 |
Реакции Вассермана (серодиагностика сифилиса)
|
|
|
|
Тип реакции: РСК.
Исследуемый материал: сыворотка обследуемого.
Диагностические препараты:
1. Неспецифический кардиолипиновый АГ (антиген) для реакции Вассермана - спиртовая липидная вытяжка из миокарда быка, обогащенная холестерином.
2. Специфический ультраозвученный трепонемный АГ – содержит АГ культуральных трепонем, разрушенных ультразвуком.
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
Качественный метод - сыворотку обследуемого вносят в 2 лунки, добавляют соответственно АГ 1 и АГ 2, а затем в обе лунки - дополнительные ингредиенты реакции. Применение: отбор лиц для постановки количественной реакции Вассермана.
В данном случае обследованы пациенты... (результат, вывод).
Количественный метод - диагностика сифилиса, контроль эффективности терапии. Готовят разведения положительной сыворотки (по качественной реакции). К каждому разведению добавляют трепонемный ультраозвученный АГ (АГ2) и дополнительные ингредиенты реакции. Положительный результат - ЗГ (задержка гемолиза), отрицательный - Г (гемолиз).
Результат интерпретируют, основываясь на количестве антител.
РСК с целью раздельного определения IgM и IgG
Тип реакции - реакция связывания комплемента.
Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).
Диагностический препарат - известный антиген для РСК.
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
|
|
|
Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.
Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.
Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.
Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.
В данном случае...(результат и вывод).
Для получения достоверного результата необходимо, чтобы все известные ингредиенты были взяты в определенных количествах (рабочие дозы). Для этого колмплемент и гемолитическую сыворотку предварительно титруют и вычисляют их рабочие дозы.
Титрование комплемента
Тип реакции - реакция иммунного гемолиза.
Исследуемый материал - свежая сыворотка крови.
Дополнительные ингредиенты реакции: гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в рабочей дозе и 3% взвесь эритроцитов барана).
Положительная реакция - гемолиз; отрицательная - задержка гемолиза.
Титр комплемента - наибольшее разведение комплемента, в котором наблюдается гемолиз.
Применение: для определения титра комплемента. Если речь идет о титровании комплемента перед постановкой РСК, то титр определяют для дальнейшего расчета рабочей дозы. Используется разведение на 25% концентрированнее, чем титр.
4.РСК с целью раздельного определения IgM и IgG в сыворотке больного сыпным тифом.
Тип реакции - реакция связывания комплемента.
Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).
Диагностический препарат - известный антиген для РСК.
|
|
|
Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).
Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.
Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.
Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.
Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.
Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.
Контрольные вопросы.
1. Назовите особенности противовирусного иммунитета.
2. Что такое антибактериальный иммунитет?
3. Как получают комплемент для диагностических целей?
4. Что такое противоопухолевый иммунитет?
5. Для чего проводится раздельное опеделениеIgG и IgM?
Список литературы:
Обязательная:
1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с: ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).
2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.
3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.
4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.
Дополнительная:
1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.
3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.
4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.
Тема № 6: Иммунитет: ГНТ И ГЗТ. АНТИТОКСИЧЕСКИЙ ИММУНИТЕТ.
Цель:. Познакомиться с особенностями ГНТ и ГЗТ, с механизмами антитоксического иммунитета. Научиться осуществлять постановку реакций преципитации и нейтрализации, интерпретировать их результаты
|
|
|
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
1. Особенности реакций гиперчувствительности, их классификация и значение.
2. Реакции гиперчувствительности I типа, механизм их развития.
3. Реакции гиперчувствительности II типа, механизм их развития
4. Реакции гиперчувствительности III типа, механизм их развития
5. Реакции гиперчувствительности IV типа, механизм их развития
6. Антитоксический иммунитет и методы его изучения
7. Реакции преципитации.
8. Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vivo и in vitro
9. Кожные аллергические пробы.
План
Программа
1. Особенности аллергических реакций.
2. Класссификация аллергических ракций.
3.Антитоксический иммунитет.
4. Реакции преципитации.
5. Особенности постановки и применение кожных аллергических проб
Демонстрации.
1.Таблицы и схемы с механизмами различных реакций гиперчувтвительности.
2.Результат реакции Асколи
3. Результат реакции Оухтерлони
4. Результат реакции флоккуляции
Задание студентам.
1.Заполнить таблицу: Механизм основных типов реакции гиперчувствительности
2.Осуществить постановку реакции по Асколи.Учесть ее результаты.
3.Осуществить остановку реакции преципитации по Оухтерлони.
Учесть ее результаты.
4. Учесть результат реакции флоккуляции
Информационный материал.
Иммунитет антитоксический – невосприимчивость организма к инфекционным болезням, возбудители которых продуцируют экзотоксины. Иммунитет антитоксический достигается активной иммунизацией, введением в организм анатоксина, вызывающего синтез антитоксинов, антитоксических сывороток или пассивной иммунизацией.
Антитоксический иммунитет
Беринг еще только готовил свое открытие к научной публикации, а Эрлих — этот «неисчерпаемый творец руководящих идей» (так говорил о нем сам И. И. Мечников) — узрел в новом факте проблему большой биологической значимости. Впрыскивая животным растительные яды — рицин, касторовое масло, абрин, Эрлих убедился, что во всех этих случаях в крови образуются антитоксины.
|
|
|
Итак, из экспериментального наблюдения, сделанного в соседней комнате, Эрлих вывел учение об антитоксическом иммунитете. Он показал, что такой иммунитет может быть наследственным, так как мать передает его потомству через плаценту и с молоком. Развивая далее идею, Эрлих выдвигает объяснение, подсказанное его опытами с красителями тканей. Он утверждает, что процессы питания клеток и реакции иммунитета — эти два основополагающих процесса жизни происходят по единому механизму. Клеточное ядро, по Эрлиху, имеет многочисленные группы атомов, которые могут отщепляться от ядра и присутствовать в протоплазме клетки и даже на ее поверхности. Исследователь дает им название «боковых цепей», «рецепторов» (от recipio — воспринимать). Заметим, что термин «рецептор» является одним из наиболее распространенных в сегодняшней иммунологии. Соединение клетки с питательными веществами зависит от присутствия в ней специальных рецепторов, имеющих сродство с химической структурой питательных веществ. Другие рецепторы воспринимают токсины или иные антигены, и только вступив в прочный химический контакт 45 клеткой, они побуждают ее вырабатывать противоядие — антитоксины.
Антитоксины
Антитоксины — антитела, возникающие в сыворотке крови при попадании в организм токсинов или анатоксинов. Способны взаимодействовать с токсинами, нейтрализуя их активность. Антитоксины могут синтезироваться в результате естественного контакта организма с токсинами, при искусственном введении их в организм животных в сублетальных дозах и при иммунизации анатоксинами человека или животных. Широкое применение в медицине имеют антитоксические сыворотки против токсинов, выделяемых патогенными микроорганизмами (палочками дифтерии, столбняка, газовой гангрены и ботулизма), используемые для профилактики и лечения этих болезней, а также сыворотки против ядов змей, насекомых. Антитоксины, применяемые в медицинской практике в виде антитоксических сывороток, получают путем гипериммунизации лошадей возрастающими дозами токсинов. Антитоксины против ботулизма и газовой гангрены поливалентны, то есть содержат антитела к нескольким токсинам. Сила антитоксинов измеряется количеством антитоксических единиц (АЕ) в 1 мл, способ определения которых зависит от вида антитоксина. Сыворотки, содержащие антитоксины, высушивают в вакууме и сохраняют при низкой температуре.Антитоксины (от греч. anti — против + токсины) — антитела, которые образуются в организме животных и человека в ответ на появление токсинов микробного, растительного или животного происхождения, специфически обезвреживают соответствующие токсины и являются мощным фактором антитоксического иммунитета. Наибольшее значение имеют антитоксины, которые вырабатываются против экзотоксинов или растворимых токсинов микробов — возбудителей высокотоксигенных инфекций: дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма, а также дизентерийных бактерий Григорьева—Шига, скарлатинозного стрептококка, стафилококка. Антитоксический иммунитет может быть воспроизведен искусственно активной иммунизацией анатоксинами или пассивной иммунизацией антитоксическими сыворотками.
Содержание антитоксинов в антитоксических сыворотках выражается в антитоксических единицах (АЕ). О напряженности антитоксического иммунитета можно судить по содержанию антитоксинов в сыворотке крови. Наличия в 1 мл крови 1/30 АЕ дифтерийного антитоксина достаточно, чтобы обеспечить невосприимчивость ребенка к дифтерии; при этом реакция Шика у него будет отрицательной. Защита от столбняка, по данным Регамея (R. Н. Regamey, 1965), обеспечивается присутствием в 1 мл крови 0,005 АЕ противостолбнячного антитоксина.
Антитоксины применяются в медицинской практике в виде антитоксических сывороток (противодифтерийная, противостолбнячная, противодизентерийная Григорьева—Шига, противогангренозные, противоботулинические, противоскарлатинозная, противостафилококковая), которые готовят путем гипериммунизации лошадей возрастающими дозами соответствующих токсинов или анатоксинов. В жидких сыворотках антитоксины довольно лабильны: они разрушаются при t° 100° и ослабляются при 60—70°; инактивируются под влиянием прямого действия солнечных лучей. После лиофильного высушивания под вакуумом при низких температурах А. становятся более стабильными и хорошо сохраняются в течение многих лет.
За 1 АЕ дифтерийного А., по предложению Эрлиха (P. Ehrlich), принимается такое количество противодифтерийной сыворотки, которое в смеси с Lt (Limes tod) дифтерийного токсина вызывает смерть морской свинки весом 250 г в течение 96 час.
Lt дифтерийного токсина устанавливается в опытах на морских свинках при помощи стандартной противодифтерийной антитоксической сыворотки. Интернациональные антитоксические единицы (АЕ) содержатся в определенных количествах (мг) эталонных сывороток, выпускаемых международной лабораторией биологических стандартов Института сывороток в Копенгагене. Производственные институты СССР снабжаются стандартными антитоксическими сыворотками из Института контроля медико-биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича.
Реакция флоккуляции нашла применение лишь для определения титра противодифтерийной сыворотки (по последним данным, образование флоккулята при взаимодействии антитоксической сыворотки с токсином следует отнести за счет присутствия в сыворотке побочных антител, поэтому результаты реакции флоккуляции могут не всегда совпадать с результатами определения титра A. in vivo).
Антитоксины обычно связаны с ү- и β2-глобулинами противодифтерийной сыворотки. Нортроп (L. Н. Northrop, 1941) изолировал дифтерийный антитоксин в виде кристаллического глобулина с мол. весом (мол. массой) 90 500, однако химическая структура А. до сих пор остается неустановленной. При переваривании пепсином молекула иммунного глобулина расщепляется на две половины, из которых одна — пассивный белок — лишена антитоксических свойств и легко коагулируется теплом, а другая — носитель антитоксина — гораздо более резистентна к пепсину и прогреванию. На этом принципе основан метод очистки антитоксинов «диаферм» (А. В.. Бейлинсон), в результате которой их анафидактогенные свойства (см. Анафилаксия) ослабляются. При применении очищенных антитоксинов симптомы сывороточной болезни (см.) реже наблюдаются и она легче протекает.
В соответствии с теорией Борде (J. Вогdet), которая нашла подтверждение в опытах с чистыми токсинами и А., реакция токсин — антитоксин протекает по законам адсорбции. В организме больного А. нейтрализуют лишь свободный токсин, который еще не связан с чувствительными тканями. Поэтому эффективность серотерапии зависит от срока применения антитоксической сыворотки. При подозрении на заболевание дифтерией, столбняком, ботулизмом и другими токсигенными инфекциями антитоксическую сыворотку следует вводить возможно скорее, чтобы антитоксин нейтрализовал свободный токсин до фиксации его восприимчивыми тканями. Отсюда понятно, почему серопрофилактика столбняка, ботулизма и других токсигенных инфекций оказывается эффективнее серотерапии. Выраженными антитоксическими свойствами обладают иммунные сыворотки против змеиных ядов.
А. сохраняют значение и в эпоху антибиотиков, так как последние, оказывая бактериостатическое действие на микробы, не обезвреживают их токсины. Поэтому при таких заболеваниях, как дифтерия, столбняк, ботулизм, при которых имеет место токсемия и патологический процесс почти всецело обусловлен повреждающим действием токсина на чувствительные ткани, серотерапия специфическими А. безусловно показана наряду с антибиотикотерапией и другими способами лечения.
|
|
|
|
|
|
