 |
Практическое использование бактериофагов.
|
|
|
|
Билет № 21
1. Профаг. Лизогенная культура. Лизогенная конверсия. Фаговары. Практическое использование фагов .
Различают вирулентные фаги, способные вызвать продуктивную форму процесса, и умеренные фаги, вызывающие редуктивную фаговую инфекцию (редукцию фага). В последнем случае геном фага в клетке не не реплицируется, а внедряется (интегрируется) в хромосому клетки хозяина (ДНК в ДНК), фаг превращается в профаг. Этот процесс получил название лизогении. Если в результате внедрения фага в хромосому бактериальной клетки она приобретает новые наследуемые признаки, такую форму изменчивости бактерий называют лизогенной (фаговой) конверсией . Бактериальную клетку, несущую в своем геноме профаг, называют лизогенной, поскольку профаг при нарушении синтеза особого белка- репрессора может перейти в литический цикл развития, вызвать продуктивную инфекцию с лизисом бактерии.
Умеренные фаги имеют важное значение в обмене генетическим материалом между бактериями- в трансдукции (одна из форм генетического обмена). Например, способностью вырабатывать экзотоксин обладают только возбудитель дифтерии, в хромосому которого интегрирован умеренный профаг, несущий оперон tox, отвечающий за синтез дифтерийного экзотоксина. Умеренный фаг tox вызывает лизогенную конверсию нетоксигенной дифтерийной палочки в токсигенную.
Фаговар вариант того или иного вида (подвида) бактерий, отличающийся от др. вариантов этого же вида по спектру чувствительности к типовым фагам.
По спектру действия на бактерии фаги разделяют на:
- поливалентные (лизируют близкородственные бактерии, например сальмонеллы);
- моновалентные (лизируют бактерии одного вида);
|
|
|
- типоспецифические (лизируют только определенные фаговары возбудителя).
На плотных средах фаги обнаруживают чаще с помощью спот (spot) - теста (образование негативного пятна при росте колоний) или методом агаровых слоев (титрования по Грациа).
Практическое использование бактериофагов.
1. Для идентификации (определение фаготипа).
2. Для фагопрофилактики (купирование вспышек).
3. Для фаготерапии (лечение дисбактериозов).
4. Для оценки санитарного состояния окружающей среды и эпидемиологического анализа.
2. Экзогенная и эндогенная инфекция. Ворота инфекции. Механизм заражения. Периоды инфекционного процесса. Бактерионосительство.
Э к з о г е н н а я и н ф е к ц и я возникает в результате заражения человека патогенными микроорганизмами, поступающими из окрю среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека, реконвалесцента и микробоносителя.
Э н д о г е н н а я и н ф е к ц и я вызывается представителями нормальной микрофлоры — условно-патогенными микроорганизмами самого индивидуума. Она часто возникает при иммунодефицит-ных состояниях организма.
Ткани, лишенные физиологической защиты против конкретного вида микроорганизма, служат местом его проникновения в макроорганизм, или в х о д н ы м и в о р о т а м и и н ф е к ц и и. Например, слизистая оболочка трахеи, бронхов— для стафилококка, пневмококка.
Основные этапы инфекционного процесса.
1. Адгезия- прикрепление микроорганизма к соответствующим клеткам хозяина.
2. Колонизация- закрепление микроорганизмов в соответствующем участке.
3. Размножение (увеличение количества- мультипликация).
4. Пенетрация- проникновение в нижележащие слои и распространение инфекта.
5. Повреждение клеток и тканей (связано с размножением, пенетрацией и распространением инфекта).
Инфекционные заболевания характеризуются цикличностью, сменой периодов.
|
|
|
1. Инкубационный период- от момента заражения до первых клинических признаков (процесс активного размножения возбудителя).
2. Продромальный период (предвестников) характеризуется общими неспецифическими проявлениями- недомоганием, головной болью, повышением температуры и другими симптомами преимущественно токсического генеза.
3. Период развития (разгара) болезни характеризуется типичными (специфическими) для данной инфекции клиническими проявлениями.
4. Период реконвалесценции (выздоровления). В качестве исхода болезни может наступить выздоровление, развиться носительство или летальный исход.
Бактерионосительство может иметь большое значение в распространении многих инфекций. Может наблюдаться как при латентной инфекции, так и после перенесенного инфекционного заболевания. Особое значение при некоторых инфекциях имеют хронические носители (брюшной тиф, вирусный гепатит В).
3. Гонорея и бленнорея. Этиология, принципы лабораторной диагностики.
Нейсcерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria, включающему 8 видов: Neisseriameningitides, Niesseriagonorrhoeae, N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca
Морфология. Имеют форму, сходную с менингококками, – похожи на кофейные зерна, располагаются парами, вогнутыми поверхностями друг к другу. В мазках из гноя располагаются внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоза). Под влиянием лекарственных веществ становятся крупными шарами или, наоборот, мелкими зернами. Под действием пенициллина переходят в L-форму.
Для культивирования гонококков на питательных средах требуется добавление к ним человеческого белка (сыворотки, крови или асцитической жидкости). Растут лучше при содержании в атмосфере 3–10% СО2. На асцит-агаре образуют прозрачные колонии с ровными краями и блестящей поверхностью.
БХ свойства слабо выражены – из углеводов расщепляют только глюкозу, образуют каталазу и оксидазу. Протеолитической активностью не обладают.
Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны. Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные иммуногеннные свойства
|
|
|
Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраны. Капсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок I класса – обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II – (протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию, препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig.
Экология и распространение. Единственный хозяин – человек. Вне организма человека гонококки быстро погибают, не выдерживая высыхания, охлаждения, высокой температуры. Но в толстой капле гноя на влажных предметах гонококки могут оставаться жизнеспособными в течение суток. Чувствительны к дезинфектантам (хлоргексидин, фенол) и к антибиотикам – пенициллину, тетрациклину, эритромицину. Однако высокая заболеваемость гонореей в последние годы и самолечение больных привели к широкому распространению устойчивых к сульфаниламидам и антибиотикам гонококков.
Патогенез. Передается от больного человека половым путем, реже – через предметы обихода (губки, полотенца и др. ). Наличие фимбрий обеспечивает адгезию при контакте с рецепторами эпителиальных клеток мочеполовых путей. Соединяясь с ворсинками цилиндрического эпителия слизистой оболочки уретры (у женщин ещё и эндоцервикального канала), гонококки проникают внутрь клеток путем эндоцитоза. Возникает острый уретрит, цервицит. У женщин, помимо матки, поражаются придатки (трубы, яичники), у мужчин – семенные пузырьки, предстательная железа. Повреждающим началом является эндотоксин – ЛПС клеточной стенки.
Возможна и экстрагенитальная локализация гнойно-воспалительного процесса (в прямой кишке, глотке), осложнения (артрит, эндокардит, менингит, фарингит), а также гонококковая септикопиемия.
Гонококки вызывают конъюнктивит – бленнорею у новорожденных – при прохождении родовых путей больной гонореей матери. Проявляется на 2—3-и сутки жизни ребёнка и характеризуется вначале очень сильным отёком обоих век; ещё через 2—3 суток начинается обильное выделение гноя. В тяжёлых случаях в процесс может вовлекаться роговая оболочка, образуется язва, заживающая рубцом и оставляющая после себя бельмо
|
|
|
Иммунитет. Образующиеся АТ не обладают защитными свойствами, клеточный иммунитет не формируется.
Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, примой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят мазки, окраска по Граму, При «+» результате – обнаруживают гонококки – грам+ диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков.
Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрожжевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужидкий агар с сывороткой и углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием кислоты.. Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонококков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорее.
Лечение: антибиотикотерапия (пенициллин, тетрациклин, канамицин), иммунотерапия - Гонококковая вакцина - взвесь гонококков, убитых нагреванием, используется для вакцинотерапии хронической гонореи.
|
|
|
