2. Серологические реакции. 2.1. Серологическая идентификация инфицированных животных, стад и стай. 2.2. Факторы, влияющие на серологический диагноз

2. Серологические реакции

2. 1. Серологическая идентификация инфицированных животных, стад и стай

Было разработано множество серологических реакций для диагностики инфекций, вызванных бактериями Salmonella у животных. У домашней птицы полный анализ крови, в котором используются окрашивание антигена и реакция сывороточной агглютинации (РСА), успешно применяли более 50 лет для идентификации массового инфицирования S. Pullorum/Gallinarum (см. главу 2. 3. 11). Поскольку S. Enteritidis обладает тем же групповым соматическим антигеном D, что и S. Pullorum/Gallinarum и, по-видимому, имеет с ними общее происхождение (Thomson et al. , 2008), полный анализ крови и связанные с ним анализы можно использовать для диагностики инфекции, вызванной S. Enteritidis, но с низкой чувствительностью. В последние годы для диагностики инфекций домашней птицы, вызванных S. Enteritidis и S. Typhimurium, а также инфекций, вызванных другими сероварами у сельскохозяйственных животных, были разработаны другие аналитические тесты, такие как твердофазный ИФА (Barrow, 1994). ИФА эффективно использовали для серологического выявления носительства S. Dublin у крупного рогатого скота, и его можно применять для проверки сборного молока при скрининге молочных стад. Твердофазный ИФА, включающий соматические антигены из смеси сероваров («микс-твердофазный ИФА»), применяют для диагностики инфекции Salmonella у свиней в Дании, Германии, Нидерландах, Великобритании и некоторых других странах. В качестве материала для этого анализа используется сыворотка или тканевая жидкость, полученная при замораживании и последующем оттаивании образцов мышц (Nielsen et al. , 1998). Сходный тест можно использовать для обнаружения антител к S. Enteritidis и S. Typhimurium в яичном желтке от непривитого сельскохозяйственного поголовья кур несушек.

Многие варианты твердофазного ИФА в настоящее время стали регулярно применимыми, а некоторые из них поступают в продажу. Имеется потребность в стандартизации их использования, и с этой целью в Дании3 и Нидерландах4 выпускают на коммерческой основе панели контрольных сывороток.

3 Институт сывороток Статенс, Копенгаген, Дания (www. ssi. dk)

4 GD, Девентер, Нидерланды (www. gddeventer. com)

2. 2. Факторы, влияющие на серологический диагноз

1. Серологические методы направлены скорее на идентификацию массовой инфекции в стадах/стаях, чем на индивидуальное выявление зараженных животных, хотя в стадах можно использовать повторные тесты как вспомогательное средство для выбраковки животных, хронических носителей сальмонелл. Серологические тесты обычно разрабатывают для выявления ограниченного диапазона сероваров или серогрупп Salmonella.

2. Хорошо известно, что некоторые животные с положительной серологической реакцией не могут приобрести инфицирование микроорганизмами Salmonella, и в

странах с низкой распространенностью сальмонеллеза результаты исследований по оценке специфичности означают, что большинство положительных результатов являются ложноположительными. Животные, активно выделяющие сальмонеллы, могут быть серологически отрицательными на ранних стадиях болезни, а некоторые инфицированные особи животных никогда не дают сероконверсии. Животные с положительной серологической реакцией, возможно, перестали выделять сальмонеллы, хотя концентрации циркулирующего иммуноглобулина могут оставаться высокими. Другие животные на этой ферме также могут быть инфицированными. Животные с отрицательной серологической реакцией могут отражать недавнюю инфекцию с выделением сальмонелл еще до выработки иммуноглобулина на максимальном уровне или инфицирование менее инвазивными сероварами. Недавно инфицированные животные, по всей вероятности, в конечном итоге будут выявлены серологически в соответствующей программе мониторинга в период существования стада/стаи, но применение эффективных программ мониторинга часто ограничено по финансовым соображениям.

3. Новорожденные животные с незрелой иммунной системой не дают серологической реакции на соматический липосахаридный антиген до двух-трехнедельного возраста. Однако они способны серологически реагировать на жгутиковые белковые антигены. Особи крупного рогатого скота могут быть нереактивными приблизительно до возраста 10–12 недель, а молочные поросята вообще не развивают иммунной реакции или дают ответ антителами, который отражает материнский иммунитет. У свиней для проведения различий между недавней инфекцией и инфекцией, приобретенной некоторое время назад, можно использовать разные варианты реакции, включающие различные классы антител (иммуноглобулин M, иммуноглобулин A, иммуноглобулин G), но этот подход часто неприменим для анализа стад, где индивидуальные животные, как правило, находятся на разных стадиях инфекции. Большинство тестов основано на иммуноглобулине G, а повышенный уровень антител появляется, как правило, спустя 1–3 недели после начала инфекции и продолжается 2–3 месяца.

Цыплята также могут приобрести антитела против Salmonella пассивно от своих родителей через желточный мешок, свидетельствуя о том, что родительское поколение в стае заражено или вакцинировано. Млекопитающие могут получить материнские антитела через молозиво.

4. Для того чтобы сдерживать некоторые инфекции Salmonella у сельскохозяйственных животных, много лет использовали иммунизацию, поэтому, если возникает необходимость в серологической диагностике, надо дифференцировать вакцинную реакцию от иммунной реакции, развивающейся при реальной инфекции. Многие живые вакцины, введенные перорально, не вызывают у большинства животных значительной реакции сывороточных антител, но бывают случайные исключения, которые трудно интерпретировать. Инъекционные убитые вакцины, используемые для сдерживания S. Enteritidis у кур, могут привести к очень длительной выработке антител. Были созданы живые маркерные вакцины, которые можно отличить от полевых штаммов для экспериментального заражения из-за их противомикробной резистентности к рифампицину, а также при помощи ПЦР в режиме реального времени (Maurischat et al., 2015b).

5. Влияние антибиотикотерапии на серологическую реакцию остается непонятным. Одни исследователи обнаруживали снижение титров антител после терапии, а другие не нашли никакого эффекта. Однако если была использована антибактериальная терапия, то серологическая диагностика является более полезной методикой для сальмонеллеза, чем культивирование.

6. Существует более 2 600 различных сероваров Salmonella. В зависимости от антигена и используемой аналитической методики могут наблюдаться перекрестные серологические реакции между различными сероварами, например, S. Typhimurium, S. Pullorum и S. Enteritidis. В некоторых случаях также могут возникнуть перекрестные реакции в результате воздействия других микроорганизмов кроме Salmonella.

7. У домашней птицы можно проверить на иммуноглобулины Salmonella яичный желток, и анализ яиц может составить основу для скрининга сельскохозяйственного поголовья. Этот подход используется для мониторинга коммерческого яйценосного поголовья в Дании. У крупного рогатого скота для скрининга молочных стад можно проверять молоко на антитела против Salmonella.

8. Использование дисков из фильтровальной бумаги для сбора сыворотки устраняет необходимость в сепарировании сыворотки. Диски также обеспечивают длительное хранение материала и уменьшают расходы, связанные с транспортировкой в лабораторию. Чувствительность такого анализа может быть несколько меньше по сравнению с анализом свежей сыворотки.