 |
2.1.2. Критерии качества (стерильность, чистота, свобода от посторонних примесей)
|
|
|
|
2. 1. 2. Критерии качества (стерильность, чистота, свобода от посторонних примесей)
i) Стерильность и чистота
Вакцинный штамм должен быть проверен следующим образом:
a) Окрашивание пятна бактериальной суспензии на предметном стекле по Граму.
b) Гомогенизация культуры на неселективных питательных средах.
c) Метаболические потребности по результатам биохимических анализов.
d) Выявление маркеров и фаготипа.
e) Агглютинация со специфической антисывороткой.
f) Вакцинная культура и любые адъюванты, консерванты или другие материалы должны быть микробиологически стерильными и нетоксичными в рабочих концентрациях.
ii) Безопасность
Можно определить показатели LD50 (50% смертельная доза) или ID50 (50% инфекционная доза) на мышах либо (предпочтительно) проверить на целевых видах признаки относительно умеренных неблагоприятных реакций. Целевым видам животных надо ввести в рекомендуемом возрасте и рекомендуемым способом десятикратную полевую дозу живой вакцины или двойную дозу убитой вакцины. За животными ведут наблюдение, чтобы убедиться в отсутствии неблагоприятных реакций. Для живых вакцин надо продемонстрировать стабильность и невозвращение к вирулентности после серии пассажей на чувствительных видах. Также необходимо иметь в виду повторную вакцинацию. Надо продемонстрировать, что живая вакцина ненадолго сохраняется у привитых животных, не передается в молоко или яйца, употребляемые в пищу, а метод введения вакцины не представляет опасности для операторов.
iii) Эффективность
Эффективность вакцины надо продемонстрировать в лабораторных экспериментах и полевых испытаниях. Лабораторные эксперименты включают тесты с вакцинной провокацией на целевых видах с соблюдением рекомендаций по дозе и возрасту животных. Данные по эффективности также можно использовать как основу для проверки мощности партий вакцины. Полевые испытания по проверке эффективности вакцины труднее проводить из-за сложностей со стандартизацией, провокацией и обеспечением надежного контроля.
|
|
|
iv) Внешнесредовые аспекты
Живые вакцинные штаммы необходимо проверять на их способность сохраняться в окружающей среде и инфицировать нецелевые виды, например, грызунов и диких птиц, которые, вероятно, будут вступать в контакт с вакцинными бактериями. Недопустимую экологическую опасность представляет длительное выживание некоторых живых вакцин в фекалиях и мусоре при удалении такого материала со скотных дворов. Живые вакцины нельзя использовать в коммерческом поголовье яйценосных птиц во время кладки яиц.
2. 2. Способ изготовления
2. 2. 1. Описание процедуры производства
Посевную культуру размножают и поддерживают, используя подходящие питательные среды для роста Salmonella. Используемые среды не должны содержать сыворотку или животные ткани (если это специально не разрешено национальными правилами). Культуру можно поддерживать на твердой среде, в колбах Ру или в жидкой среде, причем в этом случае может использоваться крупномасштабное оборудование для ферментативных процессов. Ограниченное содержание железа и инкубация при низкой температуре на минимальной среде могут увеличить выработку антигена ЛПС вакцинным штаммом.
Производство вакцины должно находиться в подходящих чистых помещениях с доступом только для рабочего персонала. Необходимо соблюдать осторожность во избежание перекрестной контаминации между зонами обработки живых микроорганизмов и другими рабочими областями. Надо избегать контаминации от операторов или из окружающей среды, а приготовление вакцин должно происходить в зоне, отделенной от работы с диагностическими культурами. Недопустима работа с вакциной нездоровых операторов, а также лиц с ослабленным иммунитетом или принимающих иммуномодулирующие препараты. Персонал должен быть обеспечен защитной одеждой в зонах производства и в помещениях для животных.
|
|
|
Культуры посевной серии получают из первичной маточной культуры, а число пассажей зависит от аттестации процесса. Вакцину можно приготовить посредством посева на подходящую среду, например, питательный бульон со свежей культурой, а также с последующей инкубацией на вибраторе при 37°C в течение 24 часов, с аэрацией или без аэрации. Микроорганизмы собирают посредством осаждения или центрифугирования. В альтернативном варианте микроорганизмы можно выращивать и собирать на твердой среде, такой как питательный агар. Для получения живых вакцин суспензию разводят в ЗФФР при pH 7, 0 и лиофилизируют (по выбору).
Время инактивации убитых вакцин должно составлять, по меньшей мере, на 33% больше по сравнению с сокращением количества жизнеспособных бактерий до уровня, находящегося ниже порога обнаружения. Процесс инактивации обязательно применяют ко всему объему собранных вакцинных клеток.
Консерванты, наполнитель для лиофилизации, стабилизатор для мультидозовых контейнеров или другие вещества, добавляемые к заготовке вакцины, не должны
оказывать какого-либо вредного влияния на иммунизирующую активность конечного продукта.
|
|
|
