Определение вирулентности микробов

Определение вирулентности микробов

Вирулентность — биологическое свойство микроба, харак­теризующее степень его патогенности в момент исследования. В отличие от патогенности вирулентность является не видо­вым, а индивидуальным признаком микроба, который может усиливаться или ослабляться вплоть до полного исчезнове­ния под влиянием различных факторов внешней среды.

Для характеристики вирулентности пользуются количест­венными показателями, определяющими способность иссле­дуемой микробной культуры вызывать гибель искусственно зараженных ею подопытных животных. Изучение вирулент­ности бывает сопряжено с рядом трудностей, так как она оп­ределяется не только комплексом культурно-морфологиче­ских, токсигенных и биологических свойств микроба, но и резистентностью микроорганизма, подверженной большим колебаниям в связи с видом, возрастом животных, режимом их питания, температурой внешней среды, а также способом заражения, принятым в опыте. Поэтому при установлении ви­рулентности микроба очень важно вести исследование, точно соблюдая стандартность всех условий опыта.

Для определения вирулентности микробных культур чаще всего используют белых мышей. В том случае, когда белые мыши невосприимчивы к исследуемому возбудителю заболева­ния, пользуются другими видами животных: крысами, морс­кими свинками или кроликами.

Для определения вирулентности применяют молодую культуру микроба, так как старые культуры содержат боль­шое количество мертвых клеток.

Культуру микроба для заражения выращивают на мясо-пептонном агаре или другой плотной питательной среде, так как бульон, представляя собой сложный белковый субстрат, небезразличен для животного организма и может извращать результаты опыта. Исследуемую культуру микроба, выра­щенную на скошенном мясо-пептонном агаре, смывают изото­ническим раствором хлорида натрия и стандартизуют по оптическому стандарту так, чтобы в 1 мл этого раствора содер­жалось определенное количество микробных тел. В зависимо­сти от вида культуры, патогенности ее для животных, взятых в опыт, а также от цели и задач исследования количест­во микробных тел, содержащееся в 1 мл взвеси, может коле­баться от единиц до миллиардов. В тех случаях, когда по ка­ким-либо причинам получить агаровую культуру невозможно, пользуются суточной бульонной культурой. Для определения минимальной летальной дозы из бульонной культуры готовят ряд последовательных десятикратных разведений: 1: 10, 1: 100, 1: 1000, 1: 10000, 1: 100000 и т. д.

Исследуемую взвесь бактерий вводят различными спосо­бами: внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, под­кожно, интраназально—в зависимости от целей и задач ис­следования.

Отстандартизованную взвесь микробов в изотоническом растворе хлорида натрия, а также разведения бульонной культуры готовят с таким расчетом, чтобы различные дозы микроба, используемые в опыте, содержались в одинаковых объемах жидкости.

Каждую дозу культуры вводят одновременно нескольким животным. При определении минимальной смертельной до­зы учитывают и отмечают в протоколе опыта следующие дан­ные:

· количество микробов, введенных в организм животного;

· способ их введения;

· масса тела зараженного животного;

· сроки гибели после заражения.

Степень вирулентности чаще всего характеризуют тремя следующими показателями:

1. Минимальная смертельная доза Dlm (Dosis letalis mi­nima), т. e. наименьшая доза микробов, которая при опреде­ленном способе заражения, в определенных условиях опы­та вызывает гибель около 95% подопытных животных.

2. Наименьшая безусловно смертельная доза Dll (Dosis lerie letalis) — наименьшая доза микробов, являющаяся смертельной для всех 100% животных, взятых в опыт.

3. Средняя смертельная доза микробов LD ₅₀ (Dosis leta­lis 50%)—доза микробов, вызывающая гибель 50% зара­женных животных.

Показатель LD ₅₀ позволяет получить более достоверные результаты, и потому он чаще других используется в практи­ке экспериментальных исследований.

В отличие от Dlm и Dll, определявшихся непосредственно по результатам опыта, LD ₅₀ вычисляется путем довольно сложных математических расчетов. Более прост метод Кербера, в котором простота расчета удачно сочетается с доста­точно высокой точностью получаемых результатов.

Определение токсигенности микробов

В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а так­же некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьев -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.

Экзотоксины, вырабатываемые различными представите­лями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с пораже­нием отдельных органов и тканей и способностью при парен­теральном введении в организм вызывать образование анти­тел—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствую­щие им экзотоксины.

Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдер­живают в термостате в течение 2—3 недель для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.

Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная до­за (Dlm) и средняя смертельная доза (LD₅₀).

Для определения Dlm и LD₅₀ фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каж­дую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 жи­вотных. Для постановки проб подбирают животных, наибо­лее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах.

При учете полученных результатов в протоколе опыта от­мечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введе­ния токсина.

⇐ Предыдущая30313233343536373839Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: