 |
Метод культивирования на искусств пит среде
|
|
|
|
Питательные среды(по составу) – минимальная (содержит минеральные соли и источник Е, напр глюкоза) и полная (кроме мин солей и источника Е содержит АК и витамины). Минимальная - для выращивания бактерий единого типа, полная – для выращивания ауксотрофных мутантов.
По консистенции пит среды – жидкие (бактерии во взвешенном состоянии в пробирках) и твердые (в чашках Петри, повсеместно – бактериальный газон, и в колониях).
2. Метод клонирования
Клон – потомство одной бактериальной кл-ки. При помощи бактериальн петли колонии(клоны) перемещают в чистые пробирки из жидкой среды.
Метод разведения
1мл культуры + 9мл среды => в 10 раз => 1мл + 9 мл => в 100 раз и т.д.
4. Метод селективных пит сред
Селективные пит среды – минимальн пит среда с добавлением в нее 1го определенного в-ва (АК, витамины). Используется для выявления ауксотрофных мутантов.
Селективн пит среды: (-)min + met; (-) min + lus (лизин); (+) min + trp (триптофан). Вывод: мутант не способен синтезировать триптофан.
Метод отпечатывания
К полной питательной среде прикасаются специальным цилиндром, покрытым бархатной материей, и затем касаются чистой среды. Сохраняется «рисунок» колоний.
29. СПОСОБЫ ПЕРЕНОСА ГЕН.ИНФОРМАЦИИ У БАКТЕРИЙ. ТРАНСФОРМАЦИЯ,МЕХАНИЗМ, ЗНАЧЕНИЕ.
3 осн. способа переноса ген-й инф-ии от одних кл-к к другим:
1. трансформация (при пом.изолир-й ДНК).
2. Коньюгация (путем непосредственного контакта между бакт-ми кл-ми). 3. Трансдукция (при пом бактериофагов.
Общая схема переноса ген.инф-ии.
1 – проникновение ДНК донора в кл-у реципиента
2 – встраивание ДНК донора в бактер хромосому реципиента путем незаконной рекомбинации.
1. ТРАНСФОРМАЦИЯ
схема опыта Гриффитса. s(гладкий)-вирулентные, R(шероховатый) невирулентные(мутанты)
в орг-м мыши вводят пневмок инфекцию(S), она погибает. после термообработки S становятся также невирулентными, мыши от St не погибают. Но если мышей инфицировать смесью R и S, то животные погибают от пневмок.инфекции. В легких этих мышей обнаружен штамм S вирулентных клеток. ВЫВОД: произошла передача признаков вирулентности и формы калоний от убитых нагреванием бактерий шт.S, живым бактериям шт.R. Данное явление называется ТРАНСФОРМАЦИЕЙ.
|
|
|
Схема эксп-та Эвери.
шт.S(вир.) и шт.R(не вир). шт.S убивался высокой t, из клеток мертвого шт.St выделяли днк и смешивали со шт.R, этой смесью инфицировали мышей, в следствии чего они погибали.
ВЫВОД:днк является носителем ген-й инф-ии, отвечает за передачу признаков от бактерий шт S к бакт шт.R.
МОЛЕК-Й МЕХ-М ТРАНСФ-ИИ. для осущ-я трансф-ии кл-ки рец-ента должны нах-ся в сост-ии компетентности, кот.они приобретают в лаг-фазе роста.
ЭТАПЫ ТРАНСФ-ИИ. 1. связывание днк донора с компетентными кл-ми. 2. разрезание днк донора на фр-ты с пом. ферментов, выделяемых реципиентом. 3. проникновение фрагм-в днк в пространство между клет.оболочкой и ЦПМ. превращение двухцеп-х в одноцепочечные. 4. прон-ние в кл-ку фр-та одноцеп-ой днк. 5. интеграция одноцеп-го фр-та днк в бакт.хромосому путем сайт-специф-й рекомбинации. 6. коррекция сайтов молекулярной гетерозиготности.
ЗНАЧЕНИЕ ТРАНСФ-ИИ: является одним из осн-х способов переноса генов в кл-ки реципиента в генной инженерии.
КОНЪЮГАЦИЯ У БАКТЕРИЙ И ЕЕ МЕХАНИЗМ. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ КАРТЫ У БАКТЕРИЙ И ПРИНЦИПЫ ПОСТРОЕНИЯ.
Конъюгация - перенос генетической с одних бактериальной клетки к другим при непосредственном контакте при помощи конъюгационного мостика.
Общая схема конъюгации.
Конъюгация была открыта в 1946, американским учеными Дж. Лидербергом, Э.Тэйтумом (США) у бактерии E.Coli.
|
|
|
