Опыт действия лизоцима на различные виды микробов

В 5 пробирок наливают по 0,9 мл 0,5% раствора поваренной соли, после чего в первую пробирку добавляют 0,1 мл лизо­цима и готовят десятикратные разведения путем переноса из предыдущей пробирки в последующую по 0,1 мл до разведения 1: 10000 (четвертая пробирка). Пятая пробирка, контрольная, она не содержит лизоцима. Во все пробирки вносят по 0,5 мл стан­дартизованной одномиллиардной взвеси Е. coli, содержимое проби­рок перемешивают и помещают в термостат при 37° на 3 часа, после чего учитывают результаты и отмечают наиболь­шее разведение лизоцима, вызвавшее лизис микроорганизмов.

Для приготовления одномиллиардной взвеси бактерий необходимо взять односуточную культуру бакте­рий на скошенном МПА и смыть 0,5% раствором поваренной соли. Для смыва в пробирку с культурой микробов стерильно добавляют пипеткой 1—1,5 мл 0,5% раствора поваренной соли, вращая пробирку между ладонями. Полученную суспензию стерильной пипеткой перемещают в пустую пробирку и стандартизуют по оптическому стандарту, разводя имеющуюся суспензию микробов до 1 млрд. микробных тел в 1 мл 0,5% раствором хлористого натрия.

Морфология бактерий – размер, форма и взаимное расположение бактериальных клеток

Схема описания морфологии бактерий в мазке :

1. Форма

2. Размеры

3. Характер концов (для палочек)

4. Взаиморасположение

Контрольные вопросы:

1. Какие виды и формы иммунитета Вы знаете?

2. Перечислите факторы неспецифической резистентности.

3. Охарактеризуйте пути активации комплемента.

4. Механизмы действия интерферонов.

5. Назовите стадии фагоцитоза

6. Какова биологическая роль незавершенного фагоцитоза?

 

Обязательная:

1.Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с: ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2.Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

3.Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.

4.Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

 

Дополнительная:

1.Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.

3.Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4.Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 3: ИММУНИТЕТ: АНТИГЕНЫ И АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЕ, ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ.

 

Цель: Познакомиться со строением и свойствами антигенов и антител, познакомиться с основными формами иммунного реагирования. Познакомиться с особенностями протекания реакций Аг+Ат. Научиться осуществлять постановку ориентировочной и развернутой реакции агглютинации

 

Вопросы для самоподготовки:

1. Антигены. Химическая природа, антигенность, иммуногенность, специфичность, детерминантные группы. Гаптены. Т-зависимые и Т-независимые антигены. Микробные антигены,

2. Антитела. Классификация, строение. Биологическая роль.

3. Схема иммунного ответа. Первичный и вто­ричный иммунный ответ.

4. Динамика накопления антител, фазы антителообразования. Иммунизация и гиперим­мунизация, ревакцинация.

5. Механизм реакций АГ+АТ. Стадии и компоненты

6. Реакция агглютинации.

7. Получение диагностических препаратов (агглютинирующая сыворотка, диагностикум.

План:

Программа:

1.Строение и свойства антигенов.

2.Строение и свойства антител.

3.Основные формы иммунного реагирования.

4.Методы выявления и идентификации специфических антигенов, основанные на реакциях связывания антигена с антителами, проявляющихся изменением свойств антигена: реакция агглютинации.

 

Демонстрация:

1. Наборы ингредиентов для реакции агглютинации.

2. Постановка ориентировочной реакции агглютинации

3.Результаты постановки развернутой реакции агглютинации

 

Задание студентам:

1.Зарисовать схемы первичного и вторичного иммунного ответа, отметить сходства и различия.

2.Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с целью идентификации выделенной чистой культуры бактерий. Сделать заключение по результатам реакции.

3. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения серотипа бактерий.

4.Протоколировать и оценить результаты развернутой реакции агглютинации.

 

Информационный материал

ОСНОВНАЯ СХЕМА ИММУННОГО ОТВЕТА

 

1. Антиген, попадая в организм, в первую очередь сталкивается с естественными барьерами – кожей, слизистыми оболочками и т.д. Многим микроорганизмам не удается преодолеть их.

2. Если вторжение все же произошло, антиген встречается с фагоцитирующими клетками.

3. Макрофаг (фагоцит) пожирает и переваривает антиген.

4. Если он не справляется с ним самостоятельно, то представляет на поверхности своей мембраны информацию о проникшем враге. Это сигнал Т- или В- лимфоцитов.

5. В ответ на полученный сигнал о вторжении в периферических органах иммунной системы начинается отбор клеток, необходимых для борьбы именно с этим антигеном. Образуется клон соответствующих клеток. Одновременно формируется небольшое количество клеток памяти.

6. «Солдаты» вступают в бой.

 

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ОТВЕТ ПО КЛЕТОЧНОМУ ТИПУ

Иммунный ответ на различные антигены может происходить по-разному. Если в борьбу вступают Т-клетки, это называется иммунный ответ по клеточному типу.

1. Антиген встречает первые препятствия – кожу и т.д.

2. Макрофаг поглощает антиген и представляет его на мембране.

3. Информация о противнике передается Т-хелперу.

4. Т-хелпер способствует формированию клона Т-киллеров. Образуются клетки памяти.

5. Т- киллеры способны разрушать вторгшиеся «чужие» клетки и клетки, зараженные вирусом.

6. Реакция завершается при участии Т- подавляющих клеток.

 

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ОТВЕТ ПО ГУМОРАЛЬНОМУ ТИПУ С ПОМОЩЬЮ Т- ХЕЛПЕРОВ

 

При проникновении бактерий и некоторых вирусов может понадобиться гуморальный ответ.

Возможны два его варианта: с участием Т- хелперов и без их вмешательства.

1. Проникновение антигена.

2. Поглощение антигена и появление информации о нем на макрофаге.

3. Передача информации Т- хелперу.

4. Т – хелпер способствует активации В-клеток. Образуются клетки памяти.

5. В - клетки превращаются в плазматические клетки, способные к синтезу антител.

6. Плазматическая клетка вырабатывает именно те антитела, которые нужны для борьбы с поступившим антигеном. Они связывают его, образуя иммунный комплекс.

7. Комплекс антиген – антитело захватывается макрофагом и разрушается.

8. Завершение иммунологической реакции происходит при участии Т- подавляющих клеток.

 

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ОТВЕТ ПО ГУМОРАЛЬНОМУ ТИПУ БЕЗ ПОМОЩИ Т- КЛЕТОК

1. Проникновение антигена.

2. Поглощение антигена и представление его на макрофаге.

3. Информация с макрофага передается на В – клетку.

4. В – клетки превращаются в плазматические клетки, вырабатывающие антитела.

5. Антитела связывают антигены.

6. Комплекс антиген – антитело удаляется макрофагом.

 

Для развития эффективного иммунного ответа необходимо участие целого ряда эффекторных и регуляторных клеток иммунной системы, клеток, участвующих в реакциях воспаления, гемопоэтических и других типов клеток. Взаимодействие между этими клетками осуществляется с помощью цитокинов.

Цитокины – эндогенные низкомолекулярные белковые регуляторы, принимающие участие в наиболее эффективном проявлении иммунного ответа.

Цитокины в основном играют регулирующую роль в межклеточных взаимодействиях, активируя или, ингибируя активность определенных клеток. Некоторым цитокинам свойственна прямая эффекторная функция.

Цитокины секретируются разными типами клеток, в основном разными популяциями лейкоцитов, и действуют локально от клетки к клетки, соединяясь со специфическими высокоаффинными рецепторами.

Термином «цитокины» объединяют разнообразные факторы роста, интерфероны, хемокины и интерлейкины. В настоящее время идентифицировано около 80 цитокинов. Однако предполагают, что их количество приближается к 1000.

 

Реакция агглютинации

Агглютинацией называется склеивание микробов или других клеток при воздействии на них иммунной сыворотки, со­держащей антитела-агглютинины. Реакция агглютинации про­является в том, что в равномерной взвеси клеток, например, бактерий, при добавлении иммунной сыворотки происходит скучивание клеток, образование зернышек или хлопьев, которые постепенно оседают на дно, жидкость же над осадком совер­шенно просветляется. Однако зернышки или хлопья образуются только в том случае, если реакция происхо­дит в присутствии электролитов. Таким образом, для про­явления реакции агглютинации нужно иметь: 1) антиген (агглютиноген) в виде взвеси клеток, 2) антитела (агглютини­ны в виде иммунной сыворотки) и 3) электролиты — обычно физиологический раствор.

Внешнее проявление положительной реакции агглютинации бактерий имеет двоякий характер в зависимости от свойств антигена: у безжгутиковых бактерий, имеющих только один соматический или 0-антиген, происходит склеивание непосред­ственно самих микробных клеток, и образующиеся кучки имеют вид мелких компактных зернышек. Такая агглютинация называется тонкозернистой; она происходит медленно — в течение 18—22 часов. У бактерий со жгутиками имеется два антигена — соматический, О-антиген, в самой клетке и жгутиковый, Н-антиген, находящийся в жгутиках. Клет­ки склеиваются друг с другом жгутиками и образуют рыхлые крупные хлопья.

Такая агглютинация называется крупнохлопчатой; она на­ступает быстро — в течение 2—4 часов.

 

Реакция агглютинации, благодаря своей специфичности, простоте постановки и демонстративности, получила широкое распространение в микробиологической практике для диагноза многих инфекционных заболеваний: брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, сыпного тифа, бруцеллеза и т. д. Ею пользуются с диагностической целью в двух направлениях.

1. Для определения выделенного из какого-либо субстрата неизвестного микроба. В этом случае агглютинацию ставят с определенной, заранее приготовленной агглютинирующей сывороткой, полученной путем иммунизации кроликов опреде­ленным видом бактерий и, следовательно, содержащей агглютицины в отношении этих бактерий.

В качестве антигана берут культуру неизвестного иссле­дуемого микроба; положительный (результат (реакции указы­вает, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления агглютинирующей сыворотки.

2. Для обнаружения агглютининов к тому или другому оп­ределенному виду бактерий в сыворотке больного. В этом случае для агглютинации берут определенную лабораторную культуру бактерий (или несколько культур разных видов) в ка­честве антигена и сыворотку больного; положительный резуль­тат агглютинации указывает на то, что в сыворотке больного имеются агглютинины к определенному, известному виду мик­роба, т. е. что данный микроб является возбудителем заболе­вания, в процессе которого в сыворотке больного накопились защитные антитела.

В качестве примера можно привести использование реакции агглюти­нации для диагноза брюшного тифа. На первой неделе болезни в посеве из крови больного обнаруживают бактерий и для того, чтобы установить, что эти бактерии являются брюшнотифозными палочками, ставят реакцию с лабораторной брюшнотифозной агглютинирующей сывороткой: если наступит агглютинация выделенных из крови больного неизвестных бакте­рий, это значит, что они являются брюшнотифозными бактериями.

Начиная со второй недели болезни, диагноз брюшного тифа устанав­ливают путем обнаружения в сыворотке больного антител-агглютининов. Для этого ставят реакцию агглютинации с сывороткой больного и с лабо­раторной культурой брюшнотифозных бактерий (обычно в опыт вводят еще культуры паратифа А и паратифа В): наступившая агглютинация покажет наличие агглютининов к брюшнотифозной палочке (или одной из паратифозных) в сыворотке больного, которые появились у него в про­цессе заболевания брюшным тифом. Эта реакция носит наименование реакции Видаля и широко применяется для диагноза брюшного тифа. Аналогичная реакция агглютинации для постановки диагноза сыпного тифа называется реакцией Вейль-Феликса, для диагноза бруцеллеза — реакцией Райта.

⇐ Предыдущая12345678Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: