 |
ТЕМА 2. бактериологический метод исследования: выделение чистых культур
|
|
|
|
Основными задачами бактериологического метода являются:
1) получение чистой культуры какого – либо вида из микробной ассоциации (из внешней среды или из организма человека) и предупреждение контаминации посторонней микрофлорой исследуемого материала;
2) идентификация микробов выделенной чистой культуры;
3) определение дополнительных средств, например, чувствительности к антибиотикам, вирулентности.
В основе бактериологического исследования лежит получение чистых культур, т. е. совокупности микробов одного вида, полученных из одного образца материала и содержащихся в определенном объеме среды.
Выделение чистых культур бактерий состоит из 3 – х этапов:
1) посев исследуемого материала на плотные питательные среды для получения изолированных колоний;
2) исследование колоний;
3) пересев с выбранных колоний на скошенный в пробирке МПА или специальную среду.
Существуют различные техники первичного исследуемого материала на питательные среды для получения изолированных колоний:
Техника посева на чашки Петри бактериологической петлей
Петлю исследуемого материала наносят на агар около края чашки и растирают на небольшом участке, затем, не отрывая петли, засевают материал на всю поверхность среды параллельными штрихами с интервалом 4 – 5 мм (рис. 1а). Посев можно производить и следующим способом: делается 4 – 5 параллельных штрихов в направлении А, затем петля прожигается в пламени горелки и ею проводятся штрихи в направлении Б поперек первоначально нанесенных полос. Петля снова прожигается, и делаются штрихи в направлении В, а затем и в направлении Г (рис. 1б). Ещё один вариант посева петлей заключается в том, что чашку со средой делят на 4 – 5 радиальных секторов и одной и той же петлей поочередно делают посевы на всех секторах (рис. 1в).
|
|
|
|
 |
Б
Г
 |
В
а б в
Рис. 1. Варианты посева петлей
Техника посева шпателем (метод Дригальского)
Берут 3 чашки Петри с плотной питательной средой. На середину первой петлей или пастеровской пипеткой вносят каплю исследуемого материала и круговыми движениями шпателя производят сплошной посев. Этим же шпателем, не стерилизуя его, распределяют материал по второй и третьей чашкам.
Техника посева тампоном
Первоначально тампоном, поворачивая его разными сторонами, проводят на чашке со средой диагональную дорожку шириной 1 – 2 см, затем штрихами петли через дорожку засевают среду по обе её стороны. Во втором варианте один из радиальных секторов чашки засевают тампоном, а затем поочередно остальные секторы – петлей с заходом каждый раз на уже обработанную тампоном поверхность.
Техника посева в толщу плотной среды (метод Коха)
Готовят 10 – кратные разведения материала в стерильном изотоническом растворе хлористого натрия и вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки с 9 мл расплавленного и остуженного до 45 – 500С агара. После тщательного перемешивания содержимое каждой пробирки выливают в стерильную чашку Петри. Метод применим при количественных исследованиях.
Техника посева проб исследуемого объекта (отпечатки)
Свежий срез объекта (например, кусочков органов, пищевых продуктов плотной консистенции) берут пинцетом и прикасаются к поверхности агара в соответствующем участке чашки Петри.
ЗАДАНИЕ
1. Рассеять смешанную культуру на питательные среды для получения изолированных колоний, используя при этом различные техники посева.
Контрольные вопросы
1. Что представляет собой процесс дыхания у микробов?
2. На какие типы разделяют микроорганизмы по способу дыхания?
|
|
|
3. Каковы характерные черты аэробного типа дыхания?
4. В чём особенности анаэробного типа дыхания? Что такое брожение?
5. Какие существуют методы создания анаэробиоза?
6. Как происходит размножение бактерий?
7. Что такое «число бактерий» и «микробная масса»?
8. перечислить фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде?
9. Что такое время генерации бактерий и как оно определяется?
10. В чём заключается способ непрерывного культивирования бактерий?
11. Что такое «синхронная культура» и как её получают?
12. Что собой представляет чистая культура бактерий?
13. Какие этапы включает выделение чистых культур бактерий?
14. Какие существуют техники первичного посева исследуемого материала?
|
|
|
