 |
Радиоиммунный анализ (РИА)
|
|
|
|
В основе метода лежит реакция антиген-антитело с применением метки антигена или антитела радионуклидом. В качестве метки используются 125I, 14C, 3H, 51Cr и другие радионуклиды. Образующиеся иммунные комплексы выделяют из системы и определяют их радиоактивность на счётчиках (β-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Широко распространён твёрдофазный вариант РИА с использованием меченых антител или антигенов, сорбированных в лунках полистироловых панелей.
РИА применяют для выявления антигенов микробов, вирусов, различных гормонов, ферментов, лекарственных веществ, иммуноглобулинов, а также других веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях 10-12–10-15 г/л.
Контрольные вопросы
Реакция иммунного бактериолиза: что это за реакция; что является антигеном, что – антителами, механизм реакции, методы постановки, практическое применение. Реакция иммунного гемолиза: необходимые ингредиенты, методика постановки; контроли, практическое применение. Реакция локального гемолиза в геле (реакция Йерне): принцип реакции, методика постановки, практическое применение. Реакция связывания комплемента: принцип реакции; что образуется при взаимодействии иммунной сыворотки со специфическим антигеном; что происходит с комплементом, если он присутствует при этом взаимодействии? Какова судьба комплемента в том случае, если между антигеном и антителами нет специфического сродства? С помощью какой реакции можно определить, что произошло с комплементом; почему используется именно эта реакция; каков видимый положительный результат РСК? Почему? Какое свойство комплемента используется в первой фазе РСК? Во второй фазе? Если конечным результатом РСК является гемолиз, что это означает – положительный или отрицательный результат? Объясните результаты: РСК+ + + +, РСК+ + +, РСК+ +, РСК+. Назовите ингредиенты первой системы РСК и ингредиенты второй системы РСК. Почему исследуемую сыворотку необходимо инактивировать? Как титруют комплемент? Гемолитическая сыворотка: что она содержит, как её получают, что такое титр и как его определяют? Какие животные используются для получения компонентов РСК? Методика постановки РСК на холоде. При постановке каких из перечисленных реакций необходимо участие комплемента: преципитации, флоккуляции, агглютинации, выявления неполных антител, иммунного бактериолиза, иммунного гемолиза, Йерне, РСК? Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – укажите последовательность событий при прямой реакции Кунса; необходимые ингредиенты. Что является антигеном, что – антителами, чем помечены антитела, как учитывается результат реакции, как выглядит положительный результат? Практическое применение – что можно определить с помощью этой реакции? Непрямая реакция иммунофлюоресценции – укажите последовательность событий при этой реакции, необходимые ингредиенты, что является антигеном, какие иммунные сыворотки применяются; практическое применение; преимущество непрямой РИФ по сравнению с прямой реакцией. Иммуноферментный анализ (ИФА) – принцип реакции; необходимые ингредиенты; укажите последовательность событий при постановке реакции с целью обнаружения антигена в исследуемом материале; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате, как он выглядит? Укажите последовательность действий при постановке ИФА с целью обнаружения антител в исследуемой сыворотке; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате? Иммуноблоттинг – принцип реакции; основные этапы; необходимые ингредиенты; как учитывается результат; преимущества реакции. Радиоиммунный анализ (РИА) – из каких основных этапов складывается реакция; чем помечены антитела или антигены, как учитывается результат? Иммунная-электронная микроскопия – принцип метода; основные этапы; необходимые ингредиенты; чем помечены антитела; как учитывается результат реакции.
|
|
|
|
|
|
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
В рабочей тетради заполните таблицу «Реакции иммунитета» в отношении реакций, разбираемых в рамках данной темы.
Работа студента на практическом занятии
Работу начать сразу с постановки 1 фазы РСК, но в тетрадь записать позже (см. ниже).
1. Реакция иммунного гемолиза. Посмотреть демонстрационную реакцию иммунного гемолиза, зарисовать в виде схемы, объяснить результат в опытной и в контрольных пробирках.
2. Реакция связывания комплемента:
а) разобрать РСК по таблице;
б) начертить в тетрадь схему постановки РСК в виде таблицы;
в) поставить вторую фазу РСК (первая фаза ставится в начале занятия);
г) разобрать диагностические препараты, необходимые для РСК;
д) учесть результат. Сформулировать вывод о наличии специфических антител в исследуемой сыворотке.
3. Реакция иммунофлюоресценции. Изучите таблицу, составьте в тетради схему постановки реакции; посмотрите диагностические сыворотки; определите – что содержит сыворотка, как приготовлена, для какой реакции (прямой или непрямой РИФ) она применяется. Посмотрите демонстрационный результат РИФ в люминесцентном микроскопе.
4. Иммуноферментный анализ (ИФА). Составьте в тетради схему постановки реакции в двух вариантах: для обнаружения антигена в исследуемом материале и для обнаружения антител в сыворотке. Ознакомьтесь с набором ингредиентов для диагностики ВИЧ-инфекции и гепатита В. Определите, что содержит каждый ингредиент и для чего он применяется.
5. Иммуноблоттинг. Составьте в тетради схему постановки реакции; посмотрите демонстрацию – результат реакции.
6. Радиоиммунный анализ (РИА). Составьте в тетради схему реакции.
7. Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ). Посмотрите демонстрацию – результат реакции, составьте в тетради схему реакции, укажите стрелками антиген (вирус) и меченые антитела.
|
|
|
ЗАНЯТИЕ 17
МЕДИЦИНСКИЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ, ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ
ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Вам предстоит изучить лечебно-профилактические и диагностические биологические препараты. Врачу любой специальности приходится применять на практике те или иные биологические препараты, а чтобы делать это грамотно и сознательно, необходимо усвоить общие принципы создания этих препаратов, их состав, применение.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать лечебно-профилактические и диагностические препараты: источники и методы получения, классификацию, практическое применение.
Исходный уровень знаний
Мы ещё раз подчёркиваем – раздел «Учение об инфекции. Иммунологические основы диагностики лечения и профилактики заболеваний» можно усвоить только путём систематического и последовательного изучения. Вспомните и повторите весь предыдущий материал: антигены и антитела; виды приобретённого иммунитета; получение иммунных сывороток; диагностические препараты.
Цель занятия
1. Научиться характеризовать диагностические и лечебно-профилактические препараты.
2. Научиться подбирать препараты для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.
План изучения темы
При изучении материала по лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам важно понять и усвоить основные принципы, с тем чтобы уметь применять их для анализа конкретных препаратов. Чтобы научиться быстро, проводить такой анализ, надо потренироваться в процессе самоподготовки. Повторите материал по конспекту лекций, разберите данную в этой лекции схему «Лечебно-профилактические и диагностические препараты», самостоятельно воспроизведите эту схему, не заглядывая в конспект. Затем выучите материал по этой теме по учебнику и по «Руководству к лабораторным занятиям». Выучите дополнительный материал по пособию. Ответьте на вопросы. Прочитайте план предстоящего занятия.
|
|
|
