 |
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
|
|
|
|
1.Реакция кольцепреципитации по Асколи. В узкую пробирку с небольшим количеством неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем Аг. экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.
Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг. Она нашла также применение в судебной медицине для определения видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.
Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro.
2. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в реакции преципитации в геле по Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы. При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.
|
|
|
Реакция флоккуляции
Тип реакции: частный случай реакции преципитации (нейтрализации).
Исследуемый материал: антитоксическая сыворотка.
Диагностический препарат: токсин или анатоксин в строго определенном количестве.
Принцип метода: к серийным разведениям антитоксической сыворотки добавляют одинаковое количество антигенных единиц токсина или анатоксина.
Положительный результат - образование хлопьев преципитата (флоккулята); отрицательный результат - прозрачная жидкость.
Применение: определение активности антитоксической сыворотки (количества ME - международных единиц в 1 мл сыворотки).
Трактовка результатов: первичная (инициальная) флоккуляция наступает в пробирке, где АГ (антиген) и АТ (антитело), находятся в эквивалентных количествах. Зная количества ингредиентов в пробирке, где произошла инициальная флоккуляция, можно рассчитать активности антитоксической сыворотки. Например, инициальная флоккуляция наступила в пробирке, где находится 0,02 мл сыворотки и 4 АЕ (антигенных единиц) токсина или анатоксина. Составляем пропорцию: 0,02 мл сыворотки эквивалентно 4 АЕ токсина или анатоксина.
Одна АЕ - это такое количество токсина или анатоксина, которое связывается одной ME антитоксической сыворотки, следовательно, 0,02 мл данной сыворотки содержит 4 ME.
Титр антитоксической сыворотки - это количество ME в 1 мл этой сыворотки.
В данном случае, составив пропорцию, можно определить титр:
0,02 мл - 4 ME
1 мл - ХМЕ
Х = (1x4): 0,02 = 200 ME
Контрольные вопросы
|
|
|
1. Какие реакции называются аллергическими?
2.Что такое анафилаксия?
3. Назовите особенности реакций гиперчувствительности III типа.
4. Как осуществить постановку аллергической пробы?
5. Для чего применяется реакция Асколи?
6. Где нашли применение кожные аллергические пробы?
Список литературы:
Обязательная:
1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с: ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).
2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.
3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.
4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.
Дополнительная:
1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.
3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.
4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.
Тема№ 7: ИММУНИТЕТ: ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕНЫХ АНТИТЕЛ ИЛИ АНТИГЕНОВ. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ.
Цель: Изучить основные иммунобиологические препараты, их особенности, получение и применение в медицине. Получить представление о принципах приготовления диагностических препаратов, меченых флюорохромами, радиоактивными элементами, ферментами; чувствительности отдельных иммунных реакций и областях их применения..
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
1. Вакциопрофилактика и вакцинотерапия.
2. Состав и классификация вакцин.
3. Живые вакцины, получение и применение.
4. Инактивированные вакцины, получение и применение.
5. Синтетические и полусинтетические вакцины, получение и применение.
6. Ассоциированные вакцины.
7. Календарь профилактических прививок.
8. Серопрофилактика и серотерапия.
9. Сывороточные иммунные препараты.
10. Получение и применение моноклональных антител.
11. Иммуномодуляторы.
12. Реакции с мечеными диагностическими компонентами (ИЛМ, РИФ, ИФА, РИА, иммуноблоттинг).
План
Программа
|
|
|
1. Состав и классификация вакцин
2. Сывороточные иммунные препараты, состав и классификация.
3.Иммуномодуляторы
4. Реакции с мечеными диагностическими компонентами
Демонстрации.
1. Вакцинные иммунобиологичские препараты, применяемые в РФ.
2. Сывороточные иммунобиологические препараты, применяемые в РФ
3. Схема получения моноклональных антител
4. Иммуноферментные тест-системы
Задание студентам
1. Заполнить таблицу: Классификация вакцин
2. Определить, к какой группе вакцин относится выданный иммунобиологический препарат, рассказать о способе его получения, дать характеристику иммунитета, индуцированного этим препаратом
3. Определить, к какой группе сывороточных препаратов относится выданный иммунобиологический препарат, рассказать о способе его получения, дать характеристику иммунитета, индуцированного этим препаратом.
4. Зарисовть схему получения моноклональных антител
Информационный материал.
Иммуно-люминесцентный метод (ИЛМ, РИФ) Метод флуоресцирующих антител (МФА, иммунофлуоресценция) (англ. Immunofluorescence) — лабораторный иммунологический метод качественного определения антигена по известному глобулину или антител по известному антигену.
|
|
|
