 |
Тема 3. морфология и структура бактерий. приготовление фиксированных препаратов, простые методы окраски
|
|
|
|
Всем бактериям присущи определенная форма и размеры, которые выражаются в микрометрах. Они варьируют в широких пределах – от 0,1 – 0,15 мкм (Mycoplasma) до 10 – 15 мкм (Clostridium) в длине и от 0,1 мкм до 1,5 – 2,5 мкм в диаметре. Бόльшая часть бактерий имеет размеры от 0,5 – 0,8 мкм до 2 – 3 мкм.
Различают следующие основные формы бактерий: шаровидные (сферические), или кокковидные, палочковидные (цилиндрические), извитые (спиралевидные), нитевидные. Обнаружены так называемые квадратные бактерии, которые образуют скопления из 8 или 16 клеток в виде пласта.
Организация бактериальной клетки такова, что она позволяет ей координировать все процессы жизнедеятельности, за определенный срок удваивать свою биомассу и размножаться путём бинарного деления. В составе бактериальной клетки можно выделить различные структуры: клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, цитоплазму, нуклеоид, мезосому, периплазматическое пространство, цитоплазматические включения, рибосомы, капсулу, микрокапсулу, жгутик, плазмиды, пили, фимбрии, перемычки в периплазматическом пространстве.
Для изучения морфологии бактерий из них готовят фиксированные мазки. Фиксированные окрашенные препараты позволяют разграничить бактерии, выявлять детали строения микробной клетки, они удобны в практической работе, особенно при изучении патогенных микроорганизмов. Подготовка фиксированных препаратов включает приготовление мазка, высушивание его, фиксацию и окрашивание мазка.
Для приготовления мазка на чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю физиологического раствора, в которую петлей вносят исследуемый материал с плотной питательной среды и распределяют так, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром около 1 – 1,5 см. При приготовлении мазков из жидких культур исследуемый материал непосредственно наносится на предметное стекло.
|
|
|
Высушивание мазка проводится на воздухе или в струе тёплого воздуха.
Фиксация мазка производится с целью прикрепления микроорганизмов к стеклу и обеззараживания препарата. Кроме того, фиксированные бактерии лучше воспринимают красители. Для фиксации мазков высушенный препарат проводят 3 – 4 раза через пламя горелки, причём в пламени препарат следует выдерживать не более 2 секунд. Если фиксация проведена правильно, стекло при прикосновении к тыльной поверхности руки тотчас после окончания процесса фиксации слегка обжигает кожу. В некоторых случаях мазки можно фиксировать путем погружения в этиловый спирт на 15 – 20 минут, в смесь равных объёмов этилового спирта и эфира (смесь Никифорова) на 15 – 20 минут, в ацетон на 5 минут.
Окрашивание мазков осуществляется растворами анилиновых красителей. В основе окраски лежат сложные химические и физико – химические процессы взаимодействия компонентов микробной клетки с анилиновыми красителями. Красящая способность последних зависит от наличия у них карбоксильных, серосодержащих, аминогрупп, от заряда микробной клетки. Для окраски микроорганизмов используют, главным образом, основные красители - метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, генциан фиолетовый, фуксин, гематоксилин, везувин и др. Для выявления различных структурных элементов бактериальной клетки применяют нейтральные и кислые красители (нейтральный красный, кислый фуксин, Конго, пикриновая кислота и др.). Отношение микроорганизмов к красителям определяет их тинкториальные свойства.
Различают простые и сложные методы окраски. Первые состоят в окрашивании мазков одним красителем и дают возможность ознакомиться с общей морфологией микробов, их пространственным расположением на мазке и размерами клеток.
|
|
|
ЗАДАНИЕ
1. Приготовить мазки из жидкой культуры бактерий и с плотной питательной среды.
2. Окрасить мазок простым способом, для чего на фиксированный препарат нанести водный раствор фуксина (фуксин Пфейффера) на 1 – 2 мин или раствор метиленового синего на 3 – 5 мин, затем краску слить, препарат ополоснуть водой и просушить с помощью фильтровальной бумаги. Микроскопировать с иммерсионной системой и зарисовать.
3. Изучить в готовых препаратах различные формы микроорганизмов: шаровидные, палочковидные, извитые, нитевидные.
Контрольные вопросы
1. Каковы морфологические особенности бактериальной клетки?
2. Какие размеры имеют бактерии?
3. Какие этапы включает приготовление фиксированных препаратов?
4. Фиксация, основные цели фиксации мазков. Методы фиксации.
5. Какие красители используют для окрашивания фиксированных мазков?
6. Простой метод окраски. Основное значение этого метода.
7. Техника окраски мазка простым способом.
8. Каковы преимущества исследования бактерий в живом состоянии и в фиксированных окрашенных препаратах?
Тема 4. морфология и структура бактерий. приготовление фиксированных препаратов.
Окраска по граму
Клеточная стенка – структурный компонент, присущий только бактериям:
· сохраняет постоянную форму клетки;
· защищает внутреннюю часть клетки от действия механических и осмотических сил внешней среды; участвует в регуляции роста и деления клеток;
· обеспечивает коммуникацию с внешней средой через каналы и поры;
· несёт на себе специфические рецепторы для бактериофагов;
· определяет антигенную характеристику бактерий;
· содержащийся в её составе пептидогликан наделяет клетку важными иммунобиологическими свойствами;
Нарушение синтеза клеточной стенки бактерий является главной причиной их L – трансформации. Структура и химический состав клеточной стенки у разных бактерий не одинаков. По окраске мазков по методу Грама все бактерии дифференцируют на грамположительные и грамотрицательные, которые характеризуются отличительными особенностями (табл. 1).
Таблица 1
|
|
|
