Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!
МегаЛекции

ЭТАП. Выделение чистой культуры возбудителя заболевания.




 

· Метод Дригальского - метод изолированных колоний, используется для культур, растущих на плотных питательных средах.

· Метод Коха - метод серийных разведений, используется для культур, не растущих на плотных питательных средах.

· Метод Шукевича - используется для микроорганизмов дающих ползучий рост (роение).

ЭТАП. Идентификация выделенного возбудителя заболевания.

 

Определение вида возбудителя заболевания из материала больного проводят по следующим признакам:

1. По морфологии возбудителя (из чистой культуры готовят мазки, окрашивают и микроскопируют).

2. По культуральным свойствам (характеру роста на питательных средах.).

3. По биохимической активности:

Сахаролитическая активность - разложение углеводов и многоатомньгх спиртов до кислоты (К) - изменение цвета индикатора, или до кислоты и газа (КГ) - изменение цвета индикатора и образование пузырьков газа. Сахаролитическую активность изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод, многоатомный спирт и индикатор.

Протеолитическая активность - способность разлагать белки с образованием аммиака (лакмусовая бумажка синеет); сероводорода - сеют микроорганизм на пептонную воду и под пробку вносят индикаторную бумажку, пропитанную уксусно-кислым свинцом - при выделении сероводорода бумажка чернеет; индола - сеют культуру на мясо-пептонный бульон, под пробирку вносят индикаторную бумажку, пропитанную щавелевой кислотой - при выделении индола бумажка розовеет.

Способы изучения биохимических свойств бактерий:

А). Среды «пестрого ряда» (среды Гисса).

Б). Система индикаторных бумаг (СИБы).

Состав: диски из фильтровальной бумаги, пропитанные питательными средствами (питательная основа + субстрат + индикатор) и высушенные, хранятся во флаконах.

Принцип действия: диски добавляются к густой суспензии исследуемой культуры в физрастворе. Учет производят после 18-24 часовой инкубации в термостате по изменению цвета индикатора.

В). Панели биохимической идентификации.

Состав: в лунках специальных пластиковых панелей находятся соответствующие высушенные питательные среды (питательная основа + субстрат + индикатор).

Принцип действия: в лунки вносят суспензию исследуемой культуры и после инкубации (от 5 до 24 часов) учитывают результат по изменению цвета индикатора.

Примеры: Паналь биохимической дифференцировки энтеробактерий –ПБДЭ (Россия), АРI –20Е (Франция), Crystal (США).

Г). Системы автоматизированной идентификации.

Принцип действия тот же, что и в предыдущем методе, однако инкубация панелей, учет результатов и идентификация производится при помощи компьютера.

Примеры: MS-2 (США), Bioscreen (Финляндия), Sceptor (США).

4. По антигенной структуре: постановка реакции агглютинации (РА) на стекле с агглютинирующими сыворотками.

5. Фаготипаж: определение вида возбудителя по заведомо известному бактериофагу (вирус бактерий) методами: стерильного пятна и просветления бульона.

6. По признакам патогенности: определение токсигенности культуры (в реакции преципитации в агаре (ПР); в реакции нейтрализации на животных (РН). По ферментам патогенности (лецитоветиллаза, плазмокоагулаза). Антифагины - капсула при микроскопировании.

 

Выделенная чистая культура возбудителя заболевания должна быть исследована на чувствительность к антибиотикам для назначения правильного этиотропного лечения или к дезредствам

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА.

Заполнить таблицы и схемы.

Типы питания бактерий Механизмы питания бактерий
   
   
   

Классификация питательных сред:

 

1. По консистенции:

А) ________________________ Пример________________________

Б) ________________________ Пример________________________

В) ________________________ Пример________________________

2. По составу:

А) ________________________ Пример________________________

Б) ________________________ Пример________________________

3. По назначению:

А) ________________________ Пример________________________

Б) ________________________ Пример________________________

Требования, предъявляемые к питательным средам:

1) ________________________________________________

2) ________________________________________________

3)___________________________________

 

ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

(Протокол заполняется на занятиях №№6-9).

Й день исследования.

Посев исследуемого материала (культивирование)____________________

на ________________________________________.

Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.

Й день исследования.

1. Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов.

  Изучаемые Свойства Тип колоний
         
Культуральные свойства:            
- форма колонии;            
- размер колонии;            
- цвет;            
- край;            
- поверхность;            
- консистен­ция;        
- характер гемолиза            
Количество колоний            
Морфология (мазок)        
Окраска по Грамму        
Для выделения чистой культуры пересев изолированной колонии на          

Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.

Й день исследования.

1). Визуальная и микроскопическая проверка чистоты выделенной культуры.

 

Результат МПА Сахарный бульон
Морфология    
Окраска по Грамму    

 

 

2). Постановка биохимических тестов:

 

Микроорганизм    
Сахаролитическая активность Протеолитическая активность    

 

3). Фаготипаж.

Принцип метода: приготовить взвесь изучаемой культуры по стандарту мутности, произвести посев «газоном» на чашку с плотной питательной средой (Мюллера-Хинтона), подсушивают и наносят 1 каплю бактериофага по секторам.

Учет результатов: после инкубации посевов в течении 24 часов учитывают чувствительность культуры к бактериофагу по зоне подавления роста.

 

Укажите номера бактериофагов:

1. _______________________________________________________________

2. _______________________________________________________________

3. _______________________________________________________________

4. _______________________________________________________________

 

Й день исследования.

1). Учет результатов биохимической активности:

1. _______________________________________________________________

2. _______________________________________________________________

2). Учет результатов фаготипажа:

Стерильная зона образовалась в с екторе, значит выделенная культура соответствует бактериофагу.

4). Выдача ответа.

Из исследуемого материала выделена культура ______________

соответствующая бактериофагу__________________________________________________.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ

(Протокол заполняется на занятиях №№ 6-9.)

 

Й день исследования.

 

Посев исследуемого материала __________________________________________

на ________________________________________.

Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.

Й день исследования.

Характер роста __________________________________________

Мазок __________________________________________

Пересев на __________________________________________

Й день исследования.

1. Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов.

Изучаемые свойства: Тип колоний
   
Характер роста        
Морфология    
Окраска по Грамму    
Для выделения чистой культуры пересев на    

 

Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.

 

Й день исследования.

Микроскопическая проверка чистоты выделенной культуры.

Выдача ответа.

 

Из материала выделена культура ___________________________

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФФ

ПО ДИСЦИПЛИНЕ МИКРОБИОЛОГИЯ

Поделиться:





Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...