 |
Серологическое обследование
|
|
|
|
При первичной инфекции антитела классов IgM и IgA образуются не раньше второй недели от появления клинических симптомов, спустя еще 1 неделю начинают обнаруживаться и антитела класса IgG, достигая своего максимума к 6—8 неделе, после чего их уровень снижается. После вакцинации образуются антитела класса IgG. IgG-антитела могут выявляться до достижения взрослого возраста в низкой концентрации. В связи с этим серологическую диагностику коклюша и паракоклюша целесообразно применять не ранее третьей недели болезни; оптимальные сроки для серологической диагностики – с 3 по 6 неделю заболевания. В течение 1 года после вакцинации против коклюша проводить серологическое исследование в диагностических целях не рекомендуется. Следует учитывать, что у детей в возрасте до 3 месяцев собственные антитела не вырабатываются, но могут присутствовать материнские антитела, которые, как правило, определяются в низких титрах.
Таблица 5
Рекомендуемая схема лабораторной диагностики коклюша/паракоклюша
| Методы
Категории | 1—2 недели | 3—4 недели | более 4 недель | ||
| без лечения АБ | на фоне АБ | без лечения АБ | на фоне АБ | без лечения или с ним | |
| Непривитые дети до 1 года | БМ*, ПЦР | ПЦР | БМ, ПЦР | ПЦР, серология | Серология |
| Непривитые дети старше 1 года | БМ, ПЦР | ПЦР | ПЦР, серология (БМ**) | Серология (ПЦР) | Серология |
| Привитые дети, подростки, взрослые | ПЦР, БМ | ПЦР | ПЦР, серология (БМ) | Серология (ПЦР) | Серология |
| * БМ – бактериологический метод. ** Эффективность метода, указанного в скобках, у данной группы пациентов существенно снижается | |||||
5.3. Оформление направления материала на исследование
|
|
|
На доставляемый в лабораторию материал должно быть оформлено направление, где указывается:
а) наименование учреждения, направившего материал на исследование;
б) фамилия, имя, отчество, возраст и домашний адрес обследуемого;
в) причина обследования;
г) вакцинальный статус (количество полученных доз вакцины против коклюша с указанием вакцины);
д) дата заболевания;
е) дата и время взятия материала;
ж) кратность обследования;
з) наименование материала и метод взятия его;
и) метод лабораторной диагностики;
к) подпись лица, взявшего материал.
6. Бактериологическое исследование
Бактериологическое исследование с диагностической целью следует проводить двукратно ежедневно или через день в ранние сроки заболевания (не позднее 3-й недели болезни). В более поздние сроки высеваемость резко снижается. Высеваемость зависит от следующих факторов:
· срока обследования;
· кратности исследования;
· соблюдения правил взятия, транспортирования и посева материала;
· качества используемых материалов и сред.
При посеве материала с диагностической целью рекомендуется использовать 2 чашки со средой КУА, а по эпидемическим показаниям –
1 чашку.
6.1. Взятие материала
Все работы по взятию, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СП 1.2.036—95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I—IV групп патогенности».
Исследуемым материалом является слизь из верхних дыхательных путей, осаждающаяся при кашле на задней стенке глотки. Взятие материала может проводиться следующими способами: заднеглоточным тампоном, «кашлевыми пластинками». Заднеглоточным тампоном материал забирают как с диагностической целью, так и по эпидемическим показаниям. Метод «кашлевых пластинок» используют только с диагностической целью при наличии кашля. У детей грудного возраста рекомендуется брать материал заднеглоточным тампоном.
|
|
|
Взятие материала заднеглоточным тампоном должно проводиться специально выделенным инструктированным персоналом: медицинскими сестрами детских поликлиник и детских учреждений, помощниками эпидемиологов, лаборантами. Материал берут в детских поликлиниках в специально выделенном помещении, исключающем контакт с другими детьми, а также в детских учреждениях и на дому. При взятии материала должна быть полностью исключена возможность взаимного заражения обследуемых. Материал забирают натощак или через 2—3 ч после еды. Взятие материала у взрослых производят в бактериологических лабораториях и в детских учреждениях при обследовании на коклюш и паракоклюш.
Для взятия материала используют либо тампоны, изготовленные в лаборатории и предварительно (до стерилизации) изогнутые под тупым углом (110—120°), либо стерильные тампоны из хлопка или вискозы на алюминиевой основе в индивидуальной пластиковой пробирке (их можно изогнуть при извлечении из пробирки). Для увеличения числа положительных находок коклюшного и паракоклюшного микробов сбор материала рекомендуется производить двумя тампонами: сухим и смоченным забуференным физиологическим раствором по прописи Е. А. Кузнецова. Взятие материала сухим тампоном стимулирует кашель и повышает возможность выделения возбудителя при взятии материала вторым влажным тампоном. Материал с сухого тампона засевают на чашку Петри с одной из рекомендованных питательных сред обязательно на месте взятия, а с влажного посев можно произвести после доставки тампона в лабораторию, но не позднее чем через 2—4 ч после взятия материала.
Методика взятия материала сухим и увлажненным тампонами одинакова и сводится к следующему. Медицинский работник левой рукой фиксирует с помощью шпателя корень языка, а правой вводит тампон в полость рта, продвигая его за корень языка. Тампон не должен касаться слизистой щек, языка и миндалин. Кончиком тампона и выпуклой его частью касаются задней стенки глотки, проводя по ней справа налево 2—3 раза. Затем так же осторожно над шпателем извлекают тампон из полости рта. В обоих случаях посев желательно производить на 2 чашки Петри. Если ребенок проявляет признаки беспокойства, то стоящий за его спиной помощник сзади фиксирует голову.
|
|
|
Взятие материала «кашлевыми пластинками», кроме медицинского персонала, можно поручить родителям, хорошо проинструктировав их. Сбор материала производят на 2 чашки с питательной средой. Во время приступа кашля левой рукой снимают крышку чашки, а правой подносят ее ко рту на расстоянии 10—12 см так, чтобы капельки слизи из дыхательных путей попали на поверхность среды. Чашку в таком положении держат некоторое время (в течение 6—8 кашлевых толчков). При непродолжительном покашливании можно эту чашку поднести повторно. На питательную среду не должны попадать слюна, рвотные массы, мокрота. Затем чашку с питательной средой закрывают крышкой и доставляют в лабораторию.
В большинстве стран мира материалом для исследования служит слизь из носоглотки, которую отбирают носоглоточным тампоном или путем аспирации. Взятие может производиться только специально обученным персоналом. Мазки со слизистой носоглоткиберут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2—3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3—4 см для детей и 5—6 см для взрослых).
6.2. Доставка материала
Материал на увлажненных тампонах и посевы материала, сделанные в учреждении, необходимо направлять в лабораторию, сопроводив направлением (см. п. 5.3). При транспортировании следует оберегать материал от прямых солнечных лучей, сохраняя его при температуре 35—37 °C, для чего рекомендуется помещать весь материал в специальные ящики, биксы с защищающей прокладкой (марлевые ватники и др.) и грелкой. Транспортирование материала на влажных тампонах должно занимать не более 2—4 ч.
|
|
|
6.3. Ход исследования
Бактериологический метод исследования предусматривает выделение возбудителя заболевания путем посева на плотные питательные среды, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителей рода бордетелла до вида. Исследование продолжается в течение 5—7 дней.
Первый день исследования
1) Посев материала, взятого тампоном, производят последовательно на 1—2 чашки с питательной средой, предварительно обработанной антибиотиком для подавления сопутствующей микрофлоры (при взятии материала «кашлевыми пластинками» среду антибиотиками не обрабатывают). Материал, взятый тампоном, можно посеять следующими способами:
а) посев материала производят путем тщательного втирания его тампоном вначале по периферии среды чашки Петри в виде 4—5 площадок, а затем Z-образным штрихом в центре чашки, затем стерильным шпателем растирают центральные части посева, не касаясь площадок;
б) можно использовать метод секторных посевов (метод Gould): материал втирается тампоном в сектор A, после этого стерильным шпателем или петлей производят 4 штриховых посева из сектора A в сектор I, затем петлю / шпатель прожигают и аналогичным образом производят штриховые посевы из сектора I в сектор II и из II в III.
2) Засеянные чашки (тампоном или «кашлевыми пластинками») помещают в термостат при температуре 35—37 °C (лучше 35 °С) на 3 суток (72 ч). Для увлажнения воздуха в термостат ставят сосуд с водой.
|
|
|
