Приготовление О- и Н-антигенов

Соматический 0-антиген бактерий является по своему составу сложным химическим комплексом, специфичность ко­торого определяется глюцидолштоидополипептидпым компо­нентом.

Этот антиген устойчив к воздействию температуры, спирта в противоположность жгутиковому Н-антигену. Эта различная устойчивость О- и Н-антигенов к нагреванию и спирту поло­жена в основу приготовления 0-антигена.

Наиболее простым способом приготовления 0-антигена является прогревание пробирки со смывом агаровой культуры соответствующего микроорганизма в кипящей водяной бане в течение 1,5—2 часов (по Кауфману достаточно 30 минут).

Для приготовления спиртового 0-антигена берут возможно более густую взвесь микробов в физиологическом растворе (смыв агаровой культуры). К определенному объему взвеси маленькими порциями медленно добавляют равный объем абсолютного этилового спирта, причем после добавления каж­дой его порции пробирку с антигеном встряхивают. После до­бавления всего объема спирта пробирку помещают в термостат на 12—24 часа, после чего в нее добавляют физиологический раствор в количестве половины объема жидкости, содержащей­ся в данной пробирке (концентрация спирта—33%). Перед употреблением полученный антиген разводят еще в 6 раз.

Приготовление жгутикового Н-антигена основано на том, что обработка подвижных микробов формалином приводит к по­нижению активности соматического антигена. Для приготовле­ния жгутикового антигена к взвеси агаровой культуры микро­бов в физиологическом растворе добавляют 0,2% формалина, после чего взвесь выдерживают в термостате при 37° в течение 24 часов.

Агглютинирующая диагностическая сыворотка содержит антитела, полученные из сыворотки крови гипериммунизироанных животных, предназначена для постановки реакций агглютинации

Определение антигенного состава Х-культуры с помощью неадсорбированных и адсорби­рованных агглютинирующих сывороток.

Ориентировочная реакция агглютинации

Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на пред­метном стекле. Наносят пастеровской пи­петкой каплю физиологического раствора, затем в ней тщательно размешивают небольшое количество куль­туры до получения гомогенной взвеси бактерий. Если отсутствует реакция самооглютинации, продолжают исследование. Рядом с первой каплей наносят каплю сыворотки в разведении 1: 10, 1: 20 и смешивают обе капли. Через несколько минут в случае положительного результата наблюдается образование агглютината, которое еще ускорится, если слегка пока­чивать стекло

2. Реакция развернутой агглютинации с целью серотипирования E. сoli

Применяется для подтверждения результатов ориентировочной реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

Сначала готовят основное разведение взвеси микроорганизмов (1:50). из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 0,5 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда (0,5 + 0,5 физраствора). Из последней пробирки 0,5 мл разведенной взвеси удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.

В каждую пробирку с разведениями и в контрольную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли моновалентной сыворотки. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре.

Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками: "++++" — полная агглютинация (хлопья агтлютината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" — неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), "++" — частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жидкость слегка мутная), "+" — слабая, сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "—" — отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).

 

Контрольные вопросы:

1.Какими свойствами обладают антигены?

2.Какие виды антител Вы знаете?

3.Назовите стадии антителообразования

4.Каков механизм реакций иммунитета.

5.Перечислите виды реакций аглютинации.

6.Охарактеризуйте основные способы получения иммунных сывороток.

 

Список литературы:

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с: ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

 

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

 

 

 

Тема № 4: ИММУНИТЕТ: ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ПАМЯТЬ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ.ТРАНСПЛАНТАЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ.ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ.

Цель: Познакомиться с механизмами иммунологической памяти и толерантности. Изучить особенности трансплантационного иммунитета. Научиться ставить реакцию Видаля, РНГА. Уметь интерпретировать результаты реакций.

Вопросы для самоподготовки:

1. Иммунологическая память.

2. Иммунологическая ареактивность

3. Иммунологическая толе­рантность.

4. Трансплантационный иммунитет.

5. Реакции агглютинации (РА). Нагрузочные реакции. РНГА

6. Критерии серодиагностики: дигностический титр, нарастание титра антител.

7. Применение реакций АГ+АТ в диагностике: изучение антигенного состава микроорга­низмов (серотипирование), экспрессдиагностика, индикация антигенов в объектах внешней среды, серодиагностика.

План:

Программа:

1. Иммунологическая память и толерантность

2. Трансплантационный иммунитет

3. Критерии серодиагностики

3. Реакции агглютинации (РА) для серодиагностики брюшного тифа

4. Нагрузочные реакции. РНГА

Демонстрация:

1. Диагностические препараты для выявления антител (диагностикумы).

2. Результаты постановки реакции агглютинации по Видалю.

3. Результаты постановки РНГА.

 

Задание студентам:

1. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител к возбудителю брюшного тифа. Протоколировать и оценить результаты реакции.

2. Поставить РНГА с целью серодиагностики. Оценить результаты РНГА, поставленной с целью серодиагностики.

 

Информационный материал

Иммунологическая память

При повторной встрече с антигеном орга­низм формирует более активную и быструю иммунную реакцию — вторичный иммунный ответ. Этот феномен получил название имму­нологической памяти.

Иммунологическая память имеет высо­кую специфичность к конкретному анти­гену, распространяется как на гуморальное, так и клеточное звено иммунитета и обус­ловлена В- и Т-лимфоцитами. Она обра­зуется практически всегда и сохраняется годами и даже десятилетиями. Благодаря ней наш организм защищен от повторных антигенных интервенций.

Известно два наиболее вероятных механизма формирова­ния иммунологической памяти.

1.Предполагает длительное сохранение анти­гена в организме. Этому имеется множество примеров: инкапсулированный возбудитель туберкулеза, персистируюшие вирусы кори, полиомиелита, ветряной оспы и некоторые другие патогены длительное время, иногда всю жизнь, сохраняются в организме, под­держивая в напряжении иммунную систему. Вероятно также наличие долгоживущих де­ндритных АПК, способных длительно сохра­нять и презентировать антиген.

2.Предусматривается, что в про­цессе развития в организме им­мунного ответа часть антигенореактивных Т- или В-лимфоцитов дифференцируется в малые по­коящиеся клетки, или клетки иммунологической памяти. Ониотличаются высокой спе­цифичностью к конкретной антигенной детер­минанте и большой продолжительностью жизни (до 10 лет и более), активно циркулируют в организме, но постоянно возвращаются в места своего про­исхождения за счет хоминговых рецепторов. Это обеспечивает постоянную готовность иммунной системы реагировать на повторный контакт с антигеном по вторичному типу.

Феномен иммунологической памяти широко используется в практике вакцинации людей. Осуществляют это 2-3-кратными при­вивками при первичной вакцинации и перио­дическими повторными введениями вакцинно­го препарата — ревакцинациями.

Однако феномен иммунологической памяти имеет и отрицательные стороны. Например, повторная попытка трансплантировать уже однажды отторгнутую ткань вызывает — криз отторжения.

⇐ Предыдущая12345678Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: