ЭТАП. Посев исследуемого материала на питательные среды.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФФ

ПО ДИСЦИПЛИНЕ МИКРОБИОЛОГИЯ

Cоставитель: доцент Л.П.Лисишникова

2012г.

 

 

Тема занятия №6: Типы и механизмы питания бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Бактериологический метод диагностики.

Цели и задачи:

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: аминоавтотрофы, амоногетеротрофы, аутотрофы, гетеротрофы,.идентификация, культивирование, питательные среды, чистая культура.

План занятия

1.Типы и механизмы питания бактерий.

2.Культивирование бактерий.

3.Питательные среды

4.Бактериологический метод диагностики.

 

Физиология микроорганизмов.

Жизненные функции микроорганизмов: питание, дыхание, рост и размножение — изучает физиология. В основе физиологических функций лежит непрерывный обмен веществ (метаболизм). Сущность обмена веществ составляют два противоположных, но взаимосвязанных процесса: ассимиляция (анаболизм) и диссимиляция (катаболизм). Ассимиляция — это усвоение питательных веществ и использование их для синтеза клеточных структур. При процессах диссимиляции питательные вещества разлагаются и окисляются, при этом выделяется энергия, необходимая для жизни микробной клетки. Все процессы синтеза и распада питательных веществ совершаются с участием ферментов. В микроорганизмах происходит интенсивный обмен веществ, за сутки 1 микробная клетка может переработать питательных веществ, которые в 30—40 раз больше ее массы. Микробная клетка использует питательные субстраты для синтеза составных частей своего тела, ферментов, пигментов роста.

Типы питания бактерий определяются по характеру усвоения углерода и азота.

По усвоению углерода бактерии делят на 2 типа:

аутотрофы, или литотрофы, — бактерии, использующие в качестве источника углерода СО2 воздуха.

гетеротрофы, или органотрофы, — бактерии, которые нуждаются для своего питания в органическом углероде (углеводы, жирные кислоты).

По способности усваивать азот микроорганизмы делятся на 2 группы: аминоавтотрофы и амоногетеротрофы.

Аминоавтотрофы — для синтеза белка клетки используют молекулярный азот воздуха или усваивают его из аммонийных солей.

Аминогетеротрофы — получают азот из органических соединений — аминокислот, сложных белков. Сюда относятся все патогенные микроорганизмы и большинство сапро-фитов.

По характеру источника использования энергии микроорганизмы делятся на фототрофы, использующие для биосинтетических реакций энергию солнечного света, и хемотрофы. Хемотрофы получают энергию за счет окисления неорганических веществ (нитрифицирующие бактерии и др.) и органических соединений (большинство бактерий, в том числе и патогенного для человека вида).

Графологическая структура «Питание бактерий» по характеру усвоения углерода по характеру усвоения азота по характеру использования источника энергии аутотрофы гетеротрофы амино- амино- фото- хемо-

(литотрофы) (органотрофы) автотрофы гетеро- трофы трофы

(от греч. litos — трофы камень)

Факторы роста: наряду с пептонами, углеводами, жирными кислотами и неорганическими элементами, бактерии нуждаются в специальных веществах — ростовых факторах, играющих роль катализаторов в биохимических процессах клетки и являющихся структурными единицами при образовании некоторых ферментов. К факторам роста относятся различные витамины, некоторые аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания и др.

Транспорт питательных веществ в бактериальную клетку происходит путем:

1.Пассивной диффузии.

2.Облегченной диффузии

3.Активного транспорта, который протекает с затратой энергии.

Транспорт питательных веществ из бактериальной клетки происходит путем:

1.Фосфортрансферазной реакции

2.Контрансляционной секреции (выход токсинов столбняка, дифтерии)

3.Почкованием мембраны

Культивирование микроорганизмов.

1.Температура

2. Рн среды

3.Стерильность

Питательные среды

Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны соответствовать следующим требованиям:

· содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей (микроэлементы, минеральные вещества, витамины, аминокислоты);

· иметь оптимальную реакцию (рН);

· быть изотоничными для микробной клетки;

· быть стерильными;

· плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию;

· быть прозрачными.

КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД.

В основу классификации положены следующие признаки:

1. консистентция

жидкие (бульоны), плотные (агар. крахмал, желатин) и полужидкие (0.5 - 10% агара в составе питательной среды).

2. состав:

простые - МПБ, ПВ (имеют минимум питательных веществ) и сложные (к простым средам добавляют кровь, сыворотку, углеводы и др.)

3. назначение:

дифференциально-диагностические - позволяют отличить один вид микроба от другого по характеру роста (кровяной агар, среды Гисса, Клиглера, Эндо, Левина, Плоскирева и т.п.);

специальные - служат для выделения и выращивания микробов, не растущих на простых питательных средах (сахарный бульон, тиогликолевая среда и т.п.):

элективные - служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они обеспечивают благоприятные условия, задерживают или подавляют рост сопутствующих микроорганизмов (для холерного вибриона - щелочной агар, для грибов - среда Сабуро и т.п.).

Термостаты

Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.

Термостат – это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Температура регулируется тер­морегулятором. Оптимальная температура для размножения большинства микроорганизмов 37°С.

 

ЭТАПЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ.

ЭТАП. Посев исследуемого материала на питательные среды.

Важным этапом бактериологического исследования является посев. В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют разные методы посева. Все они включают обязательную цель: оградить посев от посторонних микробов.

Посев из пробирки в пробирку. Пробирку с посевным материалом и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большими и указательными пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Вынув пробки, края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Прокаленную петлю вводят в пробирку с посевным материалом, охлаждают и, набрав немного материала, переносят в пробирку со средой. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя спиртовки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.

При посеве на жидкие среды тампоном его погружают в среду и 3-5 секунд ополаскивают в ней.

Посев петлей. Небольшое количество посевного материала втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проводя петлей из стороны в сторону. Затем у того места, где закончились штрихи, агар прокалывают петлей, снимая избыток посевного материала. Оставшийся на петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют по всей поверхности среды. По окончании посева закрывают чашку и прожигают петлю.

Посев тампоном. Тампон с посевным материалом вносят в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды. Засеянные чашки подписывают со стороны дна и помещают в термостат дном вверх.

Метод секторных посевов. Петлей диаметром 2мм, емкостью 0,005 мл, производят посев материала (30-40 штрихов) на сектор А чашки Петри с питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и аналогичным образом - из сектора I во II и из II в III. Чашки инкубируют при 37 С 18-24 часа, затем подсчитывают число колонии, выросших в разных секторах.

Метод секторных посевов используется при исследовании мочи. Определение степени бактериурии, по количеству выросших колонии, производят согласно таблице. Данный метод позволяет не только определить степень бактериурии, но и выделить возбудителя заболевания в чистой культуре.

Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой. С этой целью используют следующие критерии:

1. Степень бактериурии, не превышающая 10³ микробных клеток в 1 мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи.

2. Степень бактериурии, равная 10⁴ микробных клеток в 1 мл мочи, расценивается как сомнительный результат. Исследование следует повторить.

3. Степень бактериурии, равная и выше 10⁵ микробных клеток в 1 мл мочи, указывает на наличие воспалительного процесса.

12345Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: