 |
ЭТАП. Выделение чистой культуры возбудителя заболевания.
|
|
|
|
· Метод Дригальского - метод изолированных колоний, используется для культур, растущих на плотных питательных средах.
· Метод Коха - метод серийных разведений, используется для культур, не растущих на плотных питательных средах.
· Метод Шукевича - используется для микроорганизмов дающих ползучий рост (роение).
ЭТАП. Идентификация выделенного возбудителя заболевания.
Определение вида возбудителя заболевания из материала больного проводят по следующим признакам:
1. По морфологии возбудителя (из чистой культуры готовят мазки, окрашивают и микроскопируют).
2. По культуральным свойствам (характеру роста на питательных средах.).
3. По биохимической активности:
Сахаролитическая активность - разложение углеводов и многоатомньгх спиртов до кислоты (К) - изменение цвета индикатора, или до кислоты и газа (КГ) - изменение цвета индикатора и образование пузырьков газа. Сахаролитическую активность изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод, многоатомный спирт и индикатор.
Протеолитическая активность - способность разлагать белки с образованием аммиака (лакмусовая бумажка синеет); сероводорода - сеют микроорганизм на пептонную воду и под пробку вносят индикаторную бумажку, пропитанную уксусно-кислым свинцом - при выделении сероводорода бумажка чернеет; индола - сеют культуру на мясо-пептонный бульон, под пробирку вносят индикаторную бумажку, пропитанную щавелевой кислотой - при выделении индола бумажка розовеет.
Способы изучения биохимических свойств бактерий:
А). Среды «пестрого ряда» (среды Гисса).
Б). Система индикаторных бумаг (СИБы).
Состав: диски из фильтровальной бумаги, пропитанные питательными средствами (питательная основа + субстрат + индикатор) и высушенные, хранятся во флаконах.
|
|
|
Принцип действия: диски добавляются к густой суспензии исследуемой культуры в физрастворе. Учет производят после 18-24 часовой инкубации в термостате по изменению цвета индикатора.
В). Панели биохимической идентификации.
Состав: в лунках специальных пластиковых панелей находятся соответствующие высушенные питательные среды (питательная основа + субстрат + индикатор).
Принцип действия: в лунки вносят суспензию исследуемой культуры и после инкубации (от 5 до 24 часов) учитывают результат по изменению цвета индикатора.
Примеры: Паналь биохимической дифференцировки энтеробактерий –ПБДЭ (Россия), АРI –20Е (Франция), Crystal (США).
Г). Системы автоматизированной идентификации.
Принцип действия тот же, что и в предыдущем методе, однако инкубация панелей, учет результатов и идентификация производится при помощи компьютера.
Примеры: MS-2 (США), Bioscreen (Финляндия), Sceptor (США).
4. По антигенной структуре: постановка реакции агглютинации (РА) на стекле с агглютинирующими сыворотками.
5. Фаготипаж: определение вида возбудителя по заведомо известному бактериофагу (вирус бактерий) методами: стерильного пятна и просветления бульона.
6. По признакам патогенности: определение токсигенности культуры (в реакции преципитации в агаре (ПР); в реакции нейтрализации на животных (РН). По ферментам патогенности (лецитоветиллаза, плазмокоагулаза). Антифагины - капсула при микроскопировании.
Выделенная чистая культура возбудителя заболевания должна быть исследована на чувствительность к антибиотикам для назначения правильного этиотропного лечения или к дезредствам
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА.
Заполнить таблицы и схемы.
| Типы питания бактерий | Механизмы питания бактерий |
Классификация питательных сред:
|
|
|
1. По консистенции:
А) ________________________ Пример________________________
Б) ________________________ Пример________________________
В) ________________________ Пример________________________
2. По составу:
А) ________________________ Пример________________________
Б) ________________________ Пример________________________
3. По назначению:
А) ________________________ Пример________________________
Б) ________________________ Пример________________________
Требования, предъявляемые к питательным средам:
1) ________________________________________________
2) ________________________________________________
3)___________________________________
ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
(Протокол заполняется на занятиях №№6-9).
Й день исследования.
Посев исследуемого материала (культивирование)____________________
на ________________________________________.
Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.
Й день исследования.
1. Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов.
| Изучаемые Свойства | Тип колоний | |||
| Культуральные свойства: | ||||
| - форма колонии; | ||||
| - размер колонии; | ||||
| - цвет; | ||||
| - край; | ||||
| - поверхность; | ||||
| - консистенция; | ||||
| - характер гемолиза | ||||
| Количество колоний | ||||
| Морфология (мазок) | ||||
| Окраска по Грамму | ||||
| Для выделения чистой культуры пересев изолированной колонии на |
Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.
Й день исследования.
1). Визуальная и микроскопическая проверка чистоты выделенной культуры.
| Результат | МПА | Сахарный бульон |
| Морфология | ||
| Окраска по Грамму |
2). Постановка биохимических тестов:
| Микроорганизм | ||
| Сахаролитическая активность Протеолитическая активность |
3). Фаготипаж.
Принцип метода: приготовить взвесь изучаемой культуры по стандарту мутности, произвести посев «газоном» на чашку с плотной питательной средой (Мюллера-Хинтона), подсушивают и наносят 1 каплю бактериофага по секторам.
Учет результатов: после инкубации посевов в течении 24 часов учитывают чувствительность культуры к бактериофагу по зоне подавления роста.
|
|
|
Укажите номера бактериофагов:
1. _______________________________________________________________
2. _______________________________________________________________
3. _______________________________________________________________
4. _______________________________________________________________
Й день исследования.
1). Учет результатов биохимической активности:
1. _______________________________________________________________
2. _______________________________________________________________
2). Учет результатов фаготипажа:
Стерильная зона образовалась в с екторе, значит выделенная культура соответствует бактериофагу.
4). Выдача ответа.
Из исследуемого материала выделена культура ______________
соответствующая бактериофагу__________________________________________________.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ
(Протокол заполняется на занятиях №№ 6-9.)
Й день исследования.
Посев исследуемого материала __________________________________________
на ________________________________________.
Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.
Й день исследования.
Характер роста __________________________________________
Мазок __________________________________________
Пересев на __________________________________________
Й день исследования.
1. Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов.
| Изучаемые свойства: | Тип колоний | |
| Характер роста | ||
| Морфология | ||
| Окраска по Грамму | ||
| Для выделения чистой культуры пересев на |
Инкубация в термостате при _______° С 18-24 часа.
Й день исследования.
Микроскопическая проверка чистоты выделенной культуры.
Выдача ответа.
Из материала выделена культура ___________________________
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФФ
|
|
|
ПО ДИСЦИПЛИНЕ МИКРОБИОЛОГИЯ
|
|
|
