Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!
МегаЛекции

Культивирование риккетсий, вирусов и хламидий




Культивирование риккетсий, вирусов и хламидий на тканевых культурах, куриных эмбрионах и лабораторных животных.

Риккетсии и хламидий — грамотрицательные мелкие бактерии, являющиеся, как и вирусы, облигатными внутриклеточными паразитами; размножаются в цитоплазме и ядре инфицированных клеток. Они не растут на искусственных питательных средах, используемых для культивирования обычных бактерий.
Для культивирования риккетсии и хламидий применяют куриные эмбрионы, культуры клеток с пониженным метаболизмом, а также чувствительных животных. Риккетсии способны к биосинтезу белка, но не могут самостоятельно получать макроэргические соединения, поэтому их можно назвать «энергетическими паразитами» клеток-эукариотов. В связи с этим, для культивирования риккетсий обычно заражают куриные эмбрионы в желточный мешок (метод Кокса), культуры клеток, в которых некоторые виды риккетсий образуют, как и вирусы, тельца включений. Риккетсии можно культивировать путем инфицирования ими переносчиков возбудителей инфекций — вшей, блох, клещей. Реже заражают чувствительных лабораторных животных: морских свинок, белых мышей.
Для культивирования хламидий приходится использовать живые культуры клеток, что значительно усложняет диагностическую процедуру. Обычно для культивирования хламидий используют культуру фибробластов, обработанную антиметаболитами, облегчающими развитие в них хламидий, поскольку развитие самих клеток приостанавливается. Диагностика занимает около недели, что весьма неудобно в клинических условиях. Однако этот метод является одним из самых надежных, именно с ним сравнивают диагностическую ценность других методов выявления хламидий.

Культивирование вирусов.

Перед культивированием материал больного (кроме крови и ликвора) центрифугируется (2000 оборотов в течение 10 мин). Берут надосадочную жидкость и обрабатывают антибиотиком широкого спектра действия (пенициллин) 500 тыс. ЕД на 1,0 мл. исследуемого материала для подавления бактериальной флоры.

Этап – культивирование

На культурах клеток.

Культура клеток – это клетки, которые способные жить в пробирках на искусственных питательных средах (среда 199).

Разновидности культур клеток:

 

Название Сущность Примеры
1. первично-трипсинизированные Получают из эмбриональной ткани Первично-трипсинизированные
2. перевиваемые Получают из опухолевых клеток Hela, D-6, Hep-2
3. полуперевиваемые Имеют двойной набор хромосом фибробласты

 

На куриных эмбрионах.

Заражают 7-10 дневные куриные эмбрионы с учетом тропизма:

Тропизм способ заражения
1. дермотропные ХАО
2. респираторные Амнион
3. нейротропные Желточный мешок
4. энтеровирусы Не культивируются

 

На лабораторных животных.

Культивирование проводят на мышах сосунках (до 2-х дней жизни), лабораторных крысах, морских свинках, кроликах. Заражают в зависимости от тропизма вируса:

 

Тропизм способ заражения
1. дермотропные н\к, п\к, в\к
2. респираторные интронозально
3. нейротропные интроцеребрально
4. энтеровирусы внутрибрюшинно

Этап - индикация

(обнаружение микроорганизма в материале больного).

На культурах клеток:

· Цветная проба.

Если цвет индикатора (красный) питательной среды 199 не изменяется, это свидетельствует о наличии возбудителя в материале. Если клетки живые и выделяют продукты метаболизма, то происходит изменение цвета индикатора на желтый.

· Цитопатическое действие (ЦПД) - разрушение монослоя.

 

Виды ЦПД:

 

Название Сущность
1. Симпласт Образование многоядерных конгломератов
2. Очаговое Разрушение монослоя очагами
3. Диффузное Равномерное разрушение монослоя

 

· Реакция гемадсорбции. Берем культуру клеток, зараженных вирусом, и вносим эритроциты. После некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности клеток, пораженных гемагглютинирующим вирусом, остаются прилипшие эритроциты.

 

На куриных эмбрионах:

· Гибель эмбриона

· Отставание в развитии

· Цитопатическое действие на оболочках эмбриона (некроз, кровоизлияния)

· Гемагглютинация с жидкостями эмбриона.

На лабораторных животных:

· Отставание животных в развитии

· Развитие характерного симптомокомплекса заболевания.

· Гибель животного (из органов готовят мазки-отпечатки и смотрят в них включения: ядерны е и цитоплазматические).

Поделиться:





Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...