взвесь почвы в Физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Тароцци.

Сделать посев почвенной взвеси на среду Вильсон-Блера в трубки Вейон-Виньяля. Для этого исходная взвесь почвы последовательно разводится в трех пробирках с 10 мл физиологического раствора*. Несколько капель из последней пробирки засеять в расплавленную и остуженную до 420-450 среду Вильсон-Блера. Среда с засеянным материалом переме­шивается и насасывается в трубки Вейон-Виньяля, которые после застывания среды помещают в термостат.

Рис.1 Микрофлора пальцев. Окраска по Граму

Рис.2 Микрофлора зева. Окраска по Граму

Рис.3 Латинское морфологическое название бактерий из изолированной колонию.

* Под физиологическим раствором здесь и далее следует понимать О,85%-ный раствор NaСl.

 

Рис. 4 Латинское морфологическое название выделенной культуры. Окраска по Граму.

Рис.5 Метод выращивания анаэробов по Фортнеру.

 

§ 6. Записать состав среды Плоскирева и Эндо и характер их изменений при росте различных бактерий. Произвести посев культур кишечной палочки, фекального щелочеобразователя и стафилококка на среды Плоскирева, Эндо и МПА. Для этого чашка с каждой средой де­лится на три сектора и на каждый сектор с помощью петли засевается одинаковое количество культуры одного из микробов (культура рассеивается по всей поверхности сектора в виде газона). При посеве на разные среды и разных микробов следует стремиться засеять одинаковое количество бактерий и одинаковым способом для того, чтобы на следующем занятии можно было сравнить интенсивность роста.

Ферментация углевода с образованием кислоты и газа обозначается буквами КГ; с образование только кислоты - буквой К. Свертывание молока и образование индола обозначается +; отсутствие ферментации углевода, свертывания молока или образования индола обоз­начается знаком —.

Заключение:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Рецепт среды Плоскирева___________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Рецепт среды Эндо________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Контрольные вопросы

Какие методы определения чистоты выросшей культуры Вы знаете?

Как можно по внешнему виду культуры определить ее чистоту?

В чем заключается микроскопический метод проверки чистоты вы­деленной культуры бактерий?

Для чего добавляется индикатор в углеводные среды "пестрого ряда"?

 

Результаты посева на среды “пестрого ряда”.

Виды бактерий	Глюкоза	Лактоза	Манит	Сахароза	Молоко	Индол	H2S	Подвижность
Кишечная палочка
Фекальный щелочеобразователь

 

Что такое анаэробиоз?

Кто открыл анаэробные бактерии?

Какие методы применяются для удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов?

В чем заключается метод выращивания анаэробов, предложенный Фортнером?

Какой состав имеет среда Вильсон-Блера?

Чём отличаются облигатные анаэробы от факультативных?

Что такое регенерация питательной среды и как она производится?

Какие изменения вызывают анаэробы на среде Тароцци?

Почему происходит почернение среды Вильсон-Блера при росте анаэробов?

Как выделяют чистые культуры анаэробных бактерий?

Какой состав имеет среда Плоскирева?

Почему среда Плоскирева обладает бактериостатическим действие?

Для чего в среды Плоскирева, Эндо, Левина добавляется молочный сахар (лактоза)?

Почему колонии кишечной палочки на средах Эндо, Левина и Плоскирева окрашены?

Какие бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева вырастают в виде бесцветных колоний?

 

Выделение чистых культур патогенных клостридий

Исследуемый материал

Посев на плотные среды: чашка с кровяным агаром чашка с бензидиновым агаром чашка со средой Виллиса-Хоббс пробирки со средой Вильсон-Блера Инкубация в анаэробных условиях при 370 в течение 1-7 суток.

Посев на жидкие среды для накопления (мясные, казеиновые). Инкубация при 370 в те­чение от 16 часов до 15 суток. Выросшие культуры, содержащие массу грамположительных палочек, пересевают на плотные среды, как указано.

Микроскопия и пересев на мясную или казеиновую среду колоний, вызывающих гемолиз, покраснение, опалесценцию или почернение на одной из указан­ных сред и состоящих из грамположительных палочек, для получения чистых культур и последующего изучения их свойств.

Среда Виллиса-Хоббс: смесь (400 мл бульона Хоттингера + 4,8 грамма агара; 4,8 грамма лактозы и 1,3 мл 1% раствора нейтрального красного) автоклавируют, охлаждают до 55-50 и добавляют 15 мл суспензии яичного желтка и 60 мл стерильного обезжиренного молока.

 

Приложение к занятию 6.

Причины высокой чувствительности строгих анаэробов к кислороду объясняют следующими обстоятельствами:

1.Отсутствием у них каталазы (в присутствии кислорода накап­
ливается" перекись водорода, которая и оказывает бактерицидное
действие на анаэробы).

2.В аэробных условиях тормозятся анаэробные энергетические
процессы.

3.Отсутствием у анаэробов систем регуляции окислительно-
восстановительного потенциала. В присутствии кислорода он повы­-
шается, анаэробы не могут понизить его до необходимого уровня и
поэтому их рост подавляется.

Возможно, у разных видов анаэробов чувствительность к кислороду обусловлена разными механизмами.

 

 

ЗАНЯ ТИ Е 7

Дата_______________

 

Тема: ИНФЕКЦИЯ. ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ

МИКРООРГАНИЗМОВ

 

План занятия

1. Исследование смеси бактерий. Проверка чистоты выросшей на
МПА культуры (макро- и микроскопия).

2. Методы культивирования анаэробов. Регистрация результатов
посева почвы. Макро- и микроскопия выросших культур.

3. Регистрация результатов опыта с посевами бактерий на среды
Плоскирева, Эндо и МПА.

4. Факторы патогенности. Экзотоксины.

а)Определение экзотоксина реакцией преципитации в геле. Демонстрация.

б)Мембраноповреждающие токсины (разрушают эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, мастоциты, клетки культур тканей, протопласты и др.). Определение повреждающего действия на эритроциты (гемотоксина).

в)Определение некротоксического действия мембраноповреждающего токсина с помощью внутрикожной пробы на лабораторных животных - дермонекротическая проба. Демонстрация.

5.Факторы патогенности. Эндотоксин. Определение эндотоксина пробой на кролике. Демонстрация.

6.Факторы патогенности. Ферменты.

а)Гиалуронидаза. Определение гиалуронидазы - фактора проник­новения в опыте на кролике. Демонстрация.

б)Фибринолизин. Определение фибринолизина на средах с плазмой крови. Разбор методики.

в)Плазмокоагулаза. Определение плазмокоагулазы, демонстрация опыта.

г)Лецитиназа. Определение лецитиназы на желточных средах. Де­монстрация.

7.Методы заражения экспериментальных животных. Заражение бе­лой мыши.

 

Методические указания.

§ I. Чистота выросшей культуры проверяется макро- и микроско­пически. Вначале следует определить по внешнему виду выросшей куль­туры, однородный ли характер имеет микробный рост на косячке и соответствует ли его внешний вид виду исходной колонии (прозрачно­сть, окраска, поверхность). Для определения однородности морфологии бактерии необходимо приготовить препарат-мазок и окрасить его по Граму. Результаты зарегистрировать, указав, соответствует ли макро- и микроскопически выделенная культура исходной колонии.

§ 2. Отметить изменения, наступившие на средах Тароцци и Виль-сон-Блера в результате роста анаэробов. Приготовить препараты-мазки из культур анаэробных бактерий, выросших на этих средах, окрасить по Граму, промикроскопировать и зарисовать.

§ 3. Отметить различия в характере роста кишечной палочки и фекального щелочеобразователя (размер, прозрачность и окраска колоний на средах Плоскирева и Эндо), а также интенсивность роста их и стафилококка на средах Плоскирева, Эндо и МПА. В случае роста бактерий в виде отдельных колоний подсчитать количество колоний каждо­го вида бактерий на всех средах. Результаты зарегистрировать в таблице.

 

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: