 |
Культивирование риккетсий, вирусов и хламидий
|
|
|
|
Культивирование риккетсий, вирусов и хламидий на тканевых культурах, куриных эмбрионах и лабораторных животных.
Риккетсии и хламидий — грамотрицательные мелкие бактерии, являющиеся, как и вирусы, облигатными внутриклеточными паразитами; размножаются в цитоплазме и ядре инфицированных клеток. Они не растут на искусственных питательных средах, используемых для культивирования обычных бактерий.
Для культивирования риккетсии и хламидий применяют куриные эмбрионы, культуры клеток с пониженным метаболизмом, а также чувствительных животных. Риккетсии способны к биосинтезу белка, но не могут самостоятельно получать макроэргические соединения, поэтому их можно назвать «энергетическими паразитами» клеток-эукариотов. В связи с этим, для культивирования риккетсий обычно заражают куриные эмбрионы в желточный мешок (метод Кокса), культуры клеток, в которых некоторые виды риккетсий образуют, как и вирусы, тельца включений. Риккетсии можно культивировать путем инфицирования ими переносчиков возбудителей инфекций — вшей, блох, клещей. Реже заражают чувствительных лабораторных животных: морских свинок, белых мышей.
Для культивирования хламидий приходится использовать живые культуры клеток, что значительно усложняет диагностическую процедуру. Обычно для культивирования хламидий используют культуру фибробластов, обработанную антиметаболитами, облегчающими развитие в них хламидий, поскольку развитие самих клеток приостанавливается. Диагностика занимает около недели, что весьма неудобно в клинических условиях. Однако этот метод является одним из самых надежных, именно с ним сравнивают диагностическую ценность других методов выявления хламидий.
|
|
|
Культивирование вирусов.
Перед культивированием материал больного (кроме крови и ликвора) центрифугируется (2000 оборотов в течение 10 мин). Берут надосадочную жидкость и обрабатывают антибиотиком широкого спектра действия (пенициллин) 500 тыс. ЕД на 1,0 мл. исследуемого материала для подавления бактериальной флоры.
Этап – культивирование
На культурах клеток.
Культура клеток – это клетки, которые способные жить в пробирках на искусственных питательных средах (среда 199).
Разновидности культур клеток:
| Название | Сущность | Примеры |
| 1. первично-трипсинизированные | Получают из эмбриональной ткани | Первично-трипсинизированные |
| 2. перевиваемые | Получают из опухолевых клеток | Hela, D-6, Hep-2 |
| 3. полуперевиваемые | Имеют двойной набор хромосом | фибробласты |
На куриных эмбрионах.
Заражают 7-10 дневные куриные эмбрионы с учетом тропизма:
| Тропизм | способ заражения |
| 1. дермотропные | ХАО |
| 2. респираторные | Амнион |
| 3. нейротропные | Желточный мешок |
| 4. энтеровирусы | Не культивируются |
На лабораторных животных.
Культивирование проводят на мышах сосунках (до 2-х дней жизни), лабораторных крысах, морских свинках, кроликах. Заражают в зависимости от тропизма вируса:
| Тропизм | способ заражения |
| 1. дермотропные | н\к, п\к, в\к |
| 2. респираторные | интронозально |
| 3. нейротропные | интроцеребрально |
| 4. энтеровирусы | внутрибрюшинно |
Этап - индикация
(обнаружение микроорганизма в материале больного).
На культурах клеток:
· Цветная проба.
Если цвет индикатора (красный) питательной среды 199 не изменяется, это свидетельствует о наличии возбудителя в материале. Если клетки живые и выделяют продукты метаболизма, то происходит изменение цвета индикатора на желтый.
· Цитопатическое действие (ЦПД) - разрушение монослоя.
Виды ЦПД:
| Название | Сущность |
| 1. Симпласт | Образование многоядерных конгломератов |
| 2. Очаговое | Разрушение монослоя очагами |
| 3. Диффузное | Равномерное разрушение монослоя |
|
|
|
· Реакция гемадсорбции. Берем культуру клеток, зараженных вирусом, и вносим эритроциты. После некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности клеток, пораженных гемагглютинирующим вирусом, остаются прилипшие эритроциты.
На куриных эмбрионах:
· Гибель эмбриона
· Отставание в развитии
· Цитопатическое действие на оболочках эмбриона (некроз, кровоизлияния)
· Гемагглютинация с жидкостями эмбриона.
На лабораторных животных:
· Отставание животных в развитии
· Развитие характерного симптомокомплекса заболевания.
· Гибель животного (из органов готовят мазки-отпечатки и смотрят в них включения: ядерны е и цитоплазматические).
|
|
|
